敲低NIPBL基因调控小鼠骨髓间充质干细胞向软骨的分化

背景：目前已将NIPBL基因突变作为诊断Cornelia de Lange综合征的首选指标,但由于该病的遗传异质性,显著增加了临床诊疗难度,尤其患儿骨骼发育畸形的发生率高,其发病机制尚不明确,目前无有效治疗方案,患儿平均寿命较一般人群显著缩短。目的：探究敲低NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化能力的影响及其可能的分子调控机制。方法：将慢病毒转染NIPBL sh RNA的小鼠骨髓间充质干细胞作为sh-NIPBL组,慢病毒空载体转染的骨髓间充质干细胞作为sh-NC组,无慢病毒干扰的骨髓间充质干细胞作为空白对照组,对上述3组细胞进行成软骨诱导培养,诱导21 d后测量软骨微球最大横截面的周长,行阿利辛蓝染色鉴定其诱导分化结果,免疫荧光法检测软骨细胞Ⅱ型胶原的表达水平,应用实时荧光定量PCR法检测软骨细胞Sox-9、TGF-β1、Smad2、Smad4 m RNA表达水平。结果与结论：(1)成软骨诱导第21天,sh-NIPBL组的软骨微球最大横截面的周长明显小于对照组(P <0.05),阿利辛蓝染色后在倒置显微镜下观察sh-NC组较sh-NIPBL组可见更多的蓝色软骨内酸性黏多糖...     

低表达NIPBL抑制骨髓间充质干细胞成骨并促进β连环蛋白磷酸化

目的：探讨NIPBL低表达对骨髓间充质干细胞在成骨方面的影响及可能的机制。方法：NIPBL+/-、空载体慢病毒转染BMSCs并观察荧光表达量,RT-PCR分别检测空白组、空载体组、NIPBL沉默组NIPBL mRNA的表达。将三组细胞(空白组、空载体组、NIPBL沉默组)成骨诱导21 d后茜素红染色,并检测β连环蛋白、磷酸化β连环蛋白以及Lrp-5 mRNA的表达情况。结果：三组细胞(空白组、空载体组、NIPBL沉默组)中,沉默组NIPBL mRNA的表达水平显著低于其余两组,差异有统计学意义(P<0.001);三组细胞在成骨分化过程中形态发生明显变化,诱导第21天茜素红染色发现沉默组的红色钙结节形成较空白组及阴性组少并且沉默组β-catenin蛋白、P-β-catenin蛋白以及Lrp-5mRNA表达水平均低于空白组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论：低表达NIPBL抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨能力并促进β-catenin蛋白磷酸化。     

慢病毒介导沉默NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响

目的 探讨慢病毒介导沉默NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响.方法 将第三代c57小鼠骨髓间充质干细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组.将慢病毒载体转染至小鼠骨髓间充质干细胞,倒置荧光显微镜观察慢病毒转染结果,Real-time PCR检测NIPBL基因表达情况.成骨诱导培养,检测碱性磷酸酶活性,应...