七厘散含药血清对乳鼠毛囊成纤维细胞增殖的影响

目的:七厘散是促进皮肤愈合的经典方药,本文旨在探讨七厘散含药血清对SD乳鼠触须部毛囊真皮成纤维细胞增殖的影响。方法:无菌条件下分离SD乳鼠触须部完整毛囊,植块法培养真皮细胞,并利用免疫荧光技术进行鉴定。SD大鼠行七厘散灌胃,分别于灌胃后3d、5d、7d行腹主动脉取血,制备含药血清,用不同体积百分比的含药血清检测其对毛囊真皮细胞增殖的影响。结果:分离培养的毛囊真皮细胞呈成纤维状,免疫荧光鉴定为成纤维细胞。3d和5d七厘散含药血清对毛囊真皮成纤维细胞的促增殖作用较7d组强。3d组中以体积百分比为5%的含药血清组促增殖作用最强。结论:3d组体积百分比5%的七厘散含药血清对SD乳鼠触须部毛囊真皮成纤维细胞有较强的促增殖作用,本实验为进一步探讨中药促毛囊真皮成纤维细胞增殖的分子机制提供实验基础。     

毛囊细胞高效分离培养方法的建立

【目的】建立一种简单易行、高效稳定、细胞活性好的毛囊细胞分离培养方法。【方法】无菌条件下剪下SD乳鼠触须部皮肤,拔出单个毛囊。采用Ⅰ型胶原酶、胰酶两步法消化毛囊,细胞悬液接种于细胞外基质包被的培养板中,以体积分数1%胎牛血清的K-SFM培养液培养,次日换无血清培养液。剩余组织块剪碎铺展于培养瓶中,添加含血清的HG-DMEM培养基常规培养。取以上2种细胞进行免疫荧光鉴定。毛囊上皮细胞进行流式细胞仪检测。【结果】两步酶法分离得到的毛囊上皮细胞贴壁迅速,圆形或多角形,呈典型铺路石状。培养的组织块周围有长梭形细胞爬出,细胞有突起,并连接成网状。毛囊上皮细胞CK15、CK19、β1整合素表达阳性,以G1期细胞为主,占75.6%。毛囊结缔组织鞘细胞的层粘连蛋白、纤维连接蛋白、波形蛋白表达阳性。【结论】分离培养的细胞为毛囊干细胞和成纤维细胞,该方法得到的细胞贴壁快、均一性好、增殖能力强。     

皮耐克组织工程皮肤修复皮肤创面的研究

【目的】探讨采用皮耐克真皮支架与大鼠表皮干细胞、成纤维细胞构建组织工程皮肤修复皮肤缺损的可行性。【方法】分离培养大鼠表皮干细胞、成纤维细胞并进行免疫荧光鉴定。成纤维细胞接种于皮耐克敷料构建类真皮,表面种植表皮干细胞构建组织工程皮肤。将BALB/c裸鼠复制背部皮肤缺损模型,随机分为3组,单纯支架组移植皮耐克敷料,成纤维细胞支架组移植皮耐克成纤维细胞复合物,组织工程皮肤组移植皮耐克组织工程皮肤。术后记录创面愈合情况,并分别取5、7d创面组织进行病理学检查。【结果】表皮干细胞角蛋白15(CK15)、β1整合素表达阳性,成纤维细胞层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)表达阳性。组织工程皮肤组愈合情况最好,移植物处成纤维细胞增生,新生毛细血管明显,表皮细胞分层排列规则。【结论】皮耐克组织工程皮肤促进裸鼠皮肤创面修复效果良好。