CHIKV Real-time PCR检测方法的建立及试剂盒研发

目的建立快速特异检测基孔肯雅病毒的Real-time PCR方法及试剂盒。方法根据发表在Genbank上15株基孔肯雅病毒基因序列全长,应用ClustalW2.0和DNAMAN8软件筛选出位于其E1基因上的种内保守种间特异的目的片段,并据此设计出最优引物。人工合成该基因片段并构建重组质粒,对重组质粒梯度稀释后,再利用SYBR Green I Real-time PCR的方法检测该特异基因的浓度,建立标准品曲线,用于临床上基孔肯雅病毒的早期诊断。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,标准品的PCR扩增产物的电泳条带长度与目标条带一致,测序结果显示与目标条带序列一致,说明引物与阳性质粒性能良好。经优化确定CHIKV荧光定量PCR反应体系中最佳的引物浓度为350 nmol/L,最佳的反应条件为：50 ℃ 2 min;95 ℃预变性2 min;以95 ℃ 15 s,60 ℃ 15 s,72 ℃ 1 min进行40个循环扩增,在72 ℃进行荧光采集。根据荧光定量PCR熔解曲线出现特异性单峰,并对黄病毒属成员登革病毒和寨卡病毒的检测为阴性,表明该检测方法特异性高;检测阈值达302 拷贝 ,显示敏感性好,重复试验的变异系数均小于0.1%,说明该实验设计稳定性良好。结论基于该方法的试剂盒具有特异性好、灵敏度高、重复性好、能够快速定量等优点,有利于临床上基孔肯雅病毒的早期诊断,具有良好的应用前景。     

SARS-CoV-2原型株无症状感染对Omicron株BA.1、BA.2与BA.5的保护概率

  目的  评估SARS-CoV-2原型株无症状感染后对奥密克戎株(B.1.1.529,Omicron)BA.1、BA.2与BA.5感染、有症状感染和重症感染的保护概率。  方法  基于前期研究得到的无症状感染原型株者中和抗体动态曲线,利用logistic回归的预测模型估计无症状感染者在确诊后28 d、51 d和261 d对Omicron株BA.1、BA.2和BA.5感染所致的感染、有症状感染、重症三种结局的保护概率。  结果  SARS-CoV-2原型株无症状感染者在确诊后28 d,对Omicron株BA.1、BA.2和BA.5再感染的保护概率分别为30%(95% CI:16%~52%)、23%(95% CI:15%~36%)和8%(95% CI:4%~16%),到261 d分别降至9%(95% CI:3%~21%)、6%(95% CI:3%~12%)和2%(95% CI:1%~4%);确诊后28 d,对Omicron株BA.1、BA.2和BA.5有症状感染的保护概率分别为51%(95% CI:28%~80%)、42%(95% CI:26%~67%)和16%(95% CI:7%~40%),到261 d分别降至16%(95% CI:7%~35%)、12%(95% CI:7%~22%)和3%(95% CI:1%~8%);确诊后28 d对Omicron株BA.1、BA.2和BA.5感染所致的重症结局的保护概率分别为91%(95% CI:72%~98%)、88%(95% CI:70%~97%)和66%(95% CI:35%~90%),到261 d分别降至60%(95% CI:35%~86%)、51%(95% CI:32%~75%)和22%(95% CI:10%~50%)。  结论  SARS-CoV-2原型株无症状感染者体内的中和抗体对Omicron株BA.5的保护概率低于BA.1和BA.2,对重症结局的保护效果较好,有症状感染次之,对感染的保护效果较差。     

新型冠状病毒原型株有症状感染者中和抗体水平对奥密克戎亚型BA.1、BA.4和BA.5的保护概率预测

目的预测既往未接种疫苗的新型冠状病毒原型株有症状感染者再次感染奥密克戎变异株后发生不同临床结局的保护概率。方法数据来源于一项系统综述与荟萃分析。此项综述系统检索了PubMed、Embase、Web of Science和Europe PMC等数据库, 纳入自2020年1月1日至2022年10月2日期间发表或上传的新型冠状病毒原型株有症状感染者体内中和抗体动态变化的研究, 并提取文献学信息、研究设计、血清学实验信息和抗体结果。根据所提取的抗体滴度数据的散点分布特征, 使用基于高斯分布的广义加性模型, 对基于对数转换后的中和抗体滴度值进行拟合, 得到新型冠状病毒原型株有症状感染者体内中和抗体随时间动态变化的数据。本研究选取了该综述结果中第28、51、261天自然感染者的抗体滴度用于预测分析。结果既往未接种疫苗的新型冠状病毒原型株有症状感染者体内产生的中和抗体可对其再次感染奥密克戎变异株提供一定的保护, 保护概率随时间逐渐减弱。患者在出现症状后第28天的中和抗体水平能提供针对再次感染奥密克戎变异株BA.5的保护概率为30.3%(95%CI:20.0%～45.5%), 针对有症状感染的保护概率...     

磁共振血管成像导航精准搭桥在烟雾病手术中的应用

目的 探讨时间飞跃法磁共振血管成像（time of flight magnetic resonance angiography,TOF-MRA在烟雾病精准搭桥手术中的应用价值。方法 回顾性分析2020年5月1日-8月30日南京大学医学院附属鼓楼医院的烟雾病患者资料。根据术中是否使用导航技术，将患者分为导航组和对照组。所有患者术前完善TOFMRA评估，均完成手术治疗，术后1周复查TOF-MRA，评估术后吻合口通畅情况。比较2组患者的术中及术后情况。结果 最终纳入48例烟雾病患者。22例使用术中导航的患者纳入导航组，26例同期烟雾病患者未使用术中导航，纳入对照组。2组患者性别、年龄、术前铃木分期、累及后循环比例、出血型比例、合并高血压的比例、合并糖尿病的比例差异无统计学意义（P>0.05）。导航组的手术时长[（3.3±0.4）vs.(3.6±0.6)h]和术后住院时长[（7.3±1.9）vs.(8.8±2.7)d]比对照组短（P<0.05）。2组患者完成搭桥手术比例、脑膜中动脉保留比例、术后通畅率、术后一过性功能障碍比例、严重并发症比例差异无统计学意义（P>0.05）。结...     

新冠病毒mRNA疫苗第二剂次加强免疫对奥密克戎变异株BA.1、BA.2、BA.5和BQ.1.1的保护效力预测

目的 预测新冠病毒mRNA疫苗第二剂次加强免疫对奥密克戎变异株不同临床终点的保护效力。方法 通过系统文献检索，收集新冠病毒mRNA疫苗第二剂次加强免疫诱导的中和抗体水平。运用统计模型预测第二剂次加强免疫对奥密克戎变异株BA.1、BA.2、BA.5和BQ.1.1引起的感染、有症状感染和重症的保护效力。结果 接种四剂次辉瑞疫苗(简称BNT162b2)后1、2周和90 d时预防BA.5和BQ.1.1感染的保护效力均低于50.0%,预防有症状感染的保护效力为54.2%～72.4%,预防重症的保护效力高于90.0%。接种三剂次BNT162b2和一剂次辉瑞基于原型株和BA.4/5研发的二价疫苗(简称二价BNT162b2)1个月时针对BA.5和BQ.1.1有症状感染的保护效力分别为97.6%(95%CI:95.0%～98.8%)和90.8%(95%CI:83.9%～95.0%),针对重症的保护效力分别为99.5%(95%CI:99.0%～99.8%)和98.1%(95%CI:96.5%～99.0%)。结论 四剂次单价mRNA疫苗、三剂次BNT162b2和一剂次二价BNT162b2均可以有效降低感染B...