诱导性多潜能干细胞滋养层制备条件的实验研究

目的制备小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse Embryonic Fibroblasts,MEFs）滋养层,用于诱导性多潜能干细胞（Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs）的体外培养。方法取13.5～15.5天胎龄的胎鼠,采用组织消化法分离原代培养成纤维细胞,对MEFs的生长形态、生长曲线进行观察。采用10μg/ml丝裂霉素C预处理P2～P3代MEFs 2～3h制备出细胞滋养层,在该滋养层上进行iPSCs培养,观察iPSCs的集落生成情况,并行碱性磷酸酶细胞染色。结果 MEFs经丝裂霉素C预处理后细胞既不增殖,也不会死亡,仍保持分泌多种生长因子的能力。iPSCs在MEFs滋养层上生长良好,类似于胚胎干细胞一样能形成＂鸟巢＂状集落,并可维持iPSCs正常形态,抑制其分化而不影响活力,碱性磷酸酶染色阳性。结论利用诱导性多潜能干细胞滋养层方法制备的细胞滋养层,能有效支持iPSCs的生长,为进一步开展iPSCs的研究提供了理论依据和实验基础。     

脐带血干细胞:组织工程人工心脏研究种子细胞的新来源

背景:脐带血干细胞富含多种干/祖细胞,其各种干/祖细胞移植治疗和作为种子细胞在组织工程领域的研究成为当前的热点.目的:综述脐带血干细胞中存在的多种干/祖细胞的生物学特性及在心脏疾病的实验应用和脐带血干细胞在心脏疾病的实验应用.方法:应用计算机检索1999-01/2009-10中国数字图书馆、维普期刊数据库相关文章,检索词为"脐带血干细胞,造血干/祖细胞,间充质干细胞,内皮祖细胞,内皮细胞,心肌细胞,组织工程,种子细胞",并限定文章语言种类为中文.同时计算机检索1999-01/2009-10 PubMed 数据库相关文章,检索词为"umbilical cord blood stem cells,hematopoietic progenitor cells/hematopoietic stem cells,mesenchymal stem cells,endothelial progenitor cells,endothelial cells,myocardial cells,tissue engineering,seeded cells",并限定文章语言种类为English.同时手工检索<干细胞生物学>专著,共检索到文献95篇.根据纳入标准最终纳入文献30篇.结果与结论:脐带血干细胞是一种成体多能干细胞,富含造血干/祖细胞、间充质干细胞、内皮祖细胞、非限制性体干细胞等.相对于骨髓干细胞和外周血干细胞,脐带血干细胞来源丰富,获得更为容易,更为原始,分化增殖能力更强,排斥反应小,在体外可以分化为血管内皮细胞、心肌细胞等多种细胞.基于脐带血干细胞独特的生物特性、资源优势及在冠心病和缺血性心肌病的治疗上取得了一定的成果,为构建组织工程人工心脏的种子细胞来源提供可能,在心脏再生和组织工程人工心脏方面的应用展示了广阔的前景.     

慢性心力衰竭急性加重患者血清保护素D1的表达及其与预后的关系研究

目的：分析慢性心力衰竭急性加重患者血清保护素D1的表达情况,及其与患者预后的关系。方法：连续纳入我院2018年3月至2021年12月收治的476例慢性心力衰竭患者,并根据是否急性加重将患者分为非急性加重组（n=322）和急性加重组（n=154）。收集所有患者的临床资料,测量两组患者血清保护素D1的含量,并分析保护素D1的含量对慢性心力衰竭急性加重患者预后的评估作用。结果：与非急性加重组患者比较,急性加重组患者血清保护素D1的含量显著降低[（488.6±172.9） vs.(146.3±71.8)μg/L,P <0.05];保护素D1低表达组患者的年龄、NYHA分级、FBG、NT-proBNP、全因死亡和复合事件发生率,均显著高于保护素D1高表达组（P <0.05）,而LVEF明显低于保护素D1高表达组（P <0.05）;Kaplan-Meier分析显示,保护素D1低表达组患者全因死亡和复合终点事件的发生率明显高于保护素D1高表达组（P <0.05）;Cox回归分析显示,血清保护素D1含量、NYHA分级、NT-proBNP和LVEF是慢性心力衰竭急性加重患者发生复...     

酶联合消化法培养小鼠主动脉平滑肌原代细胞

目的建立一种适用于体外有效分离培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞的技术方法。方法分离主动脉,用优化的酶联合消化法获取主动脉平滑肌细胞,用形态学法、免疫细胞化学法鉴定。结果该方法所分离的主动脉平滑肌细胞生长旺盛,细胞活性好,7～9d后细胞总量可达到5×105个/瓶,细胞纯度可达85%以上,细胞呈长梭形、放射状、束状生长,平行排列呈峰谷状,免疫荧光显示胞浆内α-SMA蛋白表达阳性。结论该酶联合消化法可在体外短时间内获取数量可观、高纯度的主动脉平滑肌细胞。     

Slit2蛋白对TNF-α诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖迁移的影响

目的：观察Slit2蛋白对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖迁移的影响。方法采用川北医学院第二临床医学院实验室培养的大鼠VSMCs ,实验分两部分,第一部分：Slit2单独作用,分为正常对照组和实验组（Slit2蛋白浓度分别为：50、75、100、125、150 ng／mL）;第二部分：Slit2与TNF‐α共同作用,分为正常对照组、阳性对照组（含TNF‐α10 ng／mL）和实验组（TNF‐α10 ng／mL＋Slit250 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit275 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2100 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2125 ng／mL、TNF‐α10 ng／mL＋Slit2150 ng／mL）。分别采用CCK‐8及transwell小室法检测各组细胞的增殖及迁移能力。结果第一部分：实验组与对照组OD值及迁移细胞数目比较差异均无统计学意义（P＝0．516,P＝0．52）。第二部分：正常对照组与阳性对照组比较细胞迁移数目差异有统计学意义（P＝0．00）,实验组细胞迁移数较阳性对照组明显减少;CCK‐8结果显示实验组和阳性对照组与正常对照组OD值比较差异有统计学意义（P＜0．05）,而实验组与阳性对照组OD值比较差异无统计学意义（P＝0．173）。结论 Slit2对VSMCs增殖无影响,但能抑制TNF‐α诱导的VSMCs迁移。     

小鼠心肌微血管内皮细胞的体外培养

目的建立小鼠心肌微血管内皮细胞培养体系。方法 4～6周的清洁级C57小鼠的心室肌,利用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶消化过滤收集的滤液进行重新悬浮种植于明胶包被的培养瓶中,通过倒置电镜观察细胞的生长形态及生长状态,得出生长曲线,并利用免疫荧光鉴定(心肌微血管内皮细胞特异性抗原vWF)培养出的小鼠心肌微血管内皮细胞。结果通过形态学观察及免疫荧光鉴定证实为小鼠心肌微血管内皮细胞。培养的小鼠心肌微血管内皮细胞第1、2天生长相对缓慢,而到第3、4天细胞呈对数生长,第6、7天细胞达到融合。结论采用明胶包被培养瓶,通过机械剪切、蛋白酶消化、过滤方法,并进行了相关鉴定,可获得较纯的小鼠心肌微血管内皮细胞,这为研究心肌微血管内皮细胞的迁移、血管再生等提供了实验来源。     

甲泼尼龙联合利伐沙班治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并肺栓塞的临床疗效

目的 探讨甲泼尼龙联合利伐沙班治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）合并肺栓塞的疗效及对心肌缺血缺氧性损伤的影响。方法 回顾性分析南充市中心医院2014年2月～2018年2月收治的96例AECOPD合并肺栓塞患者的临床资料,根据治疗方式分为观察组（n=48）和对照组（n=48））。对照组在常规治疗基础上给予利伐沙班治疗,观察组在对照组基础上再联合甲泼尼龙治疗。比较两组治疗疗效、不良反应发生情况、治疗前后凝血功能、D-二聚体、肺功能、血气分析、cTnI及炎性指标水平的变化。〖HTH〗结果 观察组治疗总有效率高于对照组（P＜0.05）。治疗后,两组患者FEV-1、FVC、FEV-1/FVC水平及6min步行距离均高于治疗前,且观察组高于对照组（均P＜0.05）。治疗后,两组APTT、PT、FIB、TT、D 二聚体水平均低于治疗前,FIB水平高于治疗前（均P＜0.05）;观察组D-二聚体水平低于对照组（P＜0.05）。治疗后,两组患者血清PCT、CRP及IL-6水平均低于治疗前,且观察组低于对照组（均P＜0.05）。治疗后,两组患者血清PaCO2、cTnI水平低于治疗前,PaO2高于治疗前（均P＜0.05）,且观察组血清PaCO2、cTnI水平低于对照组,PaO2水平高于对照组（均P＜0.05）。两组患者不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 甲泼尼龙联合利伐沙班治疗AECOPD合并肺栓塞患者临床疗效显著,可有效提高患者肺功能,改善血液高凝状态、血气分析及心肌缺血缺氧性损伤,且无严重不良反应。     

小鼠主动脉平滑肌细胞Robo4膜蛋白的提取

目的优化小鼠主动脉平滑肌细胞膜蛋白提取方法，获得高纯度的Rob04膜蛋白。方法高速离心法选择性地分离提取总膜蛋白，BCA法测定总膜蛋白含量，Western—Blot检测目的蛋白条带。结果成功提取总膜蛋白，总膜蛋白浓度达1．47μg／μL，Western-Blot检测出Rob04膜蛋白条带。结论该提取方法简单、可靠、快速，获得的膜蛋白纯度高，可用于Western—Blot后续试验。