高雄激素调控颗粒细胞系全基因组靶基因及通路的初步探讨

目的:全基因组范围内探索高雄激素调控卵巢颗粒细胞的直接效应基因及通路,为高雄激素参与多囊卵巢综合征(PCOS)的发病机理提供数据支持。方法:以人卵巢颗粒细胞系KGN为研究对象,用高浓度睾酮(10^-5mol/L)处理,应用雄激素受体的抗体进行染色质免疫共沉淀,构建DNA文库,进行高通量测序及生物信息学分析。结果:高浓度睾酮处理后,KGN细胞中雄激素受体结合的Peak区域与对照组明显不同。高雄激素诱导其受体结合的Peak为1823个,大部分集中于基因间区与内含子。Peak关联靶基因富集到细胞凋亡、铁死亡、细胞黏附分子、磷脂酶D信号途径、cAMP信号通路、磷脂酰肌醇信号系统、磷酸肌醇代谢、神经活性配体-受体相互作用8个信号通路,涉及基因43个。结论:研究揭示了高雄激素诱导的卵巢颗粒细胞发生改变的重要信号通路,有助于从源头上阐明雄激素参与PCOS发病机理的机制,并为PCOS的治疗提供潜在的靶点。     

双波长测定中次波长的选择

目前，由于检验新技术的不断发展，有很多全自动生化分析仪采用了观波长测量法，即在样品的测量过程中同时记录主波长和次波长吸光度的变化值[1]。主波长（Primarywavelength）也叫分析波长，是由样品和试剂反应后，我们所要监测的吴色物质的最大吸收峰决定的，一般由试剂生产厂家提供给我们。次波长（secondarywavelength）也叫辅助波长，它的应用主要是为了消除光源强度的变化和干扰物的存在对测量结果的影响。本文就从这两方面对次波长的选择提一点看法，供同仁们参考。1光源强度的变化对吸光度的影响当前的全自动生化分析仪大部分采用…     

慢性HBV感染者调节性T细胞、黏附细胞对细胞毒T淋巴细胞体外增殖的影响

乙型肝炎患者体内细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)的功能和数量直接影响着病毒的清除和肝细胞的损伤.本实验主要探讨慢性HBV感染者调节性T细胞(Tr)、黏附细胞(AC)对HLA-A2限制的HBV特异性CTL体外增殖的影响.     

人骨髓间充质干细胞体外向肝样细胞的诱导分化

目的：研究人骨髓来源的间充质干细胞（human bone marrow derived mesenchymal stemcells,hBM-MSCs）在肝细胞生长因子（HGF）、成纤维细胞生长因子-4（FGF-4）、抑瘤素M（OSM）诱导下,体外向肝样细胞的诱导分化。方法：通过密度梯度离心和贴壁培养法获得hBM-MSCs,分离的hBM-MSCs扩增传至第6代,流式细胞仪检测hBM-MSCs表面CD34、CD45、CD105、CD166表达。第6代hBM-MSCs生长达100%融合时采用两步法对hBM-MSCs进行诱导分化。第1～第14天采用IMDM诱导培养基（含2%FCS、20ng/mL HGF、20ng/mL FGF-4）,第15～第21天在上述培养基中加OSM（10ng/mL）,促进诱导细胞的成熟,同时收集第0、第7、第14、第21天培养上清液标本,ELISA法测ALB浓度。诱导培养21d后采用RT-PCR、免疫荧光技术检测诱导后肝细胞特异标志CK18、ALB的表达,PAS染色检测诱导MSCs糖原储存。结果：传至第6代的hBM-MSCsCD34、CD45表达阴性,CD105、CD166表达阳性。在细胞因子...     

取卵日卵泡大小对体外受精后胚胎早期发育影响的护理研究

目的 探讨护理人员取卵日监测卵泡大小对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中卵子成熟及胚胎早期发育的影响.方法 以2012年3月～ 2013年12月来山东省枣庄市妇幼保健院生殖中心行IVF-ET的87个患者为研究对象,研究方法以HCG注射日辅助生殖专职护士进行健康支持教育,取卵日经过专职培训的手术室护士监测观察卵泡直径为依据,对取卵日卵泡大小进行监测、评估、测量液体量,按照卵泡大小将其分大卵泡组、中卵泡组和小卵泡组.取卵手术过程中详细告知实验室人员取出卵泡的大小、取出的液体量.结果 取卵日直径大于15 mm的卵泡获得的卵母细胞成熟度较高（P＜0.01）;（2）大卵泡组卵泡优胚率高于中卵泡组,中卵泡组高于小卵泡组,差异极显著（P＜0.01）.结论 在IVF-ET中,手术室护士通过严密观察、监测卵泡的大小,对实验室人员的详细告知,实验室人员将获得的卵子严格按照大、中、小分类培养,对优质胚胎的获得提供了良好的条件,有利于提高卵子的成熟、受精和早期胚胎发育;有利于提高体外受精-胚胎移植成功率.     

慢性乙型肝炎患者CD8~+CD28~+T/CD8~+CD28~-T比值变化及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值变化及临床意义。方法 流式细胞仪测定正常对照、慢性乙型肝炎患者CD8+CD28+T/CD8+CD28-T的百分数,并计算CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值,慢性乙型肝炎组根据HBV-DNA含量分为两组,低病毒载量组(HBV-DNA<106拷贝/ml)和高病毒载量组(HBV-DNA>106拷贝/ml),并分别计算CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值。结果慢性乙型肝炎患者组CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值与正常对照组相比明显降低,两者差异有统计学意义(P<0.01);慢性乙型肝炎高病毒载量组CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值低于低病毒载量组(P=0.039),两组差异有统计学意义。结论 慢性乙型肝炎患者CD8+CD28+T/CD8+CD28-T比值下降可能是病毒不能清除,而长期存在的原因之一。     

子宫内膜癌中Syk基因的表达及其甲基化分析

目的 探讨Syk基因在子宫内膜良、恶性组织中的表达及其启动子甲基化与子宫内膜癌发生、发展的关系.方法 采用RT-PCR方法检测52例子宫内膜癌及癌周组织、30例子宫内膜不典型增生、28例复杂型増生、30例单纯型增生和40例正常内膜组织中Syk mRNA 的表达情况,同时采用MSP方法检测其基因启动子甲基化情况.结果 在子宫内膜癌组、癌周组织、不典型增生组、复杂和单纯型增生及正常子宫内膜组中Syk基因表达依次增高,Syk基因甲基化程度依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);Syk基因表达水平及其基因启动子甲基化程度在复杂型增生、单纯型增生及正常子宫内膜间的差异无显著性(P>0.05);子宫内膜癌中Syk基因的阳性表达及甲基化程度与癌症的临床分期(χ2=4.65,P<0.01;χ2=4.33,P<0.05)、淋巴结转移(χ2=10.68,P<0.01; χ2=5.86,P<0.05) 、肌层浸润深度(χ2=5.82,P<0.05; χ2=3.90,P<0.05)相关,而与内膜癌组织学分级无明显相关性(χ2=0.03,P>0.05;χ2=0.94,P>0.05).Syk基因启动子甲基化与Syk基因表达缺失明显相关(P<0.05).结论 Syk 基因启动子甲基化可能是导致Syk基因失活的原因之一,Syk基因启动子甲基化可能与子宫内膜癌发生发展有关.     

双波长测定法中次波长毫摩尔消光系数的计算

目前 ,有很多生化分析仪采用了双波长测量法进行酶活力浓度的测定。如果在样品的测量过程中全程用双波长读取吸光度 ,由于呈色物质在次波长上也有吸光度 ,所以在计算 F(计算因子 )时要用呈色物质在主波长上毫摩尔消光系数减去其在次波长上的毫摩尔消光系数〔1〕。因此 F的计算公式 :F=(SV RV)× 1 0 3(ε主 -ε次 )· L· SVε主 :呈色物质在主波长上的毫摩尔消光系数(Lmmol- 1、cm- 1 )。ε次 :呈色物质在次波长上的毫摩尔消光系数(Lmmol- 1、cm- 1 )。1光径 (cm)。 RV;试剂的体积 (μl)。 SV:样品的体积(ul)一般的生化分析仪都有自…     

外科取精术在无精子症诊断与治疗中的应用

目的研究外科取精术在无精子症诊断与治疗中的应用价值。方法在诊断为无精子症的、患者中,经睾丸体积测定、血清性激素水平、生殖系统超声等检查后,选择符合条件者198例,在局麻下行外科取精术,对获得组织显微镜下检查,统计分析取精结果。获得的精子行卵胞浆内单精子显微注射术（ICSI）及胚胎移植术（ET）,统计评估受精率、卵裂率、临床妊娠率及流产率。结果其中78例附睾中存在精子（39．4％）,23例睾丸中存在精子（11．6％）。睾丸体积正常的取精成功率明显高于睾丸体积偏小者,有显著性差异（P〈0．01）。血清促卵泡刺激素（FSH）水平正常的取精成功率明显高于FSH增高者,差异有显著性意义（P〈0．01）。82例外科取精术获得精子的患者进行ICSI治疗,附睾取精组与睾丸取精组比较,受精率、卵裂率、临床妊娠率及流产率差异均无统计学意义（P均〉0．05）。结论外科取精术操作简单且创伤较小,能准确鉴别诊断梗阻性无精子症（OA）及非梗阻性无精子症（NOA）,对无精子症的诊断有重要价值;为部分无精子症患者提供了生育自己生物学子代的机会,也是针对无精子症的有效治疗手段。     

慢性活动性肝病血清PCⅢ与肝功能损伤的关系研究

目的：研究慢性活动性肝炎病人的血清PCⅢ与肝功能损伤的关系。方法：选择临床确诊的慢性活动性肝炎患者的血清，采用进口ELISA定量诊断试剂盒、全自动酶标仪进行定量分析。结果：研究表明，近23％的慢性肝病患者其血清PCⅢ含量明显高于正常人群，血清PCⅢ含量的变化与血清GLO、CHE、PT和PTA等指标的变化关系密切。结论：慢性肝病人血清PCⅢ含量的变化是评估慢性活动性肝病患者肝脏功能损伤的另一个重要指标。