人参皂苷Rg1对小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用和机制研究

目的：探讨人参皂苷（ginsenoside,Rg1）对高脂饮食诱导小鼠非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的改善作用及可能的机制。方法：将42只健康成年C57/BL雌性小鼠随机分为对照组、模型组、Rg1低剂量组、Rg1高剂量组、二甲双胍组,对照组和模型组每组各9只小鼠,其余小组每组各8只小鼠。对照组给予普通饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养,持续喂养16周。16周后,对照组和模型组给予0.9％生理盐水20 mL/（kg·d）灌胃,Rg1低剂量组给予人参皂苷Rg1 20 mg/（kg·d）灌胃,Rg1高剂量组给予人参皂苷Rg1 40 mg/（kg·d）灌胃,二甲双胍组给予二甲双胍150 mg/（kg·d）灌胃。持续治疗4周后采集各组小鼠血清和肝脏组织。观察各组肝组织病理学形态,测定血清转氨酶及血脂水平、肝组织匀浆中丙二醇（malondi－aldehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）的含量及内质网应激（endoplas－mic reticulum stress,ERS）与炎症小体相关蛋白的表达情况。结果：Rg1低、高剂量组血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotrans－ferase,ALT）分别为（41.87±10.64）、（43.46±13.84） U/L,天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）分别为（159.56±21.29）、（159.56±25.01）U/L,甘油三酯（triglyceride,TG）分别为（0.69±0.15）、（0.75±0.12）U/L,均明显低于模型组（P=0.001,P=0.010,P=0.000）,肝组织脂肪变性程度明显轻于模型组（P=0.000）。Rg1能降低FFA,MDA含量,提高SOD活力（均P=0.000）。Rg1能下调GRP78、CHOP、Caspase12、NLRP3、IL-1β蛋白的表达（P=0.000,P=0.003）。结论：Rg1可能通过提高抗氧化酶活性、抑制ERS相关分子及炎症小体活化来改善NAFLD。     

TSPAN8参与小鼠非酒精性脂肪性肝病的脂质代谢

目的 探讨四跨膜蛋白8（TSPAN8）在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发生发展中的变化及其在脂质代谢中的作用。方法 将30只C57BL/6J 雄性小鼠随机分为普通饲料组（ND,n=15）和高脂饲料组（HFD,n=15）。Western blot检测1、3、6月末各组小鼠肝脏组织中TSPAN8的表达水平。HepG2细胞分成6组：完全培养基培养,无其他处理的命名为对照组（CON）;游离脂肪酸（FFA）处理以构建NAFLD细胞模型的命名为FFA组;TSPAN8过表达细胞命名为PCDNA-TSPAN8组,其对照为PCDNA3.1 组;FFA处理后的PCDNA-TSPAN8命名为PCDNA-TSPAN8+FFA组,其对照为PCDNA3.1+FFA组;qRT-PCR及Western blot检测CON组和FFA组细胞中TSPAN8表达水平;油红O染色法和全自动生化仪检测PCDNA-TSPAN8+FFA和PCDNA3.1+FFA组细胞内脂质蓄积情况。qRT-PCR检测与脂质代谢相关基因mRNA的表达情况。结果 Western blot显示,与同喂养时间ND组相比,HFD喂养3、6月的小鼠肝组织中TSPAN8的表达下降（P<0.05）。qRT-PCR与Western blot显示,与CON组比较,TSPAN8在FFA组中的表达下降（P<0.01）。与PCDNA3.1+FFA组相比,PCDNA-TSPAN8+FFA组中细胞内甘油三酯（TG）水平下降（P<0.001）。qRT-PCR示,与PCDNA3.1组比较,脂肪酸转运蛋白 5（FATP5）在PCDNA-TSPAN8组中表达降低（P<0.01）,与CON组相比,FATP5在FFA组表达上调（P<0.001）。结论 TSPAN8参与NAFLD的脂质代谢,细胞过表达TSPAN8可能通过降低FATP5的表达来抑制细胞内脂质的沉积,可能具有潜在的临床价值。     

人参皂苷Rg1对非酒精性脂肪肝HepG2细胞脂质摄取和氧化的影响

目的:探讨人参皂苷Rg_1改善游离脂肪酸(FFA)诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)HepG2细胞脂质摄取和氧化的作用及机制。方法:将HepG2细胞分为空白组,模型组,人参皂苷Rg_1低、高剂量组(25,50μmol·L~(-1))。1 mmol·L~(-1)游离脂肪酸处理HepG2细胞24 h构建非酒精性脂肪肝细胞模型,25,50μmol·L~(-1)人参皂苷Rg_1处理24 h。细胞增殖及毒性检测-8(CCK-8)检测人参皂苷Rg_1对HepG2细胞活性的影响,微量法检测细胞内甘油三酯(TG)含量,油红O染色观察脂滴聚集情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测与脂质摄取和氧化相关基因与蛋白的表达情况。结果:与空白组比较,模型组细胞内TG含量及脂滴聚集吸光度显著增加(P0. 01);与模型组比较,人参皂苷Rg_1组细胞内TG含量及脂滴聚集吸光度显著降低(P0. 01)。Real-time PCR和Western blot结果均显示,与空白组比较,模型组过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),脂肪酸结合蛋白1(FABP1),脂肪酸转运蛋白2/5(FATP2/5)和脂肪酸转运酶(CD36)mRNA和蛋白的表达明显升高(P0. 05),过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα),肉毒碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)和酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)mRNA和蛋白的表达明显降低(P0. 05);与模型组比较,人参皂苷Rg_1组PPARγ,FABP1,FATP2,FATP5和CD36mRNA和蛋白的表达明显降低(P0. 05,P0. 01),PPARα,CPT1和ACOX1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。结论:人参皂苷Rg_1可通过降低脂质摄取和增强脂质氧化减少NAFLD细胞模型脂质蓄积。     

非酒精性脂肪性肝病患者的肝组织差异蛋白的定量分析:基于iTRAQ技术

目的 应用蛋白质组学在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）肝脏组织中筛选差异蛋白,寻找关键的作用靶点。方法 收集符合纳入标准的肝脏组织,通过 HE 染色病理切片筛选出非酒精性脂肪性肝炎样本（NASH组）3例和正常对照样本3例。提取NASH组及正常对照组的肝脏蛋白,使用iTRAQ试剂对多肽进行标记进行液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测,用蛋白质鉴定软件Mascot2.3.02比对UniProt蛋白数据库搜索鉴定,应用GO数据库对差异表达蛋白质进行注释和富集,应用KEGG数据库进行差异蛋白质涉及信号通路富集。实时荧光定量PCR（qPCR）检测显著差异表达蛋白对应的mRNA表达水平。结果 NASH组和对照组相比,以差异倍数（>1.2或<0.8）且P<0.05为阈值质谱分析鉴定到648个显著差异蛋白,其中表达量上调的蛋白有246种,下调的蛋白有402种。GO功能富集分析结果显示,差异表达蛋白主要参与小分子代谢、有机酸代谢、含氧酸代谢等生物学过程,在代谢途径、补体凝血级联、核糖体等KEGG通路上富集。荧光定量PCR对差异倍数（>2.0或<0.5）且P<0.05的25个显著差异表达蛋白进行筛选,共有6个蛋白与蛋白组学的结果趋势一致,包括5个下调蛋白：Jumonji 蛋白（JARID2）、莱伯西林样蛋白（LCA5L）、突触素1（SYN1）及胶原α-1（XIII）链（COL13A1）、FYVE,RhoGEF和PH结构域蛋白5（FGD5）,以及1个上调蛋白：谷胱甘肽S-转移酶Mu 4（GSTM4）。结论 iTRAQ技术和生物信息学方法在NASH肝脏组织筛选出差异表达蛋白648个,其中JARID2、SYN1、COL13A1、FGD5、GSTM4可能是NASH的关键靶向蛋白。