果糖氨基酸氧化酶的原核表达及在糖化血红蛋白检测中的初步应用

摘要：目的：原核表达果糖氨基酸氧化酶（FAOX）,建立检测糖化血红蛋白A1c（HbA1c）的酶法并作初步评价。 方法：构建重组质粒pET32a(+)/FAOX,转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),获得重组FAOX;以糖基化六肽为底物检测酶活性;初步建立检测HbA1c的酶法并进行方法学评价。 结果：重组FAOX在Rosetta(DE3)中高效表达,SDS-PAGE电泳分析显示其相对分子质量（Mr）约65 000;酶比活性为22 U/mg;建立的检测HbA1c酶法的批内、批间、日间CV均<5%;低值（5.1%）和高值（15.8%）HbA1c的回收率分别为98.1%和98.9%;总胆红素(＜220 μmol/L）、三酰甘油(＜10.8 mmol/L）和维生素C(＜500 mg/L）对酶法检测HbA1c无影响;与HPLC法和HA-8160型全自动糖化血红蛋白仪测定结果进行比较,相关系数分别为0.977和0.993。 结论：FAOX可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中高效表达,用其建立的检测HbA1c的酶法可满足临床对HbA1c测定的要求。     

两种常见缺失型β-珠蛋白生成障碍性贫血的基因型及血液学表型特征

目的 探讨广州市花都区育龄人群中国型^Gγ⁺(^Aγδβ)⁰珠蛋白生成障碍性贫血即地中海贫血(简称地贫)和东南亚型遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症(SEA-HPFH)的基因型分布及血液学表型特征。方法 选取2018年1月至2021年7月在广州市花都区妇幼保健院经地贫基因检测的18 848例受检者,进行血常规及血红蛋白(Hb)电泳检测,对疑为β-地贫但常规地贫基因型未检出者,采用跨越断裂点聚合酶链反应检测中国型^Gγ⁺(^Aγδβ)⁰地贫和SEA-HPFH基因型,并对其血液学参数进行统计分析。结果 在18 848例受检者中检测出中国型^Gγ⁺(^Aγδβ)⁰地贫7例,其中复合东南亚型α-地贫杂合子(--^SEA/αα) 1例;检出SEA-HPFH 20例,其中复合--^SEA/αα 1例,α^W...     

弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及鉴定

目的: 原核表达刚地弓形虫RH株棒状体蛋白(rhoptry proteins, ROPs)18,建立检测和定位虫体ROP18蛋白的方法。方法: 运用PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子ROP18基因,克隆至pET-28a(+)载体,转化至大肠埃希菌Rosetta中诱导表达,经KCl染色切胶纯化重组ROP18蛋白,并制备其兔多克隆抗体。采用蛋白质印迹技术和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测和定位ROP18在弓形虫速殖子体内的表达。结果: 成功表达重组ROP18蛋白,并获得其多克隆抗体。经蛋白质印迹技术检测出虫体ROP18特异性条带,IFA技术检测出ROP18分布于虫体棒状体。结论: 通过制备多克隆抗体,利用蛋白质印迹技术和IFA技术能检测和定位ROP18蛋白在弓形虫体内表达。     

产褥期新模式保健对产褥期妇女健康状况的影响

目的探讨产褥期新模式保健对产褥期妇女健康状况的影响。方法 3 000例孕妇,产前给予产褥期新模式保健的健康教育,产后42～60 d进行血常规、尿常规、白带常规、子宫附件B超等检查,并进行问卷调查,了解产妇产褥期的饮食、行为、母乳喂养情况、产褥期常见症状和疾病发生情况,以及抑郁和焦虑等心理健康状态。结果 3 000例产妇中,有92.97%产妇洗头,94.83%产妇洗澡,91.10%产妇吃蔬菜,85.20%吃水果,3 000例产妇都会维持刷牙、清洗外阴、晒太阳、开窗通风等日常良好习惯。38.93%产妇存在轻度焦虑,19.23%产妇存在中度焦虑,40.00%产妇存在轻度抑郁,14.63%产妇存在中度抑郁;91.50%产妇出汗异常,75.50%产妇出现异常口渴,75.20%产妇出现产后身痛,47.40%产妇出现便秘,84.43%产妇出现恶露不绝,26.30%产妇出现产褥期失眠,18.13%产妇出现产褥期感冒,14.78%产妇出现乳腺炎等。结论在知晓产褥期保健知识并按产褥期新模式保健"坐月子"后,产褥期妇女的心理健康状况仍然不容乐观,其身体健康状况也欠佳,需要进一步研究和完善产褥期保健模式。     

溶藻弧菌引起肠道感染1例

溶藻弧菌为嗜盐性弧菌之一 ,可从耳渗出液或创伤脓液中发现。常为海水感染创面的蜂窝组织炎病原菌 ,而由溶藻弧菌引起的肠炎未少见 ,现报告如下 :患者男 ,2 3岁 ,于 2 0 0 0年 7月 18日下午 7时在街道某地摊上食虾等水产品 ,致使患者在短时间内出现多次不同程度的腹痛、腹泻 ,无发热、呕吐症状 ,于 7月 19日清晨入院治疗。实验室检查 :大便为黄色 ,稀水样。镜检 :ＷＢＣ ,ＲＢＣ少许。静滴庆大霉素 ,口服氟呱酸等治疗 1ｄ ,病情得到控制。细菌鉴定 :取未治疗前水样便接种于碱性蛋白胨水中进行增菌培育。经 6ｈ培养后 ,对碱性蛋白胨水增菌液…     

染色体微阵列芯片联合核型分析在高龄孕妇产前诊断的应用价值

目的 探讨染色体微阵列芯片联合核型分析在高龄孕妇产前诊断的应用价值。方法 收集2020年1月至2023年3月在广州市花都区妇幼保健院产前诊断中心就诊的孕妇2175例,其中969例(44.55%)高龄孕妇作为本研究的入选孕妇,分别对入选孕妇进行染色体核型分析或CMA检测,并比较两种检测方法的检出率及差异性。结果 948例高龄孕妇胎儿染色体核型分析异常检出率为4.11%,607例高龄孕妇胎儿CMA异常检出率为7.58%,586例高龄孕妇胎儿染色体微阵列芯片联合核型分析的异常检出率为8.53%,染色体微阵列芯片的异常检出率高于染色体核型分析的异常检出率(P=0.003),染色体微阵列芯片联合核型分析的异常检出率高于染色体核型分析的异常检出率(P=0.000),高于染色体微阵列芯片的异常检出率(P=0.545)。结论 染色体微阵列芯片+核型分析联合诊断,能显著提高产前诊断的异常核型检出率,从而避免了漏诊风险,为胎儿预后评估及夫妻再生育提供科学依据,对降低出生缺陷患儿具有重大的社会效益。     

广州北部地区αβ复合型地中海贫血基因型和血液学特征

目的探讨广州北部地区αβ复合型地中海贫血人群基因突变类型和血液学特征。 方法选择2018年1月至2019年12月在广州市花都区妇幼保健院进行地中海贫血基因检测的门诊、住院和体检的广州北部地区14 600例受检者,采用血常规联合血红蛋白电泳分析对受检者进行地中海贫血血液学筛查,对于初筛阳性者采用跨越断裂点聚合酶链式反应(Gap-PCR)＋导流杂交法检测常见α和β-地中海贫血基因型,对于少见型则采用三联体电泳或基因测序法进一步检测,在αβ复合型地中海贫血组(n＝254)患者中选择临床表现为β-地中海贫血的患者(n＝250),与采用随机数字表法选取的单纯β-地中海贫血组(n＝250)进行血液学指标比较。 结果在14 600例受检者中检测出254例αβ复合型地中海贫血基因携带者,群体发生率为1.74%(254/14 600);共检出41种αβ复合型地中海贫血基因型,以--^SEA/αα复合β^IVS-Ⅱ-654/β^N最多(40例),其次是--^SEA/αα复合β^CD41-42/β^N(32例),-α^3.7/αα复合β^CD41-42/β^N(25例)居第三位;在254例αβ复合型地中海贫血患者中,有250例患者表现为β-地中海贫血,对其红细胞(RBC)[(5.62±0.74) ×10¹²/L]、平均红细胞体积(MCV)[(67.64±5.52)fl]、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)[(21.68±1.73)pg]与单纯β-地中海贫血组[(6.10±0.85)×10¹²/L,(63.61±5.01)fl,( 20.49±1.89)pg]比较,均差异有统计学意义(t＝4.86,－6.14,－5.24;均P<0.01);而血红蛋白(HGB)[(121.52±14.67)g/L]和血红蛋白A₂(HbA₂)[(5.23±0.51)%]与单纯β-地中海贫血组[(124.42±15.20)g/L,(5.29±0.55)%]比较,均差异无统计学意义(t＝1.55,0.79;均P>0.05)。 结论广州北部地区αβ复合型地中海贫血基因型复杂多样,发病率高,具有高度的遗传异质性和多样性,缺乏特异性的血液学指标。血液学表型与基因检测结果不相符时,要考虑存在罕见型地中海贫血的可能,αβ复合型地中海贫血基因型的确诊还需依靠分子诊断的方法。     

3218例煤矿职工乙肝标志物检测结果分析

目的监测现代化大型煤矿企业职工乙肝病毒（HBV）的感染及流行情况,力求采取一定的措施,将HBV在矿井的传播及流行降至最低限度。方法采用酶联免疫吸附（ELISA法）测定法,对体检的3218例煤矿职工进行乙肝五项的测定。结果乙肝五项检测的3218例体检者当中,共有757例为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）＋,占23.52％。检测者中以HBsAg＋、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）＋、乙型肝炎病毒核心抗体（HBeAb）＋模式最多见,其次为HBsAg＋、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）＋、HBcAb＋组合模式。结论采取相应措施,可有效控制HBV在煤矿职工中的传播与流行。     

广州市花都区育龄人群Beta-地中海贫血基因型分布

目的探讨广州市花都区育龄人群β-地中海贫血的基因携带率、突变类型及分布情况，并筛查出夫妇双方同时携带β-地中海贫血基因型的高风险家庭。 方法选择2018年1月至12月，在广州市花都区妇幼保健院参加免费优生健康检查的育龄人口共计6 494对(共12 988例)，收集经地中海贫血初筛[平均红细胞体积(MCV)↓和(或)平均红细胞血红蛋白含量(MCH)↓]检查为阳性的乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝全血标本2 240对(共4 480例)，采用聚合酶链反应(PCR)＋导流杂交法检测β-地中海贫血基因17个常见位点的突变类型，对于未知突变型基因则采用直接测序法进行β-珠蛋白测序，并对检测结果进行统计分析。如果夫妻双方同时携带β-地中海贫血基因，则归属于高风险人群。 结果6 494对(共12 988例)受检者中，共检测出504例带有β-地中海贫血基因突变，检出率为3.88%。共检出12种常见β-地中海贫血基因型，构成比最高的3种基因型依次是βCD41-42(208/504，41.27%)、βIVS-II-654(143/504，28.37%)、β-28(66/504，13.09%)；检出2种少见缺失型，分别为SEA-HPFH、^Gγ^＋(^Aγδβ)⁰；检出β复合α地中海贫血基因突变者79例，检出率为0.61%(79/12 988)。检测到β-地中海贫血高风险家庭17户。 结论广州市花都区属于β-地中海贫血高发区，且基因型复杂多样，主要以βCD41-42为主，同时应注意罕见型β-地中海贫血基因的检测。