重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究

目的痘苗病毒作为疫苗载体具有接种途径简单、高滴度、低成本等优点,重组痘苗病毒投入使用之前进行理化特性试验,对重组痘苗病毒的生产、运输和保存有一定重要意义。方法将重组痘苗病毒rVTT-JEVE作热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声波以及紫外线处理,然后接种到BHK-21细胞上,观察rVTT-JEVE毒价的变化,分析理化因素对rVTT-JEVE的影响。结果在pH3~9范围内,酸碱度变化不会引起rVTT-JEVE毒价的显著变化。rVTT-JEVE经50℃处理60min、30min和60℃处理15min可被灭活;对5%的氯仿敏感;经终浓度0.5%的胰蛋白酶37℃作用1h,病毒毒价降低2个滴度;对25%的乙醚不敏感;经40KHz超声波处理60min和80KHz处理30min即可灭活;30W紫外灯垂直距离10cm照射15min、30cm照射30min即可灭活。结论 rVTT-JEVE耐热、酸、碱、乙醚、氯仿及胰蛋白酶,对超声波、紫外线较敏感。     

基因Ⅲ型乙型脑炎病毒Real-time PCR检测方法的建立及应用

目的建立针对云南地区流行的基因Ⅲ型乙型脑炎病毒株Real-time PCR检测方法。方法根据云南地区分离株乙型脑炎病毒株(Yunnan0901)基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒,以此为模板进行SYBR GreenⅠReal-time PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法,并与普通RT-PCR方法相比较。结果建立的SYBR GreenⅠReal-time PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。与RT-PCR方法相比,SYBR GreenⅠReal-time PCR的灵敏度高10倍,而且不与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸发生非特异性扩增,具有良好的特异性。用该方法检测云南部分地区的蚊虫样品,其中库蚊、按蚊乙型脑炎病毒阳性率分别为17.4%和30.7%,且主要为基因型Ⅲ型。结论本实验建立的检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的SYBR GreenⅠReal-time PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等特点,可应用于乙型脑炎疫情的监测。     

基因Ⅲ型乙型脑炎病毒Real-time PCR检测方法的建立及应用北大核心CSCD

目的建立针对云南地区流行的基因Ⅲ型乙型脑炎病毒株Real-time PCR检测方法。方法根据云南地区分离株乙型脑炎病毒株(Yunnan0901)基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒,以此为模板进行SYBR GreenⅠReal-time PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法,并与普通RT-PCR方法相比较。结果建立的SYBR GreenⅠReal-time PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。与RT-PCR方法相比,SYBR GreenⅠReal-time PCR的灵敏度高10倍,而且不与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸发生非特异性扩增,具有良好的特异性。用该方法检测云南部分地区的蚊虫样品,其中库蚊、按蚊乙型脑炎病毒阳性率分别为17.4%和30.7%,且主要为基因型Ⅲ型。结论本实验建立的检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的SYBR GreenⅠReal-time PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等特点,可应用于乙型脑炎疫情的监测。     

“讲者”培训对提高眼科住院医师核心胜任力的研究

培养住院医师的核心胜任力的教学能力和终身学习力是眼科住院医师培训课程设置的新热点。在中南大学湘雅医院眼科中心住院医师规范化培训基地,设计以住院医师为核心的分级“讲者”培训课程,以培养各级住院医师的主动学习、归纳总结及表达能力;并根据第一阶段住院医师所处的不同阶段提供不同培训任务,利用线上、线下多种平台提供展示机会,使其成长为不同级别的讲者。通过由易到难、循序渐进的“讲者”分级培训,进一步强化培养住院医师的核心胜任力,使其从思维模式上被培养成主动学习者,从教学能力上被培养成为带教学员或讲师,并更能胜任未来的学习和工作。     

铜绿假单胞菌医院感染的现状及耐药性

铜绿假单胞菌广泛分布于自然界,是一种常见的条件致病菌。近年来,由于广谱抗菌药物、激素及免疫抑制剂的广泛应用,各种侵入性治疗操作的不断普及,该菌的检出率不断增高,并呈现多重耐药,已成为医院感染的重要病原菌之一,给临床治疗带来了极大的困难。因此,为提高我院感染性疾病的临床治愈率,降低死亡率,为临床提供诊断和治疗依据,我们对我院2006年1月-2008年12月临床分离的428株铜绿假单胞菌的耐药性进行统计分析,现报道如下。     

探讨脑梗死患者血小板相关参数的检测意义

目的探讨脑梗死患者血小板（platelet,PLT）及其相关参数的变化及临床意义。方法选择脑梗死急性期患者43例,脑梗死恢复期患者63例和正常对照者85例,采用库尔特HMX五分类血细胞分析仪检测受检者PLT、平均血小板体积（mean platelet volume,MPV）和血小板分布宽度（platelet distribution width,PDW）并进行统计学分析。结果脑梗死急性期与恢复期及对照组比较,MPV、PDW水平均升高,PLT水平降低,且差异均有统计学意义（P均〈0．05）。梗死面积越大,PLT、MPV、PDW水平越高,且组间比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论PLT参数的检测对脑梗死患者病情的判断有重要意义。     

临床标本的念珠菌感染分类和药敏分析

目的 了解医院念珠菌感染的病原菌分类及药敏分析.方法 各种临床标本经分离培养后,用改良纸片法测定标本分离的各类念珠菌对氟康唑的敏感性.结果 临床念珠菌感染中以白念珠菌为主(52.0%),热带念珠菌(17.2 %),光滑念珠菌(10.1%),克柔念珠菌(9.4%),其他念珠菌(11.4 %).非白念珠菌感染呈上升趋势.两性霉素、制霉菌素耐药率最低,分别为6.1 %、3.4%,其次为伊曲康唑(17.0%),氟康唑耐药率最高(57.1 %),克柔念珠菌是耐药性较强的念珠菌,其次是光滑念珠菌、热带念珠菌;非白念珠菌与白念珠菌相比耐药率有显著差异.结论 临床标本的念珠菌感染呈上升趋势,应加强念珠菌的检测和耐药性分析,临床经验用药应依据药敏结果 合理选用.     

欧洲型PRRSV、PCV2二联重组痘苗病毒疫苗猪体免疫实验研究

目的评价实验室构建的欧洲型PRRSV和PCV2二联重组痘苗病毒猪体免疫效果。方法分别用重组痘苗病毒rVTT-PCV2-ORF2-EU-ORF3-ORF5和rVTT-EU-ORF3-ORF5进行猪体免疫试验,每周采血,分离血清,采用ELISA检测病毒特异性抗体、中和抗体检测及细胞因子水平,评价免疫效果。结果 rVTT-PCV2-ORF2-EU-ORF3-ORF免疫组35d时,猪血清欧洲型PRRSV GP3和GP5及PCV2ORF2特异性抗体,显著高于野毒组（t=6.61,t=9.21,t=10.34,P〈0.05）;猪血清中和抗体35d时,各免疫组均可产生较高的免疫水平,差异均无统计学意义（t=0.48,P〉0.05）;重组痘苗病毒疫苗rVV-ORF2-EU-ORF3-ORF5免疫可诱导IL-4和IFN-γ产生,增强猪体细胞免疫应答水平。结论欧洲型PRRSV、PCV2二联重组痘苗病毒疫苗能诱导猪体产生体液和细胞免疫应答,为欧洲型PRRSV、PCV2的新型疫苗研究奠定了实验基础。     

应用不同表达载体表达欧洲型PRRSV ORF5蛋白的研究北大核心CSCD

目的构建多种欧洲型PRRSV GP5蛋白原核表达载体,并比较其在大肠埃希菌中的表达效率。方法参考GenBank发表的欧洲型PRRSV LV株(GenBank登录号:M96262)ORF5序列,通过序列分析,设计合成ORF5全基因序列扩增引物及信号肽缺失引物。构建原核表达质粒pET-28a-GP5、pET-28a-gGP5、pET-22b-GP5、pET-22b-gGP5、pET-32a-GP5、pET-32a-gGP5、pGEX-4T-GP5、pGEX-4T-gGP5,经IPTG诱导后采用SDS-PAGE电泳分析GP5蛋白在各个原核表达载体的表达情况。结果 pET-28a-gGP5、pET-22b-gGP5、pET-32a-gGP5均没有高效的表达出缺失信号肽的GP5蛋白,缺少信号肽的GP5蛋白在pGEX-4T-1载体中高效表达,目的蛋白分子质量单位为42ku,与理论值相符。没有缺失信号肽的GP5蛋白在pET-28a-GP5、pET-22b-GP5、pET-32a-GP5、pGEX-4T-GP5,均未得到高效表达。结论本实验构建的重组原核表达载体pGEX-4T-gGP5能在大肠埃希菌中高效表达欧洲型PRRSV GP5蛋白,为进一步分析该蛋白的抗原性奠定了基础。     

应用不同表达载体表达欧洲型PRRSVORF5蛋白的研究

目的构建多种欧洲型PRRSVGP5蛋白原核表达载体,并比较其在大肠埃希菌中的表达效率。方法参考GenBank发表的欧洲型PRRSVLV株（GenBank登录号：M96262）ORF5序列,通过序列分析,设计合成ORF5全基因序列扩增引物及信号肽缺失引物。构建原核表达质粒pET-28a—GP5、pET-28a—gGP5、pET-22b—GP5、pET-22b—gGP5、pET-32a—GP5、pET-32a—gGP5、pGEX-4T—GP5、pGEX-4T—gGP5,经IPTG诱导后采用SDS—PAGE电泳分析GP5蛋白在各个原核表达载体的表达情况。结果pET-28a—gGP5、pET-22b—gGP5、pET-32a—gGP5均没有高效的表达出缺失信号肽的GP5蛋白,缺少信号肽的GP5蛋白在pGEX-4T-1载体中高效表达,目的蛋白分子质量单位为42ku,与理论值相符。没有缺失信号肽的GP5蛋白在pET-28a—GP5、pET22b—GP5、pET-32a—GP5、pGEX-4T—GP5,均未得到高效表达。结论本实验构建的重组原核表达载体pGEX-4T—gGP5能在大肠埃希菌中高效表达欧洲型PRRSVGP5蛋白,为进一步分析该蛋白的抗原性奠定了基础。