miR-106b靶向调控胰岛素分泌细胞诱导分化过程中Ngn3基因的表达

目的实现骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells,bMSCs）向胰岛素分泌细胞（insulin—producingcells,IPCs）的诱导分化并验证分化过程中miR-106b靶向调控Ngn3基因表达。方法首先,分离培养bMSCs,应用活化素A（activinA）和B细胞素（betacellulin）将其诱导分化为IPCs。然后,采用靶基因预测软件miRanda和TargetScan对miR-106b和Ngn3基因的靶向匹配关系进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。qRT—PCR检测诱导分化过程中miR-106b和Ngn3的表达。结果诱导分化后的细胞双硫腙染色呈猩红色,免疫荧光化学显示有胰岛素表达。生物信息学方法预测发现miR-106b和Ngn3基因二者匹配良好,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现miR-106b能结合到Ngn3mRNA的3’UTR并有效抑制其表达。qRT—PCR检测结果表明,miR-106b的表达水平与Ngn3表达呈负相关。结论miR-106b能调控IPCs诱导分化过程中Ngn3的表达。     

miR-217靶向调控胰岛素分泌细胞诱导分化NeuroD1基因表达

目的：实现骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向胰岛素分泌细胞（insulin-producing cells,IPCs）的诱导分化并验证分化过程中miR-217靶向调控NeuroD1基因表达。方法分离培养BMSCs,应用大鼠胰腺损伤提取物（rat pancreatic extraction,RPE）将其诱导分化为IPCs。采用靶基因预测软件miRanda和TargetScan对miR-217和NeuroD1基因的靶向匹配关系进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。qRT-PCR检测诱导分化过程中miR-217和NeuroD1的表达。结果诱导分化后的细胞双硫腙染色呈猩红色,免疫荧光化学显示有胰岛素表达。生物信息学方法预测发现miR-217和NeuroD1基因二者匹配良好,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现miR-217能结合到NeuroD1 mRNA的3＇UTR并有效抑制其表达。qRT-PCR检测结果表明,miR-217的表达水平与NeuroD1表达呈负相关。结论 miR-217能调控IPCs诱导分化过程中NeuroD1的表达。