核苷酸结合寡聚蛋白2在胃腺癌及其相关疾病组织中的表达及意义

核苷酸结合寡聚域蛋白质家族(NOD)广泛存在于植物、线虫、脊椎动物和人类的细胞内,在遗传上高度保守.其中NOD2基因是第一个被发现的人类克罗恩病(CD)易感基因.随着分子生物学和遗传学研究的深入,已被认为是肠道上皮细胞的细菌识别感受分子.本实验旨在探讨NOD2蛋白在胃腺癌及其相关疾病中的表达及幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对其表达的影响.     

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145,miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异;不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后,Q-PCR检测miR-145表达变化;miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后,CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,Western blot检测ADAM19蛋白表达;Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后,SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞,再用5 μmol/L吉非替尼干预,Western blot检测ADAM19蛋白的表达;采用siRNA抑制ADAM19表达,再用5 μmol/L吉非替尼干预,CCK8检测细胞活力;采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法,观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示,与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较,肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低;5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后,miR-145表达显著上调;转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区;Western blot结果显示,5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后,两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低;miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞,之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗,ADAM19蛋白表达下调;siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达,再给予5 μmol/L吉非替尼治疗,CCK8结果显示,两种细胞的细胞活力显著降低;过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后,显著抑制皮下肿瘤生长,并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性,其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域,从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。     

老年人便秘研究的若干问题

自第43届世界卫生大会上正式通过《疾病和有关健康问题的国际统计分类》(The International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems 10th Revision,ICD10),并将便秘明确列为一个独立的病种,便秘已得到国内外专家学者的广泛关注.目前各国医学界对便秘的认识不尽一致,我国学者结合中国的实际情况在2006年制定的Rome Ⅲ诊断标准的基础上[1]制定了便秘诊治指南[2].     

NOD2和TLR9激动剂诱导胃癌细胞SGC-7901合成IL-8的研究

目的探讨TLR9和NOD2在胃癌细胞SGC-7901中表达及诱导IL-8合成过程中的相互作用及意义。方法用不同浓度的NOD2激动剂（MDP）和TLR9激动剂（未甲基化的CpG ODN）以不同时间间隔单独或联合作用于体外培养的胃癌细胞SGC-7901,用ELISA法测定上清中的IL-8,用RT-PCR和Western Blot测定TLR9和NOD2的表达。数据采用SPSS13.0进行统计分析。结果相对于未刺激组,MDP和未甲基化CpG ODN能使SGC-7901NOD2和TLR9mRNA和蛋白的表达增强;细胞培养上清中IL-8的分泌增强,并呈现时间依赖性和浓度依赖性,差异具有统计学意义（P〈0.05）,8h浓度差异无统计学意义,二者共同作用还能协同诱导SGC-7901合成IL-8,也呈现时间和浓度依赖性,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 NOD2和TLR9在胃癌细胞SGC-7901中有所表达,二者在诱导SGC-7901分泌炎性因子的过程中有协同作用。     

湖北地区肾综合征出血热与HLA-DRB基因多态性关联的研究

目的 探索湖北省汉族人白细胞抗原(HLA)-DRB基因多态性与肾综合征出血热(HFRS)的相关性.方法 采用PCR/SSP方法对湖北省汉族病例组114例、对照组213例进行HLA-DRB基因多态性分析,同时采用RT-heminested PCR方法对汉坦病毒(HV)进行病毒分型.结果 HLA- DRB1*0401-0411、*1101-1105基因频率在HFRS患者组明显升高,分别为3.1%、2.2%、15.7%,与对照组比较,RR=13.87、9.72、2.00,χ2=10.006、6.324、6.472,P<0.05;DRB1*1501-1502、DRB4、DRB5基因频率在对照组分别为11.0%、19.0%、16.9%,与HFRS患者组比较,RR=0.45、0.58、0.23,χ2=6.138、4.583、21.076,P<0.05,而其他HLA-DRB基因频率差异无统计学意义.湖北地区为HV混合感染疫区且两型病毒多集中于江汉平原地区,汉滩型(THNV)略多于汉城型(SEOV),湖北地区HFRS患者中具有HLA-DRB1*1101-1105等位基因的有81.8%(27/33)为THNV感染,而SEOV感染只有18.2%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 湖北省汉族人中,HFRS与DRB1*0401-0411、*1001、*1101-1105呈正相关;HFRS与DRB1*1501-1502、DRB4、DRB5呈负相关.THNv的HV变异株在湖北地区具有一定的地理聚簇性.     

AFP对裸鼠肝癌移植瘤生长的促进作用及对血管形成相关因子的影响

目的:探讨AFP对肝癌移植瘤生长及血管生成调节因子表达的影响。方法:采用pEGFP-N1-AFP和pEGFP-N1质粒分别转染SMMC-7721细胞构建SMMC-7721/AFP和SMMC-7721/CON细胞,将裸鼠分为实验组和对照组,分别于裸鼠皮下接种SMMC-7721/AFP和SMMC-7721/CON,从而建立人肝癌移植瘤模型,动态观测裸鼠肿瘤体积和质量变化;取肿瘤组织用实时定量RT-PCR和Western blot检测组织中的HOXA7、eIF4E、VEGFA和FGF2表达。结果:构建SMMC-7721/AFP和SMMC-7721/CON细胞,并将其接种到裸鼠皮下成功建立肝癌移植瘤模型。与对照组比较,实验组移植瘤体积与质量显著增高,成瘤后第12天,实验组移植瘤体积和质量分别为（307.71±47.63）mm3和（20.243±0.411）g,差异均具有显著性（P=0.012,P=0.04）。实时定量RT-PCR结果显示AFP过表达提高了肝癌移植瘤细胞HOXA7、eIF4E和FGF2 mRNA表达水平,分别为2.488±1.155、23.828±2.465和4.407±1.164,与对照组相比增高程度具有显著性差异,但VEGFA mRNA表达未见显著增强。Western blot结果显示:SMMC-7721/AFP较SMMC-7721/CON细胞显著提高HOXA7蛋白表达水平,但对FGF2和VEGFA无显著影响。结论:AFP基因转染可明显促进裸鼠肝癌移植瘤的生长,该作用可能与其促进肿瘤血管形成因子在mRNA水平的调控有关。     

甘精胰岛素联合阿卡波糖对老年糖尿病的疗效和胰岛功能的影响

目的 探讨甘精胰岛素(GL)或中性鱼精蛋白锌胰岛素(NPH)联合阿卡波糖对老年糖尿病的疗效和治疗前后对胰岛功能的影响.方法 对42例初诊老年糖尿病患者分别于睡前注射GL(23例)或NPH(19例),口服阿卡波糖,观察8周前后空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、空腹C肽和餐后C肽的变化.结果 二组均有明显的降血糖作用,但GL组发生的低血糖事件更少,C肽水平明显提高.结论 应用GL和NPH睡前注射均对老年糖尿病的疗效较好,但GL的低血糖发生率低,且可改善胰岛功能.     

老年消化道恶性肿瘤患者心理障碍及相关因素Logistic分析

目的了解老年消化道恶性肿瘤患者心理状况,并分析其相关因素。方法应用抑郁自评量表(SDS),焦虑自评量表(SAS)调查及自制量表对32例老年消化道恶性肿瘤患者进行心理状况调查及其相关因素分析。结果老年消化道恶性肿瘤患者SDS和SAS标准分为41.58±12.78;44.39±10.67,显著高于一般老年患者。多因素Logistic回归分析提示睡眠差、疼痛感、疲乏感、对自身疾病缺乏认识、对治疗的悲观态度、严重的治疗副作用、经历手术和放化疗是心理障碍的影响因素。结论老年消化道肿瘤患者具有更多的情绪障碍,应给予心理干预,以提高患者治疗效果及生存质量。     

肠内联合肠外营养支持用于老年晚期消化道恶性肿瘤化疗患者的观察

目的 探讨肠内联合肠外营养支持对老年晚期消化道恶性肿瘤化疗的影响。方法 将2006年至2011年本院肿瘤内科收治的79例老年晚期消化道恶性肿瘤患者采用随机数字表法分为两组,治疗组（n=42）采用营养支持联合化疗,对照组（n=37）采用单纯化疗,入院后行营养风险筛查,2个化疗周期后比较营养状态、Karnofsky功能状态评分、毒性反应、院内感染率的变化。结果 两个周期化疗后,治疗组的体重指数 ［（19.00±3.31）kg/m2比（18.24±1.98）kg/m2,P=0.04］、白蛋白［（33.90±1.50） g/L比（29.90±2.38）g/L,P=0.02］、前白蛋白［（28.19±1.50)g/L比（25.51±8.38）g/L,P=0.01］、血红蛋白［（107.0±6.90)g/L 比（104.20±9.70）g/L,P=0.02］、淋巴细胞［（2.99±0.55)×109/L比（2.63±0.20）×109/L,P=0.03］均显著升高。化疗不良反应方面,治疗组骨髓抑制发生率明显低于对照组（28.57%比83.78%,P=0.00）;治疗组中有营养风险者的骨髓抑制发生率为31.03%,显著低于对照组的95.45%（P=0.00）,其他毒性反应差异无统计学意义。治疗组两次化疗后的院内感染发生率均显著低于对照组（0比10.81%,P=0.03;2.38% 比27.03%,P=0.02）。结论 老年晚期消化道恶性肿瘤患者化疗期间联合应用肠内加肠外营养支持有利于机体营养状况及体能的改善,减轻毒性反应,是院内感染发生的保护性因素。营养支持符合化疗患者的需求,具有安全、有效、合理的特点。     

雷公藤内酯醇联合热疗对 MKN28 细胞增殖抑制作用的研究简

目的：研究雷公藤内酯醇（triptolid,TPL）与热疗联合应用对胃癌细胞MKN28增殖、细胞周期分布及磷酸化蛋白激酶B（phosphorylation of Akt,p-Akt）表达的影响。方法：将体外复苏和培养的胃癌细胞系MKN28分为四个组：对照组、TPL组、热疗组、TPL联合热疗组。其中TPL刺激浓度为20ng/ml,热疗采用43℃下加热150min。使用四甲基偶氮唑盐比色法（measurement of trititaed thymidine incorporation,MTT）检测细胞增殖并计算细胞增殖抑制率。流式细胞仪（flow cytometer,FCM）检测细胞周期分布的变化,使用蛋白质印迹法（Western blot）检测p-Akt水平。结果：热疗组,TPL组和TPL联合热疗组MKN28 细胞增殖抑制率分别为21.2%,28.5%和54.5%,联合组显著高于TPL组和热疗组。FCM结果显示热疗组G0/G1期减少至（62.7±3.8）%,G2/M期增多至（18.1±3.2）%。TPL组G0/G1期增多至（80.62±4.6）%,G2/M期增多至（16.18±2.2）%。联合组G0/G1期（77.72±8.1）%,G2/M期增多至（19.62±2.4）%。热疗组和TPL组对细胞周期的影响不一样。与热疗组和TPL组相比,联合组G2/M期增多最明显。Western blot检测各组p-Akt蛋白表达均有降低,其中对照组（1.81±0.05）,热疗组（1.28±0.01）,TPL组（0.95±0.07）,联合组（0.58±0.06）,联合组下降最明显（P＜0.05）。结论：TPL联合热疗对MKN28细胞增殖抑制作用更强,可能与二者对细胞周期的作用点不同,并能同时降低细胞内p-Akt的表达有关。