胶原模拟多肽三螺旋结构的热变性过程

氨基酸重复序列是很多纤维状蛋白质特征,这些序列促进每种蛋白形成自己的拓扑结构[1].胶原蛋白Gly-X-Y肽段的重复出现使得胶原二级结构呈现特征性的聚脯氨酸Ⅱ型(P2)结构,P2结构进一步形成稳定的三螺旋结构,这是胶原蛋白区别于其他蛋白质的特征性结构[2].     

新型非病毒载体O-CHCS携带HBD2转染L929细胞及表达产物活性检测

目的研究O-胆甾醇基壳聚糖(O-CHCS)作为基因载体进行人β防御素-2(HBD2)基因转染小鼠纤维母细胞L929的可行性及检测目的基因表达产物的生物活性。方法构建重组质粒pCMV-hBD2,通过O-CHCS介导转染于L929细胞,提取转染细胞总RNA,用RT-PCR检测HBD2基因转录水平;收集转染细胞培养上清液,用Westernblotting检测HBD2基因蛋白的表达;用Kirby-Bauer纸片法检测HBD2抗菌活性,同时以Lipofect脂质体转染试剂作为阳性对照。结果经过O-CHCS介导转染的L929细胞,目的基因HBD2在转录水平和蛋白水平均有表达,转染细胞上清液对金黄色葡萄球菌有抑菌圈形成,结果同Lipofect的转染效果基本一致。结论成功构建了真核表达载体pCMV-hBD2,证实了O-CHCS可以作为基因载体用于目的基因HBD2的转染,且目的基因表达产物具有生物活性,为基因工程合成HBD2提供一条经济便捷的途径。     

胆甾醇基-普鲁兰多糖疏水改性材料的制备及其自组装性质的研究

目的：经琥珀酸间隔臂将胆甾醇连接到普鲁兰分子链上,对普鲁兰多糖进行疏水改性,获得不同取代度的胆甾醇基-普鲁兰 (cholesterol-modified pullulan,CHSP)改性材料,并研究CHSP材料在水中的自组装性质。方法：利用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（EDC）和4-二甲氨基吡啶（DMAP）催化琥珀酰胆甾醇（cholesterol succinate,CHS）与普鲁兰多糖反应,将琥珀酰胆甾醇接枝在普鲁兰分子链的羟基上,得到疏水改性的普鲁兰多糖衍生物。应用傅立叶红外光谱仪(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR),核磁共振仪(proton nuclear magnetic resonance,1H-NMR)对产物进行表征。利用透析法制备自组装纳米球。通过透射电镜(transmission electron microscopy,TEM),动态激光粒度分析仪(dynamic laser light scattering,DLS)表征了纳米粒的形态和粒径。以芘为荧光探针,通过荧光检测分析,测定CHSP的临界胶束浓度(critical micellar concentration,CMC)。结果：通过FT-IR,1H-NMR确证,合成了胆甾醇接枝普鲁兰多糖材料。制备材料在水溶液中能够自组装成纳米粒。结论：利用EDC和DMAP催化能够有效合成胆甾醇基-普鲁兰多糖改性材料,此制备方法简单且易于操作。改性材料在水中有效自组装成纳米粒,制备球形CHSP纳米粒有望成为疏水性药物载体。