抑制消减杂交(SSH)技术及在克隆基因方面的最新进展

基因表达的变化是调控细胞生命活动的核心机制 ,分离并克隆差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点 ,亦是功能基因组学研究的重要内容之一。抑制消减杂交技术以其低假阳性率、高灵敏度等优点 ,被广泛应用于生物及医学领域中差异表达基因的克隆     

针刺对偏头痛大鼠脑内降钙素基因相关肽基因表达的影响

目的探讨偏头痛大鼠脑内降钙素基因相关肽(CGRP)的表达强度及针刺对CGRP基因表达的调控机制及针刺防治偏头痛的作用机制。方法参照Knyihar-Csillik方法复制大鼠偏头痛模型,将动物随机分成正常对照组、模型对照组、针刺预防组和针刺治疗组,每组10只,采用放射免疫分析法测定CGRP浓度;采用RT-PCR法测定CGRPmRNA表达。结果颈静脉血CGRP含量:正常大鼠保持低水平恒定量,模型对照组大鼠CGRP含量显著升高(P<0.01),针刺预防组及针刺治疗组与正常大鼠相近,但与模型对照组比较,显著降低(P<0.01);脑干及三叉神经节CGRPmRNA的表达变化:正常对照组表达在较低水平,模型对照组表达显著增强(P<0.01),针刺治疗组及针刺预防组与模型对照组比较,表达显著减弱(P<0.01)。结论实验性偏头痛大鼠脑内CGRP的过度表达,可能是偏头痛发作的分子机制之一;针刺调控CGRPmRNA表达可能是针刺防治偏头痛的机制之一。     

高质量植物基因组DNA的分离

为了从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量基因组DNA ,本文通过改良几种已经存在的分离方法 ,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。使用该方法从人参、西洋参及三七的新鲜或干燥根组织分离DNA时 ,A2 60 /A2 80 为 1.8左右 ,分子量大小约为 2 1.2kb ,由此所得的DNA可直接用于AFLP分析 ,即用EcoRⅠ /MseⅠ消化DNA后 ,用DNA的限制酶切片段经T4DNA连接酶连接 ,再用巢式PCR扩增 ,构建出可重复的、多态性丰富的人参、西洋参、三七基因组DNAAFLP指纹图谱。结果表明 ,该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量和高分子量DNA ,此法亦有望用于其它植物DNA的分离。