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应用本室纯化的重组人肿瘤坏死因子-β(rhTNF-β)对悬浮的人白血病细胞HL-60和K562小鼠骨髓瘤细胞NS-1以及贴壁的小鼠纤维母细胞L929和人肝癌细胞SMMC7721进行了微量细胞毒试验,其中悬浮细胞采用~3H-TdR掺入法;贴壁细胞采用结晶紫染色法分别检测.实验表明,此rhTNF-β对HL-60有很强的杀伤作用;NS-1为相对敏感细胞株;而对SMMC7721及K562的杀伤率很低,具有一定抗性.与此同时,作者还应用FDA-PI荧光染色,用荧光显微镜,扫描电镜及透射电镜观察,DNA电泳以及流式细胞仪对细胞周期和凋亡百分率的检测等实验,进一步研究了rhTNF-β对L929和 相似文献
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应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni~(2 )-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2~2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0~6.6)×10~6U/map. 相似文献
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本文利用能表达HuTNFβ的工程菌株(P20KLT)按常规培养及扩增.即采用LB培养液(内含Amp100.μg/ml Tet 5μg/ml);1:40扩增.当A550达0.1时,加入IAA(20μg/ml),当A550为1.0时,中止培养,离心(5000rpm,4℃)收集菌体。在菌体中按1:5加入缓冲液,冰浴中超声破碎,13,000rpm高速离心20分钟, 相似文献
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银夹术加强法行输卵管结扎223例马志章浙江省上虞市计划生育技术指导站312300我站自1993年6月~1995年12月对223例妇女采用银夹术加强法进行输卵管结扎。本组妇女年龄为20~40岁,平均32岁。生育2胎209例,1胎14例。223例中分娩后... 相似文献
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目的:探讨活性氧参与rhTNFβ诱导淋巴细胞活化作用的机理。方法:采用化学发光(CL)和顺磁共振法(ESR)研究rhTNFB诱导人外周血淋巴细胞产生活性氧(OR)的动态变化及其增殖作用。结果:①用10-2000U/ml的rhTNFβ处理1×106ml-1淋巴细胞均可诱发Ly-CL,其中以100U/ml rhTNFβ处理18~20min的CL峰值(RLI)为最高,所诱发的OR主要为OH·;②以15~62U/ml的rhTNFβ处理淋巴细胞72h,可明显地产生活化效应,这与TNFB诱发淋巴细胞早期产生Ly-CL的强度相一致。结论:适当剂量的rhTNFβ可诱导人外周血淋巴细胞产生OR并促进其增殖。 相似文献
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目的:研究融合蛋白IFNγ-LTα诱导L929细胞凋亡的信号转导机制,并与LTα相比较。方法:用结晶紫染色法观察细胞毒效应;用检测试剂盒检测caspase 8和3活性的变化;观察3种信号转导分子的抑制剂对IFNγ-LTα和LTα诱导的细胞毒效应的影响。结果:IFNγ-LTα能诱导L929细胞凋亡及胞内caspase 8和3的活变化,但两种caspase产生的时间和幅度有所不同。PKC的抑制剂可促进IFNγ-LTα和LTα对L929细胞的杀伤;而PLA2及Ca^2 通道的抑制剂对杀伤则有明显的阻断作用,但对LTα的阻断强于对IFNγ-LTα的阻断。结论:IFNγ-LTα融合蛋白的抗肿瘤活性强于LTα,其信号转导特征有别于LTα。信号分子caspase与PKC、PLA2、Ca^2 之间可能存在关联。 相似文献
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将人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白(hIFN-γ/TNF-β,rhTNF-β)是一种颇具理论研究价值和临床应用前景的新型细胞因子.鉴于现有的rhTNF-β表达质粒的表达水平较低(1%左右),不能满足研究工作的需要.本工作在过去构建rhTNF-β表达质粒的基础上,采用分步构建的方式,首先构建了该融合蛋白基因5’端部分的人γ干扰素突变体(hIFN-γ134-X13)编码序列的表达质粒,在获得高效表达以后,再在其3’端连接上5’端缺失23个氨基酸残基(aa)的人β肿瘤坏死因子(hTNF-β148)的核酸序列,进行整个融合蛋白基因的表达研究.实验结果表明,新构建的rhTNF-β表达质粒经转化大肠杆菌BL21(DE3),在λP_RP_L启动子的控制下,温敏诱导表 相似文献
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应用基因工程实验技术,将细胞因子蛋白分子重组成一种融合蛋白分子.这种新型的融合蛋白分子,可发挥超越其单因子的生物学活性和/或具有便于分离纯化、检测等特性.因此它不仅在理论上有着崭新的内涵值得深入探讨,而且在应用上也具有潜在的广阔前景.本文对此领域的研究进展作一综述. 相似文献
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