急性寒冷刺激诱导小鼠米黄色脂肪细胞 形成方法的建立

目的：建立急性寒冷刺激诱导小鼠皮下米黄色脂肪细胞形成的方法。方法：连续3天每天4 h预冷刺激使小鼠适应寒冷环境,然后持续24 h进行急性寒冷刺激,诱导小鼠皮下脂肪中米黄色脂肪细胞形成。采用免疫组化检测皮下脂肪中Ucp1阳性细胞,荧光定量PCR检测米黄色脂肪细胞标志性基因Ucp1、Prdm16、Pgc1α、Cidea的转录,Western blot检测米黄色脂肪细胞标志性蛋白Prdm16和Ucp1的表达。结果：急性寒冷刺激后小鼠皮下脂肪中Ucp1阳性细胞数量明显增加,Ucp1、Prdm16、Pgc1α、Cidea转录明显上调,Prdm16、Ucp1蛋白表达明显升高。结论：本研究建立的急性寒冷刺激诱导小鼠皮下米黄色脂肪细胞形成的方法可靠,可用于米黄色脂肪细胞形成调控机制的研究。     

酵母双杂交文库筛选HBX相互作用蛋白*

目的：筛选鉴定新的乙肝病毒X蛋白（hepatitis B viral X protein,HBX）相互作用蛋白。方法：以HBX为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4 DBD（DNA binding domain）融合表达,将人肝脏cDNA文库编码的蛋白与GAL4的AD区（activation domain）融合表达。通过酵母双杂交筛选鉴定肝脏中与HBX相互作用的蛋白。筛选得到的阳性酵母转化子,经质粒提取和测序后,分析其所包含的序列编码的蛋白,通过再次验证,初步确定该蛋白是否与HBX具有相互作用。结果：筛选得到5个潜在的能与HBX相互作用的蛋白。结论：通过酵母双杂交cDNA文库筛选,得到多个潜在的HBX相互作用蛋白,进一步的验证及功能研究将对揭示HBX促进肝癌发生的机制起到重要的推动作用。     

海人藻酸诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化机制的研究

目的：探讨海人藻酸（Kainic acid, KA）注射诱导大鼠海马CA1区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3酶原（cysteine aspartate-specific proteasezymogen,Procaspase3）巯基去亚硝基化的机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组（sham组）、KA注射组（KA组）、给药组（NS102组,DNCB组,GSNO组）及溶剂对照组（生理盐水组,DMSO组）。采用KA侧脑室注射构建大鼠癫痫模型。运用生物素转化法检测蛋白质巯基亚硝基化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹方法对Procaspase3巯基去亚硝基化进行分析,焦油紫染色法观察大鼠成活海马神经元的数量。结果：与sham组相比,KA组Procaspase3巯基亚硝基化水平明显降低,与KA组相比,NS102组、DNCB组和GSNO组Procaspase3巯基亚硝基化水平显著上升,差异均有统计学意义（P<0.05）,但DMSO组和生理盐水组差异无统计学意义。说明注射浓度为0.6 μg/10μL的KA能够诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化;KA通过激活KA受体导致大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化,KA受体抑制剂NS102能够抑制Procaspase3巯基去亚硝基化;TrxR参与调节KA诱导的大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化;外源性NO供体能够抑制Procaspase3巯基去亚硝基化。焦油紫染色结果显示,与KA组相比,NS102组、DNCB组和GSNO组神经元损伤降低。结论：KA注射通过激活KA受体诱导大鼠海马CA1区Procaspase3巯基去亚硝基化,Procaspase3巯基去亚硝基化受TrxR和外源性NO调节,抑制Procaspase3巯基去亚硝基化对海马神经元具有保护作用。     

全脑缺血再灌注诱导大鼠海马CA1区 GluR6巯基亚硝基化的机制

目的 用大鼠全脑缺血模型探讨全脑缺血再灌注诱导大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化的机制。方法 将78只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、全脑缺血再灌注组（I/R组）、给药组（7-NI组、GSNO组、SNP组、NS102组）及溶剂对照组[生理盐水（Saline）组、DMSO组],每组6只。采用四动脉结扎去结扎法构建大鼠全脑缺血再灌注模型。运用生物素转化法检测蛋白质的巯基亚硝基化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹方法对GluR6巯基亚硝基化水平进行分析研究。结果 全脑缺血再灌注后,I/R组GluR6巯基亚硝基化水平高于Sham组,差异有统计学意义（P＜0.05）,7-NI组GluR6巯基亚硝基化水平相比I/R组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,溶剂DMSO组与I/R组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;GSNO组和SNP组GluR6巯基亚硝基化水平比I/R组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,溶剂Saline组与I/R组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;NS102预处理组GluR6巯基亚硝基化水平比I/R组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,溶剂DMSO组与I/R组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 7-NI、GSNO、SNP 和NS102都能抑制脑缺血再灌注诱导的GluR6巯基亚硝基化。nNOS介导产生的内源性NO介导全脑缺血再灌注诱导的大鼠海马CA1区GluR6巯基亚硝基化,并受外源性NO影响;全脑缺血再灌注通过激活KA受体诱导大鼠海马CA1区GluR6发生巯基亚硝基化。