帕罗西汀干预破骨细胞分化的作用机制

背景：破骨细胞过度活化是骨质疏松症发生、发展过程中的关键环节,探究破骨细胞功能、开发具有抑制破骨细胞分化减少骨重吸收的药物,是当前探索骨质疏松症临床治疗的重要手段。目的：基于MAPK/核因子κB信号通路,分析帕罗西汀影响破骨细胞分化的作用机制。方法：(1)体外实验：采用CCK-8实验检测不同浓度帕罗西汀对小鼠骨髓源性巨噬细胞增殖的影响。在巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体的诱导下,使用不同浓度帕罗西汀干预破骨细胞分化,抗酒石酸酸性磷酸酶染色确定破骨细胞数目;RT-qPCR检测帕罗西汀对破骨细胞分化相关细胞因子mRNA表达的影响;Western Blot检测帕罗西汀对小鼠骨髓源性巨噬细胞中核因子κB、MAPK信号通路及破骨细胞相关蛋白表达的影响。(2)体内实验：将40只C57BL/6小鼠按随机数字表分为空白对照组、脂多糖组、帕罗西汀2 mg/kg,5 mg/kg组,每组10只。脂多糖组、帕罗西汀2 mg/kg,5 mg/kg组每2 d颅骨矢状缝皮下注射脂多糖(构建小鼠颅骨骨溶解模型),帕罗西汀两组每次皮下注射脂多糖1 d后注射对应剂量的帕罗西汀,14 d后,分离颅骨进行Mi...     

山楂叶总黄酮对脊髓损伤后大鼠的作用研究

目的:探讨山楂叶总黄酮(TFHL)对脊髓损伤(SCI)后大鼠血液和脊髓中炎症水平及其体重和运动功能的影响.方法:构建SCI模型,分为假手术组、模型组和TFHL低剂量组、TFHL中剂量组、TFHL高剂量组3个剂量组.予不同浓度TFHL灌胃,Basso-Beattie-Bresnahan评分评价大鼠的运动功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测大鼠的白细胞介素(IL)-17A、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和IL-4等炎症因子的水平,HE染色观察脊髓组织的完整性和神经元的形态及数量.结果:相较于模型组,TFHL低(P＜0.01)、中(P＜0.05)、高(P＜0.01)剂量组大鼠体重减轻情况均有所缓解、运动功能评分显著升高;在基因水平上,相较于模型组,TFHL低剂量组的IL-17A(P＜0.01)和TNF-α(P＜0.001),TFHL 中剂量组的 IL-17A(P＜0.001)、TNF-α(P＜0.01)和 IFN-γ(P＜0.01)及 TFHL 高剂量组的 IL-17A(P＜0.01)和IFN-γ(P＜0.05)水平显著降低,TFHL低剂量组的IL-4水平显著升高(P＜0.001);在蛋白水平上,相较于模型组,TFHL低剂量组的IFN-γ(P＜0.05),TFHL中剂量组的1L-17A(P＜0.05)和1FN-γ(P＜0.05)水平显著降低,TFHL中剂量组的IL-4水平显著升高(P＜0.01).假手术组脊髓结构完整,神经元丰富;模型组脊髓结构完整性被破坏,神经元减少;相较于模型组,TFHL低剂量组的结构完整性更佳,神经元数量有所增加,TFHL中剂量组的结构完整性最佳,神经元数量最接近于假手术组,TFHL高剂量组的结构完整性和神经元数量介于模型组和TFHL中剂量组之间.结论:TFHL抑制了促炎因子IL-17A、TNF-α和IFN-γ和促进了抗炎因子IL-4的mRNA表达,抑制了促炎因子IL-17A和IFN-γ和促进了抗炎因子IL-4的蛋白表达,促进了SCI后大鼠运动功能的恢复.     

山楂叶总黄酮调控星形胶质细胞治疗脊髓损伤的分子机制

背景：星形胶质细胞对脊髓损伤后神经元的修复具有重要作用,有研究证明山楂叶总黄酮可促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复,山楂叶总黄酮是否影响星形胶质细胞促进神经元修复仍不清楚。目的：探索山楂叶总黄酮调控星形胶质细胞治疗脊髓损伤的分子机制。方法：构建脊髓星形胶质细胞与脊髓神经元transwell共培养模型,对照组为正常脊髓星形胶质细胞和正常脊髓神经元;损伤组为正常脊髓星形胶质细胞和损伤脊髓神经元;药物组为125μg/mL山楂叶总黄酮干预的正常脊髓星形胶质细胞和损伤脊髓神经元。荧光探针DCFH-DA检测脊髓神经元内活性氧的生成;实时荧光定量PCR检测脑源性神经营养因子、神经生长因子、转录因子4的表达;Western blot检测脑源性神经营养因子、神经生长因子、Wnt/β-catenin通路关键蛋白GSK-3β、phsopho-GSK-3β(ser9)、β-catenin及转录因子4的表达;免疫荧光观察Wnt/β-catenin通路关键蛋白β-catenin的表达。结果与结论：(1)损伤组活性氧生成远高于对照组(P <0.001);药物组活性氧生成低于损伤组(P <0.01),高于对照...