肝纤维化大鼠阴虚证表征的观察及一贯煎的干预作用

目的检测肝纤维化大鼠的阴虚证表征,观察滋补肝肾中药一贯煎对阴虚证表征的影响。方法将48只雄性Sprague-Dawlay大鼠随机分为4组,正常对照组、模型组、阳性对照组、一贯煎组,每组12只。除正常对照组外,均建立CCl4致肝纤维化大鼠模型,在CCl4停止注射后3 d,一贯煎组每只动物给予相应浓度的一贯煎浓缩液2 m L/200 g灌胃,1次/d。阳性对照组给予秋水仙碱灌胃,0.25 mg/kg,1次/d。正常对照组和模型组按相同方法灌服等量生理盐水。4周后,检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝功能指标;通过HE染色评价肝脏炎症活动度(G)和纤维化程度(S);检测大鼠体重、舌面干湿度、舌面温度、舌微循环血流速度、饮水、大小便等阴虚证表征。结果 1一贯煎在改善肝功能、减轻炎症、抗肝纤维化方面作用较好:一贯煎组ALT[(41.66±3.72)U]较模型组[(61.00±0.00)U]降低,差异有统计学意义(P<0.05);一贯煎组AST[(146.03±46.41)U]较模型组[(218.90±12.56)U]降低,差异有统计学意义(P<0.05);一贯煎组炎症活动度[(1.00±0.00)]较模型组[(3.00±0.00)]降低,差异有统计学意义(P<0.05);一贯煎组纤维化程度[(1.00±0.00)]较模型组[(2.00±0.00)]降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2肝纤维化大鼠具有阴虚证的表征,一贯煎能够改善阴虚证的症状。体重:模型组的体重[(380.66±37.29)g]较正常对照组[(507.00±17.69)g]减少(P<0.05);一贯煎组体重[(473.66±13.86)g]较模型组增高(P<0.05)。舌面干湿度:模型组的舌面干湿度[(0.000 36±0.000 28)g]较正常对照组[(0.007 32±0.001 26)g]减少(P<0.05);一贯煎组舌面干湿度[(0.012 83±0.005 85)g]较模型组增高(P<0.05)。舌面温度:模型组的舌温度[(34.48±1.24)℃]较正常对照组[(30.63±0.80)℃]增高(P<0.05);一贯煎组舌温度[(31.40±2.10)℃]较模型组降低(P<0.05)。舌血流速度:模型组的舌血流速度[(69.78±21.44)AU]较正常对照组[(31.43±1.58)AU]增高(P<0.05);一贯煎组舌血流速度[(40.50±3.89)AU]较模型组降低(P<0.05)。饮水:模型组饮水量[(37.52±10.46)m L]较正常对照组[(59.65±6.05)m L]显著减少(P<0.05);一贯煎组饮水量[(53.69±8.74)m L]较模型组显著增多(P<0.05)。大便:模型组大便[(1.00±0.00)分]较正常对照组[(2.00±0.00)分]分值减少(P<0.05);一贯煎组大便[(2.00±0.00)分]较模型组分值增多(P<0.05)。小便:模型组小便[(2.00±0.00)分]较正常对照组[(1.00±0.00)分]分值增高(P<0.05);一贯煎组小便[(1.33±0.57)分]较模型组分值减少(P<0.05)。结论肝纤维化大鼠具有阴虚证的特点,滋补肝肾中药一贯煎不仅能改善肝纤维化大鼠的病理,还能改善阴虚证的症状。该研究为肝纤维化大鼠阴虚证的诊断和药理机制的研究提供了新的思路。     

糖络宁对DPN大鼠和雪旺细胞内质网应激PERK通路的影响

目的:观察糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠和雪旺细胞内质网应激RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)通路相关蛋白和mRNA表达的影响。方法:60只SD雄性大鼠,除空白组外,其余各组大鼠采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ,35 mg·kg~(-1))复制DPN大鼠模型,随机分为模型组,氧化三甲胺组,糖络宁低、高剂量组,连续给药12周。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠坐骨神经病理学改变,免疫荧光染色法检测大鼠坐骨神经中p-PERK,磷酸化的真核翻译起始因子2a(p-eIF2a)和转录活化因子4(ATF4)蛋白的表达;建立高糖诱导的雪旺细胞模型,分为25 mmol·L~(-1)葡萄糖组(control),150 mmol·L~(-1)葡萄糖组(model),150 mmol·L~(-1)葡萄糖+0.1%,1%和10%糖络宁组,分别干预24,48 h。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中PERK,核转录因子E2相关因子2(Nrf2),血红素加氧酶-1(HO-1),B淋巴细胞瘤-2相关的X蛋白(Bax)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平。结果:坐骨神经病理学改变:空白组大鼠坐骨神经有髓神经纤维的髓鞘结构完整致密,形态规则,排列整齐。模型组出现严重脱髓鞘现象,结构松散,形态不规则,排列紊乱。糖络宁组有轻微脱髓鞘现象,结构近似完整,形态近似规则。经积分吸光度统计,与空白组相比,模型组明显降低(P0.01);雪旺细胞PERK,Nrf2,HO-1,Caspase-3和Bax mRNA表达水平,与空白组比较,同时相的模型组中PERK,Bax和Caspase-3 mRNA的表达明显升高(P0.05,P0.01),与模型组比较,同时相的糖络宁3个含药血清剂量组中以上3个指标表达明显降低(P0.05,P0.01),而Nrf2和HO-1 mRNA的表达明显升高(P0.05,P0.01);坐骨神经中p-PERK,p-eIF2a和ATF4蛋白表达,与空白组比较,模型组蛋白表达量显著增加(P0.01);与模型组比较,糖络宁组蛋白表达量显著减少(P0.01)。结论:糖络宁能够减轻坐骨神经组织的病理损伤,其防治DPN的作用机制可能与调节内质网应激时PERK相关途径包括抑制PERK/eIF2a途径同时促进PERK/Nrf2途径有关。     

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠Nrf2/ARE通路的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠Nrf2/ARE通路相关蛋白的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为空白对照组和链脲佐菌素(STZ)组,STZ组大鼠一次性腹腔注射60 mg/kg STZ,造模1周后,将空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L的大鼠稳定1个月后,随机分为模型对照组、α-硫辛酸组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,并给予相应药物12周。麻醉取大鼠坐骨神经,采用免疫组织化学方法检测大鼠坐骨神经Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1),核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、及谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱,脱髓鞘严重,坐骨神经中Keap1、Nrf2、HO-1和γ-GCS的表达增加,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,糖络宁低、高剂量组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱和脱髓鞘现象得到改善,其中糖络宁低剂量组Keap1、Nrf2表达增加,糖络宁高剂量组HO-1、γ-GCS表达增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论糖络宁能够改善DPN大鼠坐骨神经的病理状态,上调Nrf2/ARE信号通路中Keap1、Nrf2、HO-1及γ-GCS的表达,增强机体抗氧化应激的能力。