D-半乳糖对大鼠骨髓间充质干细胞衰老的影响

目的：观察D-半乳糖(D-galactose,D-gal）对骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）衰老的影响,构建体外MSCs衰老诱导模型。 方法：分离SD 大鼠（7日龄）MSCs,传代培养至第3代后,细胞随机分为4组：分别为正常对照组,1 g/L,10 g/L和50 g/L D-gal衰老诱导组。对照组在正常的DMEM 培养液中继续培养;诱导组MSCs分别在含1 g/L、10 g/L、50 g/L D-gal的DMEM 培养液中培养48 h。各组细胞培养结束后,衰老相关β-半乳糖苷酶染色法观察细胞衰老变化、Western blot法检测衰老相关蛋白p53、p21和p16表达,AO/EB双染法检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖,超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛(MDA)含量检测细胞内氧化应激水平。 结果：10 g/L和50 g/L D-gal 诱导组衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数较对照组显著升高（P<0.01）,衰老相关蛋白p53、p21和p16表达明显增高：AO/EB染色结果显示50 g/L D-gal 诱导组细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.01）;MTT检测结果表明10 g/L和50 g/L D-gal均能抑制MSCs增殖活性,而10 g/L和50 g/L D-gal 诱导组MSCs内SOD活力较对照组明显降低（P<0.01）,MDA含量显著升高(P<0.01)。 结论：10 g/L和50 g/L D-gal均可诱导MSCs发生衰老变化,并促使细胞内衰老相关蛋白p53、p21和p16表达增加,细胞存活能力减弱,增殖能力降低,这可能与D-gal促使MSCs内氧化应激水平升高有关。10 g/L是D-gal诱导MSCs衰老的合适浓度。