介绍一种新的血小板释放蛋白——血小板反应素

Thrombospondin—国内至今未有译名,在此暂译为血小板反应素。它主要存在于血小板中,参予凝血过程。目前国外还发现它参予了细胞间基质的构造。最近国外建立了放射免疫药箱以测这个蛋白的浓度。结果认为它能够反映血小板聚集和释放的状态。在此将这个蛋白的理化性质,生物学特性和临床方面的价值作一番介绍。     

无血清培养富集乳腺癌干细胞的初步研究

目的：探讨富集乳腺癌干细胞的方法,以获得稳定数量的肿瘤干细胞。方法：（1）采用无血清悬浮培养方法,从乳腺癌MDA-MB-435细胞中筛选和培养肿瘤干细胞。（2）采用相差显微镜观察含胰岛素和不含胰岛素的无血清培养基中干细胞球形成大小、数量及随时间生长变化情况。（3）采用荧光显微镜观察Hoechst33342染料对MDA-MB-435肿瘤干细胞染色情况。（4）将MDA-MB-435肿瘤干细胞转人有血清培养基培养诱导分化,观察是否能有分化现象。结果：（1）采用无血清悬浮培养方法筛选和培养MDA-MB-435肿瘤干细胞成功。（2）发现不含胰岛素的无血清培养基中,形成的肿瘤干细胞团数量多且体积大。（3）随着培养时间延长,肿瘤干细胞球数量逐渐增多,体积逐渐变大。（4）Hoechst33342染料对肿瘤干细胞染色鉴定,约有90％肿瘤干细胞蓝色荧光染料较弱,呈暗淡区。（5）MDA-MB-435肿瘤干细胞经含血清培养基再次培养,具有分化功能。结论：含生长因子的无血清培养基培养MDA-MB-435细胞,可生成肿瘤干细胞球;不含胰岛素的无血清培养基更适合作为筛选肿瘤干细胞的培养基。     

内皮抑素基因逆病毒载体的构建及其在白血病细胞中的表达

目的 探究内皮抑素基因转移在白血病抗血管新生治疗中的价值。方法 构建分泌型内皮抑素的表达载体,联合脂质体转染与交互感染建立逆病毒介导的内皮抑素基因转移系统,并用内皮抑素病毒分别感染白血病细胞WEHI-3B和K562;用聚合酶链反应(PCR)检测靶细胞中内皮抑素基因的整合与表达。结果 脂质体转染与交互感染策略分别获得单嗜型(GP+E-86/ES)和双嗜型(Am12/ES)病毒生产细胞,后者上清的病毒滴度约为7.8×105CFU/ml;内皮抑素病毒感染、G418选择得到内皮抑素基因修饰的WEHI-3B细胞和K562细胞,PCR分析显示两者均有内皮抑素基因整合并持续表达。结论 逆病毒载体有效介导白血病细胞表达内皮抑素,可用于血液肿瘤的血管抑制基因疗法研究。     

蛋白酶活化受体1在B16F10瘤细胞体内外迁移中的作用

目的:研究蛋白酶活化受体 1(PAR1)在肿瘤细胞转移过程中的作用,评估凝血系统与肿瘤转移的关系。方法:首先通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和 Western-blot 方法检测了 siRNA 对 B16F10 黑色素瘤细胞中 PAR1的内源表达的影响,然后在 PAR1 受 siRNA 干扰的情况下检测 B16F10细胞在体内外迁移能力,其结果与未受siRNA 干扰的试验结果相对照,来确定 PAR1 在 B16F10 瘤细胞体内外迁移中的作用。结果:75nmol/L 的 siRNA 干扰48h 后可明显抑制 B16F10中 PAR1 的表达,其转录水平抑制率是60%,蛋白水平的抑制率为85%;体外迁移实验表明,PAR1 表达量减少后与对照组相比细胞迁移能力减弱(P<0.01);动物实验表明.干扰 B16F10细胞中的 PAR1后,肿瘤细胞经血管迁移能力减弱,在肺部形成的转移瘤数目减少(P<0.01)。结论:PAR1 具有促进肿瘤细胞迁移作用。开发 PAR1 封闭剂有望抑制肿瘤转移,可作为研制抗肿瘤转移药物的新靶点。