胶质细胞源性神经生长因子家族成员及其受体介导的胞内信号转导

GDNF家族成员是TGF β生长因子超家族的一个亚家族 ,在神经元的存活 ,生长 ,分化 ,再生 ,轴突生长 ,神经损伤和神经退行性疾病中都有重要作用。神经细胞中存在GDNF的RET依赖性和非RET依赖性两条信号转导途径。本文就GDNF家族成员及其受体介导的胞内信号转导机制研究的最新进展进行简述     

苦参碱诱导K562细胞分化早期的基因表达分析

目的　比较苦参碱诱导K5 6 2细胞前后的基因表达谱 ,寻找与肿瘤细胞分化相关的基因。方法　 0 .1mg/ml苦参碱作用K5 6 2细胞 3h后 ,采用基因芯片技术测定并分析对照组与苦参碱处理组间的基因表达谱差异。结果　在 84 6 5个候选基因中 ,筛选出 30个差异表达基因 ,苦参碱处理组与对照组比较 ,表达上调的基因有 12个 ,主要涉及代谢相关蛋白基因、细胞受体等 ;表达下调的有18个 ,包括抑癌基因、原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关蛋白基因、细胞信号转导基因等。结论　肿瘤细胞诱导分化是多基因作用的综合结果 ,筛选的基因对了解肿瘤发生、发展与逆转分化 ,以及寻找潜在的药物作用靶点可能有意义。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

K562细胞未知基因KH的开放阅读框架在大肠杆菌中的表达

目的:构建K562细胞未知基因KH的开放阅读框架(open reading flame,ORF)的原核表达体系.方法:采用DNA重组技术构建KH基因片段的开放阅读框架(KH-ORF)的表达载体pCI-neo-KH-ORF,热休克法转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导后,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达.结果:经IPTG诱导0.5h后KH-ORF在BL21(DE3)plysS中获得表达,表达产物以包涵体形式存在,分子产量约24kD.结论:成功构建了KH-ORF的原核表达体系,为进一步研究其功能奠定了基础.     

苦参碱对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响

目的　研究苦参碱的体内抑瘤效应与荷瘤机体免疫功能的关系 ,初步探讨苦参碱抑瘤作用的免疫学机制。方法　采用 MTT法观察不同剂量苦参碱对荷瘤小鼠外周血淋巴细胞 (PBL )增殖能力的影响 ;采用小鼠 H2 2 肝癌细胞实体瘤模型进行苦参碱的体内抑瘤实验 ,测定肿瘤生长抑制率 (IR) ,观察荷瘤小鼠免疫器官质量和病理学形态的改变 ;EL ISA法检测小鼠血清中白细胞介素 - 2 (IL - 2 )和白细胞介素 - 12 (IL - 12 )水平。结果　高、低剂量苦参碱对小鼠 H2 2 实体瘤生长具有明显抑制作用 ,抑瘤率分别为 6 0 .7%和 6 2 .5 % (P<0 .0 1) ;体外增殖试验显示 ,苦参碱单独作用时 ,对荷瘤小鼠静止 PBL体外增殖的抑制作用较明显 ,但对刀豆蛋白 A (Con A)活化的荷瘤小鼠PBL 的体外增殖反应表现出一定的促进作用 ,随苦参碱质量浓度的增高 ,促进作用随之减弱 ;苦参碱治疗后小鼠的脾脏和胸腺质量减轻 ,其中以脾脏变化更为明显 (P<0 .0 1) ,病理切片显示胸腺皮质变薄 ;苦参碱不能提高荷瘤小鼠血清 IL - 2和 IL - 12水平 (P>0 .0 5 )。结论　苦参碱在体内具有较强的抗肿瘤作用 ,但在体内、体外都表现出一定的免疫抑制作用 ,显示苦参碱的抗肿瘤活性不是通过提高机体的免疫功能来实现的。     

胶质细胞源性神经生长因子家族成员及其受体介导的胞内信号转导

GDNF家族成员是TGF－β生长因子超家族的一个亚家族，在神经元的存活，生长，分化，再生，抽突生长，神经损伤和神经退行性疾病中都有重要作用。神经细胞中存在GDNF的RFT依赖性和非RET依赖性两条信号转导途径。本文就GDNF家族成员及其受体介导的胞内信号转导机制研究的最新进展进行简述。     

自然杀伤细胞受体家族NKG2D研究进展

NKG2D是自然杀伤细胞的一种激活性受体 ,与其配体MICA和MICB结合后 ,在多肽DAP 10P的介导下激活自然杀伤细胞 ,导致表达MHC和MICA/B分子的靶细胞被杀伤 ,在肿瘤的免疫监视中发挥重要的作用。UL16结合蛋白 (ULBPs)是NKG2D的另一种新的配体分子 ,在病毒感染及人类巨细胞病毒逃脱免疫监视过程中可能起着重要作用     

端粒酶活性与肿瘤

端粒酶能以其自身所带的ＲＮＡ为模板,不断合成新的端粒ＤＮＡ序列添加到染色质末端,阻止端粒的缩短,最终使细胞获得无限增殖的能力,永生化。端粒酶活性表面与肿瘤发生密切相关,可做为诊断肿瘤的一个很有价值的指标。端粒酶活性是细胞增殖的生物学指标,并非恶性变标志。端粒酶活性与肿瘤细胞分化程度呈负相关。     

未知基因KH开放阅读框架真核表达载体的构建及其对K562细胞增殖的影响

目的:构建未知基因KH的开放阅读框架(open reading frame,ORF)的真核表达体系,初步探讨未知基因KH的功能.方法:采用DNA重组技术将KH基因片段的开放阅读框架(KH-ORF)亚克隆于表达载体pCl-neo Mammalian Expression Vector,重组为pCI-neo-KH-ORF真核表达体系,脂质体转染K562细胞,RT-PCR检测目的基因KH的表达.采用体外培养技术,通过pCI-neo-KH-ORF质粒转染K562细胞前后的生长曲线和乳酸脱氢酶活性测定观察KH-ORF对K562细胞增殖速度的影响.结果:KH-ORF在K562细胞中获得表达,对细胞增殖速度有明显影响.结论:KH-ORF表达产物可能是一个与K562细胞增殖有关的功能蛋白质,KH基因可能是一个具有生物学功能的白血病未知基因.