仙台病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

目的: 建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法: 根据GenBank 公布的SeV序列,在其保守区域设计了多套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP 检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果。对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估并对92份样品进行了检测。结果: 该方法在63℃恒温下作用60min,SeV RNA获得了高效率的特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应;其敏感性高,最低检出量为2.1TCID50SeV,比RT-PCR方法高102倍。在反应结束后加入荧光检测试剂肉眼判断结果,与RealTime Turbidimeter LA-320 仪监测结果一致。通过对92份样品的RT-LAMP,RT-PCR和间接ELISA方法的检测比对,三者符合率为100%。 结论: 本研究建立的SV RT- LAMP 检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,具有良好的应用前景。     

上海地区实验动物病原体感染指数分析

目的 为了更直观的了解实验动物质量控制情况,本文引“感染指数”这一评估指标。探索测算感染指数的最佳方法,以便更加科学的反映实验动物的感染状况。方法 感染指数,也称感染度,它是对实验动物质量监测的定性指标。通过加工汇总实验动物的病原体感染率,综合反映某一特定实验动物群体的病原体感染状态或趋势的一种指标。结果 总体上,小鼠病原体感染指数呈逐年下降的趋势,而大鼠的病原体感染指数则逐年上升。分别比较各类病原体感染指数发现,小鼠中寄生虫感染指数最高,而大鼠中细菌感染指数最高。结论 感染指数分析揭示了实验动物质量的基本状况,需要加强对小鼠寄生虫的监测,而大鼠的细菌检测需要投入更多关注。小鼠病原体感染情况得到控制,大鼠各类病原体的控制情况均逐年趋于严重。     

典型发达国家实验动物人道终点的选择

实验动物作为生命科学研究的重要实验材料,在达到科学目标和目的后必然涉及人道终点的选择,典型发达国家实验动物的法律法规相对完善,人道终点的选择也有具体的章法,研究典型发达国家实验动物法律法规中人道终点的选择和做法,对我国实验动物福利立法有启示作用.     

新时期下农村计划生育服务与宣传方式的探讨

本文力求从微观管理和宏观政策上全面把握农村计划生育管理工作实况,从而找出农村计划生育管理方式的由强制性管理占主导地位到柔性管理占主导、强制性为辅助的转变脉络。在从有效性的角度来分析现在农村计划生育管理有哪些不足,进而提出若干对策、建议。     

鼠痘病毒感染机制及其检测方法研究进展

概述了鼠痘病毒(ECTV)入侵动物机体后感染传播的机制,包括小鼠的天然抗病机理、机体免疫应答以及病毒感染的致病机理等。同时总结了检测ECTV的试验动物法、病理学方法、血清学方法和核酸诊断方法等的优缺点。通过系统了解ECTV的感染途径和诊断方法 ,有助于防控ECTV的发生及传播。     

体外受精对小鼠早期生长发育的影响及性成熟期血清生化指标的分析

目的 研究体外受精技术对小鼠早期生长发育的影响,了解性成熟期小鼠的生理状况.方法 将体外受精的2-细胞胚胎植入假孕母鼠输卵管,待胚胎发育至 14 d胚龄,手术取出,称胚胎重; 另有部分母鼠自然产下仔鼠,称取仔鼠的出生重; 待其成长至性成熟期(6周龄),取血测其血清生化指标.结果 体外受精小鼠14 d胚胎重比对照组高16.5%(P<0.001); 仔鼠初生重比对照组高13.2%(P<0.001); 而性成熟期小鼠的血清生化值与对照组无明显差异.结论 体外受精影响小鼠早期胚胎发育,但不影响性成熟期小鼠的血清生化值.     

糖尿病小鼠胚胎早期发育的差异表达基因

目的利用小鼠糖尿病模型,探讨母体糖尿病环境对早期胚胎基因表达的影响。方法ICR雌性小鼠腹腔注射150mg／kg剂量STZ诱发糖尿病,与正常雄鼠交配受孕,取14d胎龄的胚胎,提取胚胎的总RNA。将Cy3和Cy52种荧光分别标记到实验组和对照组的RNA上,制成RNA探针,并与包含24859个基因的表达谱芯片进行杂交及扫描,重复3次实验,采用Agilent扫描仪进行扫描软件读取数据。结果筛选出差异表达基因397个,其中有328个基因在实验组表达量比对照组大2倍,69个基因在实验组表达量比对照组小2倍。结论母体糖尿病环境能影响早期胎儿的基因表达,通过上调代谢相关基因和下调发育相关基因影响小鼠胚胎的早期发育。为深入探讨糖尿病胚胎病理和代谢疾病的分子机理提供了基本数据和研究的方向。     

猴D型逆转录病毒p27基因的克隆表达及诊断价值评价

目的 克隆表达猴D型逆转录病毒(SRV) p27基因,评价其诊断价值.方法 PCR扩增p27基因片段,定向克隆至原核表达载体pET-28b(+),重组质粒转化大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后用ELISA方法评价其诊断价值.结果 重组质粒转化宿主菌后在37℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓-度为0.5 mmol/L的条件下诱导4h,可溶性p27蛋白表达量最大,且具有免疫学活性.纯化后测定融合蛋白浓度为2.043 g/L,纯度93.3％,以融合蛋白为诊断抗原包被ELISA板检测3份标准阳性血清和22份阴性血清,检出率为100％.结论 p27基因成功表达并具有良好的反应原性,可作为猴D型逆转录病毒血清学检测的候选抗原.     

诱发性糖尿病小鼠体外受精早期胚胎的差异基因分析

目的运用体外受精技术改变糖尿病小鼠胚胎的早期发育环境,研究母体糖尿病环境对早期胚胎基因表达的影响。方法选取6-8周龄ICR雌鼠2次腹腔注射小剂量STZ构建小鼠糖尿病模型,模型雌鼠超数排卵后通过体外受精的方法将培养至2一细胞的胚胎转移至正常假孕ICR雌鼠的输卵管内,取14d胎龄的胚胎提取总RNA。用Agilent 2100 Bioanalyzer系统对总RNA进行质检合格后,经过逆转录、标记、杂交、洗脱,芯片结果用Affymetrix Scanner 3000进行扫描,用Command Console Software3．1读取原始数据,实验重复3次。结果筛选出差异表达基因121个（P〈0．05）,其中有119个基因实验组的表达量是对照组的0．5倍以下,2个基因实验组的表达量是对照组的2倍以上。结论母体糖尿病环境能影响其卵子的生长发育,通过上调代谢相关基因和下调发育相关基因影响早期胚胎的生长发育。     

胰岛素对小鼠胚胎发育及其组织中IGF-1表达的影响

目的观察胰岛素对小鼠早期胚胎发育以及胚胎组织中IGF-1表达的影响。方法将ICR小鼠2-细胞胚胎在体外通过KSOM培养液培养36 h,并在培养液中添加0.25μg/ml胰岛素。将添加和没有添加胰岛素体外培养到囊胚的胚胎分别转入受体母鼠继续发育,等F1代小鼠出生后比较两组间的体重差异,并对出生F1代小鼠三种组织(肝、肌、脑)中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的mRNA表达量进行半定量RT-PCR检测。结果添加胰岛素培养的小鼠胚胎其囊胚发育率平均比对照组高9.7%(P<0.01)。而且实验组F1代小鼠出生体重平均较对照组高17.8%(P<0.01)。半定量检测发现F1代的出生小鼠肌肉中,IGF-1表达水平高于对照组。而肝脏和脑中表达没有差异。结论适量的胰岛素环境具有加快胚胎发育和刺激出生小鼠肌肉中IGF-1表达的作用。