新鲜分离的与预培养的成年肝细胞对胆红素代谢和细胞活性的差异比较

目的探讨新鲜分离的成年动物肝细胞(adult animal hepatocytes,AAH)与预培养24h的AAH对人体胆红素代谢活性的差异,为体外生物人工肝支持系统(extracorporeal bioartificial liver support system,EBLSS)寻求最佳的肝细胞材料应用方案。方法福建省龙岩市第二医院采用机械分离法获得3个月龄的雄性小白鼠肝细胞,设新鲜分离组与预培养组,两组培养液均用含20%胎牛血清、5U胰岛素/ml的高糖型DMEM培养基。新鲜分离组在获取肝细胞后即加入胆红素血清作共培养3h后离心取上清液送检,预培养组对肝细胞作预培养24h再加入胆红素血清继续共培养3h后离心取上清液送检;设不含肝细胞的胆红素血清作对照;用贝克曼全自动生化分析仪检测两组总胆红素、直接胆红素、间接胆红素的变化;以相同的方法作3次重复实验后分析评估。结果新鲜分离肝细胞组使总胆红素、间接胆红素分别下降33.91%、39.29%,而直接胆红素变化不大;预培养组使总胆红素、间接胆红素分别下降8.00%、5.40%。两组总胆红素变化的比较P<0.01(t=3.707),间接胆红素变化的比较P<0.01(t=4.734)。以上实验在完全相同的条件下重复3次,实验结果均显示新鲜分离的AAH对胆红素的代谢活性优于预培养的AAH。结论新鲜分离的AAH对胆红素的代谢活性优于预培养的AAH,在EBLSS使用时以新鲜分离的AAH为佳。     

预诱导提高成年动物肝细胞胆红素代谢活性

目的 探讨经苯巴比妥钠(phenobarbital sodium,PBS)体内预诱导的成年动物肝细胞(adult animal hepatocytes,AAH)在体外时能否提高对胆红素的代谢活性,为体外生物人工肝支持系统(extracorporeal bioartificial liver support system,EBLSS)寻求更佳的生物材料.方法 12只成年雄性小白鼠平均体重34g,随机分为预诱导组与对照组各6只,预诱导组每日1次腹腔内注射PBS 45mg/kg,共5次,对照组注射NS,末次给药的24h后取肝脏;从同组的每只实验鼠中各取湿重肝0.5g混合,合并研制为混悬液加入96孔培养板每孔30μl,各孔再加入黄疸血清50μl,最后加培养液20μl,使各孔终体积为100μl,每组设6孔,共两组12孔;同时设无肝细胞的黄疸血清孔做两组的对照,共同在37℃、95%湿度、5%CO2培养箱中静置培养3h后离心,取上清用贝克曼生化分析仪检测两组的胆红素变化.结果 与对照血清比较,预诱导组总胆红素、间接胆红素各下降60%、71.42%,直接胆红素无显著变化;对照组总胆红素、间接胆红素各下降34.78%、54.87%,直接胆红素亦无显著变化;两组总胆红素变化比较P＜0.05(t=2.899),间接胆红素变化比较P＞0.05(t=1.571).结论 体内PBS预诱导可增强AAH在体外对胆红素的代谢活性,预诱导的AAH可能是EBLSS更佳的生物材料.     

肝细胞冻存复苏成活率及胆红素代谢活性的实验评价

目的评价成年异种动物肝细胞液氮冻存复苏后对人重型肝炎胆红素的代谢活性,探讨生物人工肝支持系统（EBLSS）使用冻存复苏异种肝细胞的实际价值.方法采用H-E染色镜检肝细胞形态、锥虫兰染色计数肝细胞成活率、细胞培养检测胆红素代谢活性,实验观察液氮中冻存3个月复苏后的成年小白鼠肝细胞形态、存活率和对重型肝炎胆红素代谢活性,并设刚分离的肝细胞作对照组.结果冻存复苏后肝细胞胞质严重丢失,成活率约为30%,重型肝炎的总胆红素、直接胆红素、间接胆红素分别下降8.63%、8.98%、8.06%;新鲜分离肝细胞形态完整,成活率为90%以上,使重型肝炎总胆红素、间接胆红素、直接胆红素分别下降14.09%、12.95%、20.82%（t=8.932,P＜0.01）.结论冻存复苏的异种肝细胞胞质丢失严重,细胞成活率很低,对胆红素代谢活性很弱,不是EBLSS理想的生物材料.     

滋肾益肝方联合多烯磷脂酰胆碱治疗抗结核药物所致急性肝损伤的有效性与安全性研究

目的:探讨滋肾益肝方联合多烯磷脂酰胆碱治疗抗结核药物所致急性肝损伤的有效性与安全性。方法:经抗结核药物致急性肝损伤患者92例,按随机数字表法分组,对照组46例予以多烯磷酯酰胆碱治疗,研究组46例予以滋肾益肝方联合多烯磷脂酰胆碱治疗,对比两组间临床症状和血清学指标,同时记录不良反应状况。结果:与治疗前比,两组治疗后中医症状积分降低,治疗后SOD、GSH水平升高,MDA水平降低,治疗后ALT、AST、TBIL、GGT和ALP水平降低,治疗后前白蛋白及IL~(-1)6、IL~(-1)9水平降低,具有统计学差异(P0.05);与对照组比较,研究组治疗后中医症状积分较低,治疗后SOD、GSH水平较高,MDA水平较低,治疗后ALT、AST、TBIL、GGT和ALP水平较低,治疗后前白蛋白、总蛋白较高,IL~(-1)6、IL~(-1)9水平较低,具有统计学差异(P0.05);两组均无病例脱落现象,仅见轻微不良反应,两组间不良率对比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:滋肾益肝方联合多烯磷脂酰胆碱治疗抗结核药物致急性肝损伤疗效确切,不良反应低,值得推广。     

中西医结合治疗重型肝炎72例

重型肝炎 (以下简称重肝 )病势凶险 ,并发症多 ,死亡率高。我们多年来强调中西医结合综合救治 ,并采取在辨证施治基础上重用大黄治疗重肝 ,其相关并发症明显减少 ,从而使患者的存活率得到明显的提高 ,现将我们近 5 a来较为完整的病例资料 72例整理报告如下。1　临床资料 :治疗组 72例 ,均为我科 1998年 1月～ 2 0 0 2年12月的住院病人 ,其中男 6 3例 ,女 7例 ;年龄最小 2 1岁 ,最大 6 1岁 ,平均 4 2 .5岁。排除合并恶性肿瘤的病例 ,全部病例乙肝血清标志物均阳性。临床诊断符合 1995年北京全国病毒性肝炎防治方案的诊断标准 ,其中急性重型肝…     

苯巴比妥钠诱导小鼠后血清与原代肝细胞培养物的生物学分析

目的 探讨经苯巴比妥钠(phenobarbital sodium,PBS)体内预诱导的成年动物肝细胞的生物学特征,研究效应肝细胞在生物人工肝(bioartificial liver,BL)与其他临床应用的潜在价值.方法 12只成年雄性小白鼠随机分为预诱导组与对照组.预诱导组每日1次腹腔内注射PBS 45mg/kg,共7次;对照组注射NS.预诱导结束后两组小鼠做如下分析:检测血清总蛋白(TP)、尿功能素氮(BUN)、胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)合成量;分离肝细胞培养48h后取培养液做同上4项生化分析;培养24h的肝细胞做MTT检测细胞增生活性;染色体显示法观察细胞分裂状况,以及肝细胞培养的存活期限和一般形态学观察.结果 实验组血清TP与对照组有显著差异(t=2.678,P<0.5).两组肝细胞培养液中TP、BUN、CHOL、HDLC含量差异无统计学意义.MTT实验两组的培养增生活性无显著差异.培养的生存期限均不超过72h,细胞一般形态未见变化差异.结论 PBS预诱导可明显提高成年鼠血清TP含量和肝细胞的其他生物活性,有利于我们加深对PBS效应肝细胞在生物人工肝与其他临床应用潜能的探讨.     

冻存时间不同的成年动物肝细胞复苏后对重型肝炎胆红素代谢的效果比较

目的实验比较在液氮中冻存时间长短不同的成年动物肝细胞(adultanimalhepatocytes,AAH)复苏后对人体重型肝炎胆红素代谢的效果,探讨体外生物人工肝支持系统(extracorporealbioartificialliversupportsystem,EBLSS)使用冻存复苏AAH的实际意义。方法采用HE染色镜检肝细胞形态、台盼兰染色计数肝细胞成活率、肝细胞培养并贝克曼生化分析仪检测对重型肝炎胆红素的代谢效果。实验观察液氮中冻存1周、1个月、3个月复苏后的成年小白鼠肝细胞形态、存活率和对重型肝炎胆红素的代谢效果,同时设新鲜分离的肝细胞作对照组。结果冻存1周、1个月的肝细胞在光镜下形态无明显改变,冻存3个月的肝细胞胞质严重丢失;对照组、冻存1周、1个月、3个月的肝细胞成活率分别为91%、83%、76%、35%(与对照组比较,后三者分别P>0.05,P<0.01,P<0.01);四组肝细胞使重型肝炎总胆红素分别下降27.01%、23.02%、19.58%、2.33%,(与对照比较,后三者分别P<0.01,P<0.001,P<0.001)。结论EBLSS以使用新鲜分离的AAH为佳。     

成年小鼠肝组织中长期体外培养的探讨

目的探讨成年肝组织(AHT)体外中长期培养的各项活性指标,寻求以AHT替代成年肝细胞(AHC)培养的方法。方法以0.5mm3大小的肝组织贴壁于盖破片上,静置培养48h后改为旋转培养,每2天作半量换液1次,并取盖玻片作HE染色观察肝组织内细胞存活状况,第26天时结束培养观察;取培养第6天的肝组织设对照组、大黄素实验组、胆红素代谢组,分别行大黄素抗内毒素实验和胆红素代谢实验。结果在对照组,AHT染色鲜明、细胞存活良好;大黄素实验组呈现大黄素的抗内毒素作用而明显提高AHT的细胞活性;胆红素代谢实验组的总胆红素、直接胆红素、间接胆红素分别下降13.69%、19.85%、10.38%。结论AHT保持了体内三维立体结构,体外培养存活期可达26天,生物代谢活性良好,并有省时、操作简便、低成本的优点。     

成年动物肝细胞基本培养法筛选暨胆红素代谢实验

目的探讨成年动物肝细胞(adult animal hepatocytes,AAH)基本培养法和胆红素代谢、尿素氮生成的生物活性,寻找体外生物人工肝支持系统(extracorporeal bioartificial liver support system,EBLSS)更理想的生物材料。方法①三种基本成分:合成培养基、血清、胰岛素对成年小白鼠肝细胞作15种组合培养观察最长存活期;②用重肝高胆红素血清培养AAH,观察胆红素代谢、尿素氮生成活性。结果含20%同种异体雄性小白鼠灭活血清、10U/ml胰岛素的高糖型DMEM培养基作高密度培养时,第14天时仍有20%的存活率;AAH3h使总胆红素、直接胆红素、间接胆红素各下降28.88%、21.13%、33.63%。结论本模式可作为AAH的基本培养法;AAH可成为EBLSS更理想的生物材料。     

拉米呋定联合血浆置换治疗慢性乙型重型肝炎32例临床分析

目的 通过拉米呋定联合血浆置换治疗重型肝炎,观察其临床和实验室指标的变化,从代谢水平、分子水平为乙型重型肝炎的治疗探寻重要依据.方法 以一般护肝治疗为对照组,在此基础治疗的水平上联合应用拉米呋定与血浆置换为治疗组,比较两组的疗效.结果 治疗组的疗效优于对照组.结论 拉米呋定与血浆置换联合应用治疗慢性乙型重型肝炎是安全、有效的,可明显提高疗效.