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目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSC)移植对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的影响.方法 采用淤胆型肝损伤大鼠模型和含5%淤胆血清的培养液筛选和扩增BDLSC,使用RT-PCR方法检测培养2周时肝干细胞标志表达.体外将携带人uPA基因的腺病毒(AduPA)转染BDLSC并移植入CCl4诱导的肝纤维化大鼠体内,观察大鼠肝功能、胶原面积及病理组织学的变化.结果 病理条件培养液培养2周的骨髓细胞形成肝细胞样集落,并表达胚胎期肝干细胞特征性蛋白.体内研究显示,与模型组和BDLSC组相比,BDLSC-uPA组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)及总胆红素(TBIL)水平均有不同程度的降低,凝血酶原时间(PT)时间缩短,白蛋白(ALB)水平升高,肝组织细胞外基质(ECM)水平及羟脯氨酸(Hyp)含量明显降低;肝组织结缔组织增生程度减轻,假小叶形成不明显,胶原面积明显减少.结论 uPA基因修饰BDLSC移植能有效抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,改善纤维化大鼠的肝功能,从而为转基因BDLSC移植治疗肝纤维化的临床应用提供理论依据和实践基础. 相似文献
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目的探索母代高脂饮食对子鼠早期肝脏病理改变的影响及其可能机制。方法 SD雌性大鼠随机分成高脂饮食组(HF组)和对照组,至交配怀孕产仔,哺乳期母鼠继续原饮食并喂养子鼠至其3周龄,取子鼠肝脏组织,观察肝脏病理变化,并检测肝脏内过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、长链脂酰辅酶A合成酶3(ACSL3)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1α(CPT-1α)及3-羟基酰基辅酶A脱氢酶(Ehhadh)的基因表达变化。结果 HF组母鼠所育的子鼠3周龄时肝细胞胞浆内可见弥漫性空泡变性,小叶内可见点灶状坏死;HF组子鼠肝脏组织PPARα和Ehhadh基因表达水平明显高于对照组,而ACSL3基因表达则显著低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);CPT-1α基因表达水平亦高于对照组子鼠,但两组间差异无统计学意义(P=0.19)。结论母鼠孕期持续至哺乳期的高脂饮食可引起子代早期肝内脂肪酸β氧化相关基因PPARα,CPT1α与Ehhadh表达代偿性增加,ACSL3表达降低,但尚不能逆转子代肝脏脂肪变性的发生。 相似文献
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肝星状细胞活化与细胞周期调控 总被引:1,自引:0,他引:1
肝星状细胞活化是肝纤维化形成的中心环节,目前尚未能完全阐明其复杂机制,近年研究发现该过程与细胞周期调控紊乱有密切关系。现对近年来HSC活化和肝纤维化时HSC细胞周期调控研究作一综述。 相似文献
4.
TIMP-2、MMP-2和MT1-MMP在活化肝星状细胞中的表达及对细胞外基质合成分泌的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)在活化肝星状细胞(HSCs)中的表达,观察其对细胞外基质(ECM)合成分泌的影响.方法 原代分离培养大鼠HSCs活化后,分别给予40~160 pmol化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA进行干预,检测培养细胞上清液透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和羟脯氨酸(Hyp)的含量,采用荧光实时定量PCR法检测TIMP-2、MMP-2、MT1-MMP、MMP-13、COL Ⅰ和COL Ⅲ mRNA的表达,western印迹检测TIMP-2、MT1-MMP和MMP-13蛋白表达及明胶酶谱法检测MMP-2蛋白表达.结果 应用化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA后,TIMP-2、MMP-2、MT1-MMP、COL Ⅰ和COL Ⅲ的表达明显降低,而MMP-13的表达则明显增加,培养细胞上清液中HA、PCⅢ和Hyp的含量也明显减少.结论 TIMP-2通过MT1-MMP介导MMP-2的活化,抑制TIMP-2的表达,MT1-MMP和MMP-2的表达随之降低,而HSCs合成分泌ECM也相应减少. 相似文献
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目的探讨细胞内基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因过表达对大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞功能的影响。方法采用基因重组技术将大鼠MMP-2cDNA插入真核表达载体pcDNA 3.1(+)构建大鼠MMP-2真核表达质粒,培养INS-1细胞。随机分为正常对照组,空质粒转染组及MMP-2质粒转染组。脂质体Lipofectmine 2000转染INS-1细胞,观察INS-1细胞内MMP-2基因和蛋白表达量变化,MMP-2酶活性变化,以及INS-1细胞凋亡情况与胰岛素分泌功能的变化。结果与正常对照组、空质粒转染组比较,MMP-2质粒转染组MMP-2mRNA表达增加(P均0.05),蛋白表达水平和酶活性上调(P均0.05);MMP-2质粒转染组细胞凋亡率(56.07±3.68)%高于正常对照组(33.70±6.53)%及空质粒转染组(38.02±5.60)%(P0.05),而IRI(1.30±0.27)低于正常对照组(3.37±0.76)与空质粒转染组(2.90±0.84)(P0.05)。结论细胞内MMP-2基因的过表达可引起胰岛β细胞凋亡增加,胰岛素分泌功能下降。 相似文献
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目的探讨上海宝钢职工非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的消退率及其影响因素。方法回顾性分析1999年和2001年上海宝钢职工健康体检资料,选择无过量饮酒、基线时丙氨酸转氨酶正常以及乙肝表面抗原阴性者作为研究对象。结果基线时440例NAFLD患者2年后影像学脂肪肝消退60例(13.6%,脂肪肝消退组),380例脂肪肝持续存在(脂肪肝未消退组),另有4867例两次体检都无脂肪肝的个体作为对照(无脂肪肝组)。女性年龄<50岁者脂肪肝消退率显著高于≥50岁者[33.3%(3/9)对4.3%(1/46),χ2=4.969,P<0.01]。脂肪肝的消退率随着基线时体重指数(BMI)的增高而下降,体重正常、超重、肥胖和重度肥胖患者NAFLD消退率分别为18.2%、16.5%、13.5%、7.8%。随访期间,BMI差值在脂肪肝消退组(-0.26±1.18)、脂肪肝未消退组(0.39±1.13)、无脂肪肝组(0.50±1.29)之间差异有统计学意义(F=11.41,P<0.01);血清甘油三酯(TG)差值在脂肪肝消退组[(-0.27±0.79)mmol/L]、脂肪肝未消退组[(0.24±1.88)mmol/L]、无脂肪肝组[(0.11±1.07)mmol/L]之间差异亦有统计学意义(F=5.58,P<0.01)。多元回归分析显示,基线BMI和血清TG水平以及随访期间BMI、TG变化幅度与NAFLD的消退密切相关。结论 NAFLD的消退率相对较低,基线BMI和血清TG水平及其动态变化是影响NAFLD消退的独立因素。 相似文献
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日的观察外源Smad7基因对L02肝细胞株增殖活性的影响。方法分别以重组腺病毒AdSmad7和对照病毒AdGFP在体外感染L02肝细胞,以RT—PCR和Western—blot检测外源Smad7基因表达情况,MTT法检测L02肝细胞增殖活性,流式细胞仪检测其细胞周期变化。结果AdSmad7体外感染L02肝细胞后,Smad7 mRNA和蛋白水平均显著上调。转化生长因子B(TGFB)可抑制L02细胞增殖,诱导其凋亡。导入外源Smad7可拮抗TGFβ的作用。结论利用AdSmad7导入外源Smad7基因可间接促进肝细胞增殖,抑制其凋亡。 相似文献
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目的在P.pastoris中分泌表达人卵泡抑素基因。方法采用PCR法扩增目的基因FS288片段,将其亚克隆人pPIC9,构建pPIC9-FS288,DNA序列测定验证后,将pPIC9-FS288采用BamH I和Sal I双酶切,回收小片段,连接pPIC9K,构建重组分泌型表达载体pPIC9K—FS288,电穿孔法转化SMDI168,G418筛选多拷贝转化子,转化子发酵后,取上清液进行SDS—PAGE和Western blot检测重组蛋白表达。结果成功构建了重组分泌型表达载体pPIC9K—FS288和工程菌株SMDI168一FS288,SDS—PGAE显示工程菌发酵上清液在50000~60000处有弥散条带,并且与Western blot结果相符。结论工程菌SMDI168-FS288能分泌表达重组人卵泡抑素。 相似文献