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1.
“五步”实验教学法在生化教学中的应用 总被引:1,自引:1,他引:0
为了在生化实验教学中培养学生科学性思维、创新性思维能力,训练学生基本操作技能,在生化实验教学过程中可采取循序渐进的“五步”实验教学法、以期达到将学生培养成具有较强基本操作技能、具有科学性、创新性、综合能力较强的高素质人才的目的。 相似文献
2.
芸香苷诱导K562细胞凋亡机制 总被引:6,自引:0,他引:6
目的研究芸香苷诱导白血病K 562细胞凋亡过程中caspase-3基因及细胞色素C的表达。方法体外培养白血病K 562细胞,M TT法观察细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/P I双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,TR IZOL试剂提取K 562细胞RNA,核酸定量仪检测纯度,RT-PCR扩增,紫外透射检测扩增产物,扩增产物测序,观察caspase-3的表达,4×1-0 5m o l/L药物处理细胞后,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,W estern b lotting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达。结果芸香苷浓度为2×1-0 5、4×10-5、8×10-5m o l/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;不同浓度芸香苷处理K 562细胞44h后,应用M TT比色法计算IC50为4×1-0 5m o l/L;4×10-5m o l/L芸香苷处理细胞24 h后,Hoechest 33342/P I双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香苷处理后G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到500 bp条带,产物经过序列测定证实芸香苷处理细胞诱导caspase-3基因的表达;W estern B lotting检测线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带。结论芸香苷诱导K 562细胞caspase-3基因表达,细胞色素C通过线粒体膜进入胞浆,导致细胞线粒体功能异常,细胞发生凋亡,线粒体途径诱导白血病细胞凋亡是其作用机制之一。 相似文献
3.
利用基因芯片分析二氢青蒿素的抗肿瘤作用机制 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:通过基因芯片对二氢青蒿素处理的K562细胞基因表达情况的检测,探讨二氢青蒿素抑制K562增殖的作用机制。方法:配制1×10-5,4×10-5,16×10-5,64×10-5,256×10-5 mol·L-1二氢青蒿素处理K562细胞24 h,倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞变化,流式细胞仪检测细胞周期,提取总RNA,逆转录成cDNA与基因芯片杂交,扫描仪检测杂交结果。结果:倒置光显微镜下细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降。荧光显微镜下染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块,即凋亡小体。流式细胞仪G2期细胞的比例增加。扫描杂交结果显示有13条基因表达有差异,其中chk1表达上调,PCNA,cyclinB1,cyclinD1,cyclinE1,cdk4,cdk2,E2F1,DNA-PK,DNA-TopoⅠ, mcl-1,jNK,VEGF表达下调。结论:二氢青蒿素可以抑制K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡等有关。 相似文献
4.
目的:探讨STAT3-siRNA对肝癌细胞pim-2基因表达的影响.方法:设计靶向stat3基因的siRNA-SECs,构建重组表达质粒,在体外基于脂质体来实现介导,对SMMC-7721转染,在对转染效果进行分析的过程中所采用的主要方法为Western blot和半定量RT-PCR分析.结果:转染STAT3-siRNA... 相似文献
5.
目的:靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位合成反义寡核苷酸(ASODN)并将其转染至survivin表达阳性的HT29细胞中,观察HT29细胞中caspase-3的表达。方法:将survivin ASODN转染至HT29细胞中。噻唑蓝(Mar)法观察survivin ASODN的细胞毒作用,测定IC50;Hoechst 33342/PI双荧光染色,观察转染HT29细胞核变化;提取各组细胞总RNA,RT-PCR观察Caspase-3的表达。结果:不同浓度的survivin ASODN分别处理HT29细胞44h后,IC50值为1000nmol/L。1000nmol/L survivin ASODN处理HT29细胞36h后,荧光显微镜下可见凋亡小体。PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到500bp条带,产物经过序列测定证实为Caspase-3。结论:survivin ASODN可显著抑制HT29细胞增殖,诱导其凋亡。Caspase-3基因表达是其诱导HT29细胞凋亡的机制之一。 相似文献
6.
【目的】探讨survivin反义寡核苷酸(Antisense Oligodeoxy-nucleotid,ASODN)对5-FU(5-氟尿嘧啶)诱导人红白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。【方法】体外培养K562细胞,合成survivin ASODN并经脂质体转染至K562细胞内,MTT法观察survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN的细胞毒作用,Hoechst33342/PI双荧光染色观察各组细胞核形态,镜下计算各组细胞凋亡率。【结果】400、600、800、1000nmol/L survivin ASODN处理K562细胞44 h后,IC50为800 nmol/L;与单独使用survivin ASODN或5-FU相比,5-FU联合800 nmol/L survivin ASODN后细胞生长明显受到抑制(P<0.01);Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN组均出现明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现。镜下细胞计数,survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN组细胞凋亡率分别为54.55%、53.85%、86.70%。【结论】Survivin ASODN可增强K562细胞对5-FU的敏感性。 相似文献
7.
微量泵是一种定容型输液装置,精确度高,流速稳定,用液量少,可以为危重病患者提供可靠的药物浓度,而成为临床治疗的常规仪器。微量泵的使用也成为护士必须熟练掌握的基本护理技能,若此项技能掌握不好,则有可能导致不良事件的发生。本文总结使用微量泵的常见问题及护理对策,减少不良事件的发生,从而保障患者在微量泵治疗过程中的生命安全。 相似文献
8.
5,7-0-异丙亚基-对甲基哥纳香醇甲诱导白血病K562细胞凋亡 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究5,7-0-异丙亚基-对甲基哥纳香醇甲对白血病细胞凋亡的影响。方法:体外培养白血病细胞K562,应用MTT法测定IC50,Hoechst33342/PI双荧光染色观察细胞核形态,透射电镜观察细胞凋亡情况。结果:5,7-0-异丙亚基-对甲基歌纳香醇甲处理K562细胞24h IC50约为10^-5mol/L,可观察到明显核固缩,凝集等细胞凋亡表现,透射电镜下观察到染色质凝集等改变。结论:5,7-0-异丙亚基-对甲基哥纳香醇甲可诱导K562细胞凋亡。 相似文献
9.
目的利用基因芯片检测青蒿琥酯作用于K562细胞后的基因表达情况,从基因水平上探讨青蒿琥酯抑制K562细胞增殖的作用机制。方法K562细胞经不同浓度青蒿琥酯处理24h,倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期变化。提取总RNA,逆转录生成cDNA,cDNA与基因芯片杂交,扫描仪检测杂交结果。结果倒置光显微镜观察到青蒿琥酯处理的K562:细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,漂浮细胞增多。荧光显微镜观察到青蒿琥酯处理的K562:细胞染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块,即凋亡小体。流式细胞仪检测青蒿琥酯处理K562细胞G2期细胞的比例明显增加。扫描信号,分析数据显示10条基因表达有差异,p21、chk1表达上调,cyclinB1、cyclinE1、E2F1、DNA-PK、hTERT、bcl-2、jnk、VEGF表达下调。结论青蒿琥酯可以抑制K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡有关。 相似文献
10.
导师制引入本科生化教学中的几点体会 总被引:1,自引:0,他引:1
生物化学是医学基础课的重点和难点之一。如何搞好教学改革,提高生化课的教学质量的问题亟待解决。将研究生教育中的导师制引入本科教育中来,是教学方法改革的一个探索。从学生的视角分析了这种教改对于提高教学质量,培养具有综合素质人才的重要意义。 相似文献