钙通道在雌激素对大鼠血压调节中的作用及机制探讨

目的探索雌激素在大鼠血压调节中的作用，并探讨雌激素与钙通道的作用关系。方法27只大鼠分为A、B、C三组；分别做卵巢切除，卵巢切除合并雌激素注射，假手术处理；29d后，观察在Ca2＋通道阻断前后其血压变化。结果去卵巢大鼠血压永平低于雌激素替代疗法组及假手术组，给与L-钙通道阻断剂可引起血压下降并消除雌激素水平高低导致的血压显著性差异。结论雌激素水平下降诱发血压下降，而L-钙通道是雌激素体内血压调节作用可能的作用机制。     

基础医学导读作为通识课程的教学理念与教学实践

基础医学导读作为中山大学的通识课程,经过3年的教学实践,逐步形成了包括3个模块的课程体系:基础医学框架和健康维护知识学习、医学思辨能力培养以及公共卫生健康问题讨论。随着课程体系和教学方式的不断优化,从最初主要是推介医学科普知识到通识教育的理念愈来愈得以体现,初步表明将基础医学纳入高校通识教育是一种有益且有效的尝试。     

大鼠同种异体骨髓移植慢性移植物抗宿主疾病模型的建立

目的:探讨同种大鼠骨髓移植建立慢性移植物抗宿主疾病模型的可行性,旨在为骨髓间质干细胞对同种异体骨髓移植后移植物抗宿主疾病免疫调节作用的系列研究提供前提条件。方法:实验于2006-04/2006-09在中山大学基础医学院病理学与病理生理实验室完成。①选取清洁级6周龄雄性体Fischer344大鼠(RT1Al)作为供体,清洁级6周龄雌性Waster(RT1Au)大鼠作为受体。②受体大鼠移植前3d开始饮用含庆大霉素(320mg/L)和红霉素(250mg/L)的饮用水。移植当天采用60Coγ射线全身照射法进行预处理,照射剂量为8.0Gy,剂量率为0.7Gy/min。经预处理的受体鼠在照射后6h内,经尾静脉进行骨髓移植,并分组:骨髓移植组(n=10,每只大鼠移植0.8×108个骨髓细胞)、单纯照射组(n=10,预处理后通过尾静脉注射等量的磷酸缓冲液)。观察移植后大鼠的活动、饮食、二便、皮毛、体质量变化情况及靶器官皮肤、肝脏、肠的组织学病理改变。结果:①单纯照射组10只大鼠在预处理后的17d内全部死亡,死亡高峰集中在移植后11和12d左右。骨髓移植组有较高的存活率,除第12,16,18天死亡3只,其余均在60d的观察期内存活。②骨髓移植组大鼠未出现急剧消瘦和严重腹泻等急性移植物抗宿主疾病表现,移植受体体质量增加缓慢,移植后1月受体头背部可见明显脱毛现象,随着时间延长,范围逐渐扩大至腹部和肢体内侧。移植后2个月皮肤可见毛囊缺失和轻度单核细胞浸润,小肠固有层可有中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞浸润,肝脏的表现最为典型,80%以上的汇管区淋巴细胞浸润,胆管细胞坏死并伴有胆管壁纤维化。结论:①通过大鼠F344→Wistar的同种骨髓移植,可建立稳定的慢性移植物抗宿主疾病模型。②模型的病理变化可表现在皮肤、肠道和肝脏,其中肝脏的表现尤其典型,80%以上的汇管区和胆管淋巴细胞浸润,胆管细胞坏死并伴有胆管壁纤维化。     

骨髓间质干细胞抑制大鼠肝纤维化形成的可能性受体肝内干细胞存活时间、肝星状细胞活化程度及生存分析的7周观察

目的观察在体外培养条件下,具有强大的增殖和分化为肝细胞能力的骨髓间质干细胞输注治疗肝纤维化模型大鼠对其肝纤维化形成的影响及肝功能和生存分析,并对治疗组、空白对照组和病理对照组7周内的相关情况予以对照比较.方法实验于2003-08/2004-10在中山大学基础医学院病理学于病理生理实验室完成.①动物分组选用雄性6周龄Wistar大鼠5只为供体,供分离骨髓间质干细胞;雌性6周龄Wistar大鼠60只,其中50只被造成肝纤维化模型,在首次用二甲基亚硝胺处理后的第10天,将造模大鼠随机分为2组骨髓间质干细胞治疗组10只(为受体),于治疗39 d后结束实验,取材分析病理对照组40只.另10只作为空白对照组(仅静脉注射生理盐水).②肝纤维化模型制作在实验的当天,给予10g/L二甲基亚硝胺溶液(生理盐水配置)1 mL/kg,腹腔注射,每周连续3次,共6周.③骨髓间质干细胞治疗组每只大鼠输注3×106个骨髓间质干细胞;病理对照组使用等体积生理盐水代替骨髓间质干细胞.④动物的一般生活状态每天观察饮食、活动、二便、体质量、皮毛、呼吸情况等.⑤肝脏的组织细胞形态结构将肝组织以苏木精-伊红染色后观察.⑥肝星形细胞及其活化程度检测前者检测肝脏α-平滑肌肌动蛋白含量,用免疫组织化学染色法,后者以德国IBAS2.5图像分析软件半定量分析.⑦肝脏胶原分布的相对含量检测采用Masson三色染色法,从而反映肝纤维化程度.⑧肝脏羟脯氨酸含量测定采用氯胺T法.⑨血清总胆红素和谷丙转氨酶水平检测采用全自动生化分析仪.⑩血清层粘蛋白和透明质酸水平测定采用放射免疫法.11雄性大鼠骨髓间质干细胞在雌性大鼠肝内的Y染色体性别决定区基因的表达检测采用聚合酶链式反应.12统计学分析两组样本均数比较采用t检验;多组样本均数比较采用方差分析,两两比较采用q检验;生存分析采用K,plan-Meier法.结果雌性大鼠60只进入结果分析.①实验动物生存状况造模6周后,骨髓间质干细胞治疗组生存率为80%,而病理对照组生存率为10%,空白对照组生存率为100%,说明骨髓间质干细胞治疗可能通过阻止肝纤维化发展,从改而善大鼠的生存率.②肝脏组织学显示,骨髓间质干细胞治疗组的肝脏结构明显改善,炎症减轻、假小叶结构减少或消散.相反,病理对照组出现广泛的肝脏结构重塑,包括增厚的纤维间隔形成和明显的桥接坏死.半定量分析胶原染色,骨髓间质干细胞治疗组较病理对照组显著减低(8.12±1.98,15.71±2.13,t=6.11,P＜0.05).③肝脏星状细胞活化的标志α-平滑肌激动蛋白的阳性表达空白对照组仅见血管壁有少量α-平滑肌激动蛋白的阳性表达,而病理对照组和骨髓间质干细胞治疗组可见在纤维间隔、肝窦和汇管区内明显表达.半定量分析α-平滑肌激动蛋白的阳性染色,骨髓间质干细胞治疗组较病理对照组显著减低(11.06±2.03,18.50±3.87,t=4.47,P＜0.05).④Y染色体性别决定区基因的表达经雄性Wistar大鼠(供体)骨髓间质干细胞治疗39 d的雌性大鼠,肝脏DNA经聚合酶链式反应检测结果显示,Y染色体性别决定区基因的表达阳性,而空白对照组和病理对照组则无此阳性信号.说明骨髓间质干细胞移植后,能够在受体肝内存活5周以上.⑤反映肝脏纤维化程度的肝脏羟脯氨酸含量及血清层黏蛋白和透明质酸水平骨髓间质干细胞治疗组明显高于空白对照组(P＜0 05)但明显低于病理对照组(P＜0.05),说明骨髓间质干细胞治疗后能够减少肝脏胶原蛋白的含量,从而减少肝纤维化的形成,使肝纤维化得到控制.⑥反映肝功能的血清总胆红素、谷丙转氨酶水平骨髓间质干细胞治疗组明显低于病理对照组(P＜0.05),接近空白对照组.说明了骨髓间质干细胞治疗有助于改善肝功能状态.结论①二甲基亚硝胺能成功诱导大鼠肝纤维化模型的建立.②骨髓间质干细胞可改善肝纤维化大鼠的生存状况和肝功能.③骨髓间质干细胞能够减少肝脏胶原蛋白的产生,抑制肝纤维化形成.④肝纤维化发生发展过程中活化态的肝星状细胞数量减少可能是骨髓间质干细胞抑制肝纤维化形成的原因之一.⑤雌性大鼠肝脏内存在雄性供体Y染色体性别决定区基因的信号说明骨髓间质干细胞能够在受体肝内存活5周以上.     

人脐血有核细胞在缺氧缺血新生大鼠脑内的生存及其抗原表达

目的:观察人脐血有核细胞在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内生存和抗原表达。方法:实验于2002-09/2004-03在深圳宝安血站干细胞研究实验室内完成。①实验中采用羟乙基淀粉沉淀法分离脐血有个核细胞。②5窝F344新生1d龄大鼠共64只,同窝随机分为3组:正常组:不干预。模型组:结扎左颈动脉,吸入体积分数为0.08的低氧3h制成缺氧缺血性脑病模型。人脐血有核细胞组:造模后24h定位注射人脐血有核细胞(1.0～2.0)×106。③Morris水迷宫试验评估移植后第42天大鼠学习和记忆能力;第10周麻醉状态下处死实验鼠,制作病理切片,苏木精-伊红染色和间接免疫荧光检测人脐血有核细胞在脑内存活和分化情况。结果:64只大鼠,实验过程中死亡20只,正常组、模型组、脐血有核细胞组分别存活17,11,16只,进入结果分析。①缺氧缺血性脑病模型制作结果:模型组出现行为障碍,病理切片可见细胞变性坏死、胶质细胞吞噬、血管套、胶质细胞结节形成等典型缺氧缺血所致脑组织病理损伤。②第42天水迷宫试验显示:人脐血有核细胞组大鼠的空间识别和记忆能力明显尤于模型组(P<0.01),与正常对照组差异无显著性。③病理切片、苏木精-伊红染色和间接免疫实验结果显示:人脐血细胞组,进针部位存在大量移植细胞,成团或散在分布,呈方向性向周围迁移;左侧大脑血管壁,可见大量细胞迁移环绕;所植入的细胞中胶质纤维酸性蛋白表达率约为4.59%,神经元特异烯醇化酶阳性表达率约为2.68%。结论:人脐血有核细胞在缺氧缺血脑损伤新生大鼠脑内可以部分存活,表达胶质纤维酸性蛋白、神经元特异烯醇化酶抗原,并有效改善缺氧缺血性新生大鼠的功能缺陷。     

几种受体激动剂对IFN-γ诱导人单核细胞HLA-DR抗原表达的影响

用细胞体外培养的方法，探讨了几种受体激动剂对人外周血单核细胞ＨＬＡＤＲ抗原表达的影响。结果显示：①去甲肾上腺素（ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎｅ，ＮＡ）对ＩＦＮγ诱导ＨＬＡＤＲ抗原表达具有双向调节作用。１０－１２，１０－１０ｍｏｌ／ＬＮＡ具有促进作用；１０－６，１０－４ｍｏｌ／ＬＮＡ呈现抑制作用。相应α受体阻断剂１０－５ｍｏｌ／Ｌ酚妥拉明（ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ）可以完全阻断其促进作用，而对抑制作用的阻断则不明显。②１０－１０～１０－４ｍｏｌ／Ｌ异丙肾上腺素（ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ，ＩＳＯ）对ＩＦＮγ诱导ＨＬＡＤＲ抗原表达具有抑制作用，抑制程度随ＩＳＯ浓度的增加而加强，且这种作用可被１０－５ｍｏｌ／Ｌ普洛萘尔（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）完全或部分阻断。③毛果芸香碱（ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ）１０－１１～１０－３ｍｏｌ／Ｌ对ＩＦＮγ诱导ＨＬＡＤＲ抗原表达无明显影响。结果提示：神经递质对免疫细胞具有调节作用     

急性心肌梗塞患者外周血T淋巴细胞表达CD25及其对刺激剂反应能力的变化

目的：研究急性心肌梗塞患者外周血T淋巴细胞表达CD25及其对刺激剂反应能力的变化。方法：流式细胞仪技术。结果：急性心肌梗塞患者外周血淋巴细胞CD25 、CD4 和CD4 ／CD8 比值明显低于对照组,CD8 高于对照组;CD3 CD25 、CD4 CD25 和CD4 CD25 /CD8 CD25 显著降低。在培养前后,CD3 CD25 表达均显著降低;在PDB刺激情况下,CD3 CD25 、CD8 CD25 表达均显著降低。结论：急性心肌梗塞患者存在细胞免疫功能紊乱,并存在对刺激剂PDB的反应能力降低。     

乳腺浸润性导管癌钼靶X线钙化与c-erbB-2表达的关系

目的探讨乳腺浸润性导管癌钼靶X线钙化特征与人表皮生长因子相关基因（c-erbB-2）表达的关系。方法回顾64例经术后病理证实的乳腺浸润性导管癌的钼靶X线钙化特征及采用免疫组织化学方法测定肿瘤细胞c-erbB-2的表达情况,分析乳腺癌钙化灶与c-erbB-2表达的相关性。结果 64例患者中,X线表现有钙化的c-erbB-2阳性表达率为64.5%,高于无钙化组的24.2%,差异有统计学意义（χ^2=10.54,P〈0.05）。结论乳腺浸润性导管癌钼靶X线钙化与C-erbB-2的表达具有一定的相关性,可在一定程度上反映肿瘤组织的c-erbB-2的表达情况及表达水平。     

TLR4和IFN-γ共激活的间充质干细胞上清对巨噬细胞极化和炎症环境的影响

目的 探讨toll样受体4(TLR4)和干扰素-γ(IFN-γ)共激活的骨髓间充质干细胞(MSC)条件培养基对RAW264.7细胞的极化和炎症环境的影响.方法 收集脂多糖(LPS)和IFN-γ共处理MSC的条件培养基,观察其对M1、M2诱导条件下巨噬细胞系RAW264.7细胞极化影响.分别收集孵育24 h、48 h细胞...