miR-148a-5p参与了高蛋氨酸饮食诱导ApoE-/-小鼠的肝细胞凋亡

文题释义：凋亡：是一种程序性细胞死亡,其特征是进行性的核和细胞质收缩、染色质浓缩和凋亡小体脱落。凋亡由称为半胱天冬酶的特定类型的半胱氨酸蛋白酶执行,一旦激活,就可以裂解细胞底物并导致细胞死亡。最常见的凋亡指标为抑制凋亡基因Bcl-2和促进凋亡基因Bax,Bcl-2增高,细胞凋亡减少;Bax增高,细胞凋亡增加。微小RNA(miRNA)：是一组内源性非编码小RNA,在动物、植物、病毒和其他生物中普遍存在,可调节将近60%的基因表达,这些基因负责细胞的增殖、分化、凋亡和其他生理过程。miRNA可以在多种疾病中异常表达,并对这些疾病的诊断和预后评估起重要作用。背景：高蛋氨酸饮食可以导致ApoE^-/-小鼠发生肝损伤,微小RNA(miRNA)参与细胞存活、分化和细胞凋亡等各种细胞过程,具有重要意义。 目的：探讨miR-148a-5p在高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠肝细胞凋亡中的作用。方法：12只ApoE^-/-小鼠随机分为2组,每组6只,ApoE^-/-对照组为普通饮食,ApoE^-/-高蛋氨酸组为高蛋氨酸饮食。苏木精-伊红染色观察2组肝组织形态学变化;TUNEL染色观察肝细胞的凋亡情况;Western blot测定Bax、Bcl-2的表达改变;荧光定量PCR检测miR-148a-5p的表达;运用Target Scan靶基因预测软件预测miR-148a-5p的靶基因;双荧光素酶活性实验明确其靶向关系。结果与结论：①与对照组相比,ApoE-/-高蛋氨酸组肝脏组织肝小叶结构发生明显紊乱,部分细胞呈胞浆疏松化变性,肝细胞凋亡增加,Bax的表达明显上升且Bcl-2的表达显著下降(P < 0.01);②荧光定量PCR结果显示,ApoE-/-高蛋氨酸组miR-148a-5p的表达增加(P < 0.05);③靶基因预测软件提示,Bcl-2为miR-148a-5p的潜在靶基因;④双荧光素酶活性实验确定了miR-148a-5p与Bcl-2的靶向关系(P < 0.05);⑤肝细胞中过表达miR-148a-5p后Bax的表达显著上升且Bcl-2的表达明显下降(P < 0.01);⑥提示在高蛋氨酸饮食诱导的ApoE-/-小鼠肝细胞中,miR-148a-5p通过负调控Bcl-2促进肝细胞凋亡,这可能是造成肝损伤的机制之一。 ORCID: 0000-0003-1524-1117(马芳) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Rap1A DNA甲基化在Hcy促进巨噬细胞增殖中的作用

目的探讨Rap1A DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)促进小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖中的作用。方法将处于对数生长期的RAW264.7细胞分为对照组(Hcy 0μmol/L)和不同浓度的Hcy(20,40,60,80,100μmol/L)干预组,24 h后用XTT检测细胞活力;Edu检测细胞增殖情况;qRT-PCR和Western blot检测Rap1A的mRNA和蛋白的表达;甲基化特异性PCR法(MSP)检测Rap1A启动子区甲基化改变;激光共聚焦显微镜观察Rap1A的变化;将Rap1A干扰腺病毒转染RAW264.7细胞并用Hcy刺激,检测Rap1A的mRNA和蛋白水平的变化及细胞的增殖情况。结果与对照组相比,不同浓度的Hcy干预细胞后,细胞活力增强,其中100μmol/L Hcy浓度最为明显(P0.01),且细胞增殖水平明显增加(P0.01);经Hcy刺激后,细胞Rap1A的mRNA和蛋白表达量显著增加(P0.01),启动子区甲基化水平降低(P0.01);干扰Rap1A的表达后能够部分逆转Hcy所致的细胞增殖(P0.01)。结论 Rap1A启动子区低甲基化介导了Hcy导致的RAW264.7细胞增殖。