东亚钳蝎Na+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达

利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库,并通过序列比对确定了一条全新的Na⁺通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列。序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性,通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构,经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定,而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致。进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统,通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间,并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx12-Fc融合蛋白。经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95%。此外,全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1 μmol/L浓度下能增大20% Nav1.7峰电流。研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础。     

B淋巴细胞激活因子的全人源抗体对BAFF生物学活性的拮抗作用

通过注射人B淋巴细胞激活因子(hsBAFF)的全人源抗体scFv-Fc,观察其对hsBAFF引发的B细胞增殖与分化的拮抗作用。将ICR小鼠随机分为对照组、hsBAFF(1 mg.kg 1)组、hsBAFF(1 mg.kg 1)+Ab(1mg.kg 1)组、hsBAFF(1 mg.kg 1)+Ab(2 mg.kg 1)组、hsBAFF(1 mg.kg 1)+human IgG(1 mg.kg 1)组和hsBAFF(1 mg.kg 1)+human IgG(2 mg.kg 1)组。采用MTT、ELISA及流式细胞检测,分别考察各组小鼠脾脏指数、脾脏B淋巴细胞增殖活性及成熟分化和血浆中抗体水平。结果表明:通过注射scFv-Fc有效抑制了hsBAFF引起的脾脏B细胞增殖以及血浆中抗体水平的升高;同时scFv-Fc也显著抑制了hsBAFF引发的B细胞成熟分化,具有潜在的抗体药物开发价值。