GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1在乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移中的作用

目的:研究GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1[Ras-GTPase activating protein(Src homology domain 3)binding protein 1,G3BP1]在乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移过程中的作用.方法:人乳腺癌细胞MDA-MB-231培养于RPMI1640培养基中;Western blot检测无表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)刺激,以及10 ng/ml EGF分别刺激30秒、1分钟、2分钟和5分钟条件下乳腺癌细胞内G3BP1、蛋白激酶Cζ(Protein kinase Cζ,PKCζ)、Akt、pPKCζThin410/403及pAktSer473的表达水平;免疫共沉淀法检测乳腺癌细胞内G3BP1与PKCζ的相互作用;转染小干扰RNA抑制内源性G3BP1的表达;趋化实验和侵袭实验分别检测G3BP1抑制前后MDA-MB-231细胞穿过10 μm聚碳酸酯膜及人工基底膜的细胞数.结果:Western blot检测显示G3BP1在MDA-MB-231细胞内过表达;无EGF刺激时MDA-MB-231细胞内G3BP1,PKCζ与Akt均过表达,pPKCζThe410/403及pAktSer473不表达或低于Western blot检测下限;10 ng/ml EGF刺激后G3BP1、PKCζ与Akt表达水平不变,pPKCζThr410/403及pAktSer473的表达刺激时间增加而升高,至5分钟时达到峰值;在乳腺癌细胞内G3BP1与PKCζ具有相互作用;G3BP1表达抑制后乳腺癌细胞的趋化能力和侵袭能力均显著下降(P ＜0.05,P＜0.05).结论:G3 BP1通过与PKCζ相互作用,在乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外迁移过程中发挥重要作用.     

人类辅助生殖技术研究进展

自从世界上第1例"试管婴儿"诞生以来,人类辅助生殖技术已经走过了30年的发展历程。随着人们对配子与胚胎培养条件的不断优化,辅助生殖技术的成功率显著提高,现已成为治疗不孕不育症的理想治疗措施之一。近年来,一系列辅助生殖相关技术,如卵子体外成熟、移植前遗传学诊断、单胚胎移植以及冷冻技术等获得了较大的发展,为降低常规体外受精—胚胎移植的费用、风险等提供了可能。该文主要就当前临床及实验性辅助生殖技术的相关研究进展作以综述。     

GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1表达下调对人肺癌细胞A549体外迁移的抑制作用

目的研究GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1〔GTPase activating protein(Src homology domain 3)binding protein 1,G3BP1〕是否在人非小细胞肺癌细胞系A549体外迁移中起作用,以判断该蛋白质是否可以作为抗肿瘤药物靶点。方法人非小细胞肺癌细胞系A549及乳腺癌细胞系MDA-MB-231培养于10%(V/V)的RPMI1640培养基中。以G3BP1过表达的乳腺癌细胞系MDA-MB-231作为阳性对照,采用Western印迹法检测A549细胞内G3BP1的表达情况;向A549细胞内转染以G3BP1的mRNA为靶标的小干扰RNA(siRNA)以抑制G3BP1的表达;分别检测G3BP1表达抑制后A549细胞穿过8μm聚碳酸酯膜细胞数、定向运动距离及穿过人工基底膜细胞数。结果 Western印迹法显示G3BP1在非小细胞肺癌细胞系A549中过表达;转染siRNA后72 h内提取A549细胞蛋白质,Western印迹法检测显示G3BP1表达被完全抑制;G3BP1表达抑制后A549细胞穿过8μm聚碳酸酯膜细胞数、定向运动距离及穿过人工基底膜细胞数均显著减少(P<0.05)。结论下调G3BP1表达抑制人肺癌细胞A549的体外迁移。     

羊布鲁氏菌omp25基因原核表达载体的构建与鉴定

目的:利用PCR反应从羊布鲁氏菌基因组DNA中克隆omp25基因,并将其构建到原核表达载体pET-32a中。方法:试剂盒法提取羊布鲁氏菌基因组DNA,设计合适的引物,通过PCR反应从基因组中扩增外膜蛋白OMP25的编码基因(omp25)。将得到的基因片段连接到克隆载体pMD19-T的多克隆位点(MCS)中,将连接体pMD19-T-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析与序列测定。利用酶切与连接反应将目的基因(omp25)插入载体pET-32a的多克隆位点中,将连接体pET-32a-omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析。结果:PCR扩增得到的基因片段与GenBank中已公布的羊布鲁氏菌omp25基因同源性为99%。酶切分析结果表明,omp25基因成功地插入载体pET-32a中。结论:成功地扩增得到了羊布鲁氏菌omp25基因并构建了携带该基因的重组原核表达载体pET-32a-omp25,为后续的研究提供了可靠的基础。     

趋化因子及其受体在肿瘤转移中作用的研究进展

肿瘤的转移是疾病恶化的重要指征,也是由多种细胞因子参与的复杂的调控过程。研究揭示,除诱导正常细胞发生基因突变之外,趋化因子与趋化因子受体在肿瘤转移的多个阶段均发挥调控作用。本综述按照肿瘤的发展过程,对趋化因子及其受体在肿瘤转移中的调控作用进行总结。     

基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路探讨七味白术散对糖尿病脑病大鼠认知功能障碍的影响

目的 观察七味白术散对糖尿病脑病（DE）大鼠模型的治疗作用，基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）通路探究其可能存在的机制。方法 选取SPF级雄性Wistar大鼠48只，随机分为空白组8只、高脂饲料组40只。高脂饲料组大鼠喂养12周后，连续2 d腹腔注射35 mg·kg^-1的1%链脲佐菌素构建DE模型，空白组大鼠注射等量柠檬酸钠缓冲液。造模成功后，按血糖和体质量随机分为模型组、七味白术散低、中、高剂量组（3.15、6.3、12.6 g·kg^-1）、联合西药组（二甲双胍+罗格列酮，0.21 g·kg^-1），每组各6只。给药组灌胃给予相应剂量药物，空白组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续给药6周。采用Morris水迷宫检测DE大鼠空间记忆能力，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测空腹胰岛素（FINS）水平并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马组织病理变化，ELISA检测海马组织氧化应激指标，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马组织PI3K、Akt、核转录因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、和白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马中PI3K、Akt、磷酸化（p）-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达情况。结果 与空白组比较，模型组大鼠FINS、HOMA-IR值均显著增高（P<0.01）；找到平台原位置的路径显著增长，逃避潜伏期显著延长（P<0.01）；海马组织神经细胞形态破坏；大鼠海马活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）水平升高和超氧化物歧化酶（SOD）活性降低（P<0.05，P<0.01）；PI3K、Akt mRNA表达水平显著降低（P<0.01），NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达水平升高（P<0.05，P<0.01）；PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01），GSK-3β表达显著增加（P<0.01）。与模型组比较，七味白术散中剂量组和联合西药组FINS、HOMA-IR值均显著下降（P<0.01）；大鼠找到平台原位置的路径显著缩短，逃避潜伏期缩短（P<0.01）；大鼠海马组织结构逐渐恢复，神经细胞形态破坏程度明显改善；大鼠海马组织中ROS、MDA含量降低和SOD水平升高（P<0.01）；PI3K、Akt mRNA表达水平显著升高（P<0.01），NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达升高，GSK-3β表达显著降低（P<0.01）。结论 七味白术散可以缓解DE大鼠的胰岛素抵抗，其可能是通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路来修复DE大鼠海马神经元损伤，改善DE大鼠学习认知能力。