吡非尼酮通过抑制TGF-β1通路和炎症反应预防大鼠尿道损伤后的纤维化及狭窄

目的 探讨吡非尼酮对大鼠尿道损伤后狭窄形成的预防作用及可能机制。方法 选取SD雄性大鼠30只,随机分为3组（10只/组）：阴性对照组、阳性对照组及吡非尼酮组。吡非尼酮组：切开后尿道海绵体建立大鼠尿道损伤模型,按100 mg·kg-1·d-1腹腔注射吡非尼酮;模型组：同对照组构建大鼠尿道损伤模型,腹腔注射等量溶剂;假手术组：不予尿道损伤处理,但腹腔注射等量溶剂。术后2周逆行尿道造影观察尿道狭窄,留取尿道损伤组织,行HE染色观察尿道组织形态学变化,Masson染色检测胶原变化,免疫组化及Western blot检测a-SMA和TGF-β1的蛋白表达,qRT-PCR检测大鼠尿道组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达。结果 吡非尼酮组大鼠较阴性对照和阳性对照组体质量下降,逆行尿道造影显示阳性对照组大鼠尿道显著变窄,吡非尼酮组大鼠尿道较阳性对照组大鼠明显好转（P<0.05）。HE染色显示阳性对照组尿道上皮细胞增生,管腔狭窄,炎性细胞增多;吡非尼酮组病理学表现与阴性对照组相似。Masson染色显示吡非尼酮组较阳性对照组胶原纤维含量少,排列规则有序。免疫组化和Western blot结果表明阳性对照组尿道a-SMA和TGF-β1表达显著高于阴性对照组（P<0.05,P<0.01）,而吡非尼酮能够抑制TGF-β1和α-SMA的表达。qRT-PCR结果显示吡非尼酮能够抑制损伤组织中TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的基因表达（P<0.05,P<0.01）。结论 吡非尼酮可预防尿道损伤后纤维化及狭窄,并可能与抑制TGF-β1通路和炎症反应相关。     

雷帕霉素诱导自噬抑制大鼠尿道损伤后纤维化的作用机制研究

目的 探究雷帕霉素(Rapa)对大鼠尿道狭窄形成和成纤维细胞的影响及其作用机制。方法 构建大鼠尿道狭窄模型(SD雄性大鼠,体质量250～300 g),采用随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和Rapa组,每组10只。术后14 d取大鼠尿道组织,行HE染色观察尿道组织形态学变化,Masson染色检测胶原变化;免疫组化法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。将HLF-1细胞分为对照组,Rapa组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+Rapa组。应用transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞的周期和凋亡情况,Western blotting检测LC3的表达。结果 HE染色发现Rapa组大鼠尿道组织狭窄程度较阳性对照组明显减轻,Masson及免疫组化染色结果显示,阳性对照组和Rapa组大鼠损伤尿道组织中胶原和α-SMA表达均较阴性对照组大鼠增加,但Rapa组胶原和α-SMA表达显著低于阳性对照组。与对照组相比,Rapa组HLF-1细胞迁移、侵袭能力逐渐减弱,呈剂量依赖关系(均P<0.05),而加入3-MA干预后,Rapa对HLF-1迁移、侵袭和能力的抑制作用减弱(均P...     

吡非尼酮联合PD-L1抑制剂抑制小鼠异位膀胱肿瘤的生长

目的 通过小鼠肿瘤模型观察吡非尼酮（PFD）联合程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抑制剂对膀胱癌的疗效及对免疫微环境的调控作用。方法 构建C57BL/6小鼠异位膀胱肿瘤模型共40只,根据不同处理随机分为4组（10只/组）：对照组、PD-L1抑制剂组、PFD组、联合治疗组。对照组：建立肿瘤模型正常饮食;PD-L1抑制剂组：建模后腹腔每3 d按12.5 mg/kg注射PD-L1抑制剂;PFD组：建模后每天按500 mg/kg口服PFD;联合治疗组：建模后PFD及PD-L1抑制剂按上述剂量联合应用。对比各组小鼠生存率和肿瘤生长速度,药物干预21 d后留取肿瘤组织及小鼠血清,免疫组化检测肿瘤组织中CD3、CD8、CD45、E-cadherin及N-cadherin的表达;免疫荧光观察骨髓来源抑制细胞（MDSCs）表达;生化分析小鼠血液中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、血尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）及乳酸脱氢酶（LDH-L）的水平。结果 与对照组相比,PD-L1抑制剂组和PFD组小鼠肿瘤相对生长速率及21 d肿瘤体积均减小（P<0.05）,联合治疗组小鼠更加显著（P<...     

丰富环境康复训练对脑缺血大鼠认知功能及音猬因子信号通路的影响

目的 观察丰富环境康复训练（EET）对脑缺血大鼠认知功能及音猬因子（SHH）信号通路的影响。 方法 按照随机数字表法将60只成年雄性SD大鼠分为空白对照组、模型组、训练组,再按干预时间不同,细分为空白对照7 d组、空白对照14 d组、模型7 d组、模型14 d组、训练7 d组、训练14 d组,每组10只。模型7 d组及14 d组、训练7 d组及14 d组均采用传统线栓法制备大鼠脑缺血模型,训练7 d组及14 d组于造模后予以EET干预。干预7 d及14 d后,通过Morris水迷宫、跳台试验测试大鼠的认知水平,采用TUNEL染色法检测大鼠海马部位脑细胞凋亡水平,通过qRT-PCR、Western blot、免疫组化技术检测大鼠患侧海马部位SHH、Gli2、PTCH1 RNA蛋白表达水平。 结果 与训练7 d组和模型14 d组比较,训练14 d组大鼠Morris水迷宫测试的逃避潜伏期［(63.37±2.78)s］减短、平均游泳速度［(134.27±2.44)mm/s］增加、穿越平台次数［(6.70±0.95)次］增多、平台所在象限停留时间［(37.08±2.07)s］增加（P＜0.05）,在跳台试验中遭遇电击的次数［(3.80±0.63)次］少、平台滞留时间［(25.26±1.64)s］短（P＜0.05）。TUNEL染色结果显示,训练14 d组大鼠海马细胞凋亡百分比低（P＜0.05）。免疫组化结果显示,训练14 d组大鼠患侧海马SHH、Gli2蛋白表达量增加,PTCH1表达量降低（P＜0.05）。 结论 EET可以显著改善脑缺血大鼠的认知功能,其机制可能与SHH信号通路的激活增强有关。     

过表达ULK3介导GLi1对人膀胱癌细增殖、迁移、侵袭的影响及机制

目的探讨过表达Un51样激酶3(ULK3)介导胶质瘤相关癌基因同源基因1(Gli1)对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法培养人膀胱癌T24细胞分为对照组、ULK3过表达组(ULK3+组)、Gli1过表达组(Gli1+组)、ULK3和Gli1过表达组(ULK3+/Gli1+组)、ULK3过表达和Gli1敲低组(ULK3+/Gli1-组), 分别使用阴性对照试剂、过表达ULK3质粒、过表达Gli1质粒、shRNA敲低Gli1质粒对相应各组进行细胞转染。收集转染后的各组细胞, 采用细胞计数试剂盒(CCK)-8检测细胞的增殖能力, 划痕实验检测细胞运动能力, Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力, Western blotting检测LC3A/B、P62蛋白表达情况, 荧光蛋白标记技术检测自噬小体LC3B蛋白表达情况。结果 (1)对照组、ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gli1-组细胞培养0 h时OD值差异无统计学意义(P=1.000), 培养24、48、72 h时, ULK3+组、Gli1+组、ULK3+/Gli1+组、ULK3+/Gl...