与脆性X智力低下基因同源的常染色体基因FXR1

作者利用FMR1的cDNA筛选了非洲蟾蜍laevis卵巢cDNA文库,所得到的两个克隆中,1个与人类的FMR1氨基酸有86％的同源,在其5′非转译区没有发现cGG重复,这提示cGG重复可能只在哺乳动物中出现。另1个克隆被称之为FXR1。非洲蟾蜍laevis FXR1 cDNA又被用来筛选人类Hela细胞文库得到了人类的FXR1 cDNA。顺序分析结果显示,FxR1与FMR1在KH区有86％的氨基酸顺序同源,在氨基末端区域有70％的同源,并都含有精氨酸富集区,但在羧基区域存在较大的差异,只有6％的     

人类染色体8q24.1带36个单拷贝的克隆与筛选

显微切割人类染色体8q24.1带DNA的初级PCR产物与pUC19质粒载体进行体外连接,转化大肠杆菌DH5a,获得了329个白色克隆。已分析的53个克隆中,有36个单拷贝,这些单拷贝片段长度介于105bp～960bp间,平均350bp,它们与正常人基因组DNA杂交显示各自特异性,可作为8q24.1带的特异性遗传标记。     

一个新的蛋白激酶基因DYRK3的克隆及其特征分析

目的分离一个与人的蛋白激酶ＤＹＲＫ２高度同源新的蛋白激酶的全长ｃＤＮＡ，并推测其分类和功能。方法应用与人的蛋白激酶ＤＹＲＫ２高度同源的３′端部分ｃＤＮＡ序列为探针，筛选ｃＤＮＡ文库和ｇＤＮＡ文库，并进行氨基酸序列同源性分析和ＦＩＳＨ定位。结果从人的骨骼肌ｃＤＮＡ文库和睾丸ｃＤ－ＮＡ文库各分离到一个新的蛋白激酶的全长ｃＤＮＡ。骨骼肌来源的ｃＤＮＡ编码５８８个氨基酸的蛋白质，睾丸来源的ｃＤＮＡ编码５６８个氨基酸的蛋白质，前者第２７个氨基酸以后的序列与后者第７个氨基酸以后的序列完全一致。结论推测这两个ｃＤＮＡ是同一基因在骨骼肌组织和睾丸组织中的不同剪接本。由于该基因与人的ＤＹＲＫ２高度同源，故称之为ＤＹＲＫ３基因。ＤＹＲＫ３与丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶酵母Ｙａｋ１，人和果蝇的Ｍｎｂ，人的Ｃｌｋ１等有较高的同源性，也与人的Ｃｄｋ２等其它丝氨酸／苏氨酸激酶有同源性。作者认为ＤＹＲＫ３是属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶ＣＭＧＣ组Ｃｌｋ家族新的一员。该基因定位在１ｑ３２。     

假定的抑瘤基因EXTI的克隆

遗传性多发性外生性骨疣(HME)是一种常染色体显性遗传病,由于在Langer-Giedion综合症中常见有多发性外生性骨疣,并且在该综合症病人中发现有8q24.1带的缺失,因此推论HME基因位于8q24.1,以后的连锁分析证明了这一点,并且发现该病具有遗传异质性,有一些家系与11p11-p12有关。作者报道利用具有18q24.1重排的HME病人和定位于该区带的YAC及cosmid,分离了覆盖8q24.1断裂点的cDNA,并在一些家系中发现了阅读框架     

基因突变分析技术综述

基因突变分析是确定某一未知基因与某遗传病之间关系的关键步骤，也是临床上对病人进行基因诊断的重要手段，本对１９种基因突变分析技术进行了分类综述，特别地近几年发展起来的几种新技术进行了详细介绍，并讨论了毛细管电泳在基因突变检测中的应用。     

利用FISH和高分辨R-显带技术定位人类cDNA探针

高分辨FISH技术已成为人类基因定位和临床遗传学中的重要手段,已经发展了一系列利用FISH对大小在1～1000kb的探针在R-显带的染色体上直接进行定位的技术。作者介绍了一种利用色霉素A_3和偏端霉素染色进行R-显带的方法,使得利用     

免疫负调控因子TIPE2在自身免疫性疾病发病过程中的作用及机制研究进展

自身免疫性疾病是由于机体免疫系统对自身组织和器官发生了免疫应答并造成组织损伤和功能障碍的一类疾病,约占全世界人口的5％～10％.多种器官特异性自身免疫性疾病主要是由T细胞介导的,此外,其它的免疫细胞,如B细胞、T调节细胞、树突状细胞和巨噬细胞等在自身免疫性疾病的发生过程中也起着非常重要的作用.肿瘤坏死因子α诱导蛋白8-2(TNFAIP8L2或TIPE2)是2008年发现的免疫负调控因子,主要在免疫细胞中表达,通过对固有免疫和适应性免疫进行负性调控,从而维持体内环境稳定,实现免疫耐受.最近的研究发现,TIPE2在自身免疫性疾病的发病过程中起着非常重要的作用.     

一步法直接克隆PCR产物

很多耐高温的DNA聚合酶,如Taq DNA聚合酶,因其具有非模板依赖性末端转移酶活性,因而常在PCR产物的3'末端加上一个多余的碱基,通常为3'-dA,从而使通过平端连接克隆PCR产物的效率很低。有几种方法可以解决这个问题。①在dNTP存在的情况下,用T_4DNA聚合酶除去3'末端突出的碱基。②利用具有3'-dT突出末端的载体进行克隆,这种载体有商品。③利用其它的DNA聚合酶,如pfu DNA聚合酶进行PCR得到具平头末端的PCR产物。在本文中,作者介绍了二种对Taq DNA聚合     

利用亲和捕获法筛选杂交体(SHAC):一种获得染色体特定区带富集的cDNA片段的方法

作者介绍了一种分离染色体特定区带cDNA片段的方法——利用亲和捕获法筛选杂交体(SHAC)。 在倒置显微镜下切割持定的染色体或染色体区带,然后用DOP-PCR进行两轮扩增,PCR产物用生物素标记后进行原位杂交检则其特异性;以特定组织的mRNA为模板构建cDNA文库,在cDNA的两端都加上一个连接体接头。生物素标记的PCR产物用Cot-1基因组DNA封闭重复顺序后与变性的cDNA文库在液相中杂交,杂交后用带有链霉亲和素的磁珠捕获带生物素的杂交体,然后用碱变性法释放所捕获的cDNA并进行PCR扩增。为了检测所     

一个邻接基因综合症的分子图谱:与Langer-Giedion综合症相关基因的定位

Langer-Giedion综合症有两种类型,即TRPS Ⅰ型和TRPS Ⅱ,在这两种类型中都有染色体8q24.1带的缺失、易位和倒位。本文对TRPS Ⅰ、TRPS Ⅱ和HME病人中8号染色体的缺失、易位和倒位从分子水平上进行了研究。