GPCR-G蛋白融合传感器检测GPCR与G蛋白相互作用的灵敏度

目的 以GPR56-G蛋白融合传感器为例,建立一种检测GPCR与G蛋白相互作用的高灵敏方法。方法 将带有NanoLuc荧光素酶(Nluc)的G蛋白α亚基的N端融合到GPCR的C端,构建GPCR和G蛋白α亚基两者的融合蛋白为实验组,受体和G蛋白共表达作为对照组。在受体表达水平相同的条件下,利用生物发光共振能量转移(BRET)方法检测GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白、GPR56和Gα₁₂亚基共表达的组成性活力。利用BRET方法检测GPR56激动剂(P19)对GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白相互作用的影响。结果 BRET比率结果显示,与对照组GPR56和Gα₁₂亚基共表达相比,GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白具有更强的组成性活力(F=424.7,P<0.001);与对照组比较,P19激活实验组的半数有效浓度(EC₅₀)下降,差异有统计学意义(t=13.36,P<0.001),GPR56-Gα₁₂亚基融合蛋白对激动剂(P19)的感...