S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF7细胞生长的研究

目的探讨S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDC shRNA表达载体(pGPU6 SAMDC)转染乳腺癌MCF 7细胞,采用RT PCR和Western blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验（CCK 8法）和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7侵袭活性的影响。结果SAMDC shRNA表达载体转染后,MCF 7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8％,蛋白表达水平下降66.5％;MCF 7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。     

生物化学教学中建构主义理论的实施策略与反思

结合生物化学的教学现状和建构主义的理论特点,分析了将建构主义理论用于生物化学教学的必要性和可行性。在此基础上,对生物化学教学过程中建构主义理论的实施策略进行了系统阐述,指出通过教学内容的合理选择,多种教学方法的优化组合,不仅有助于实现以学生为中心的知识主动建构,也有利于学生综合素质的提高。最后对建构主义理论进行了辩证思考,指出在具体的教学实践中,需结合实际情况,将不同教学理论加以合理的综合利用,使其优势互补以提高生物化学教学质量。     

千金藤素诱导人肺腺癌LTEP-a-2细胞中miRNA表达变化的研究

目的:观察千金藤素对人肺腺癌LTEP-a-2细胞生长的影响,探讨细胞中相关微小RNA(miRNA)的表达变化,为明确千金藤素的抗肿瘤机制提供科学依据。方法:在0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L的千金藤素作用后,MTT法检测LTEP-a-2细胞的生长抑制率;光镜下观察千金藤素作用后LTEP-a-2细胞的形态学变化;流式细胞术分析不同浓度千金藤素对LTEP-a-2细胞凋亡的影响;提取细胞miRNA,real-time PCR检测不同浓度千金藤素作用之后细胞中的let-7c、miR-34a和miR-34b的表达情况。结果:MTT法检测结果表明,千金藤素能够抑制LTEP-a-2细胞活力,呈现剂量依赖性;倒置显微镜下可见,随着千金藤素浓度的升高,细胞固缩的程度逐渐加深;流式细胞术分析发现,不同浓度千金藤素均可导致的LTEP-a-2细胞凋亡率增加;real-time PCR结果表明,千金藤素可以使LTEP-a-2细胞中的let-7c、miR-34a和miR-34b表达升高。结论:千金藤素可以抑制LTEP-a-2细胞生长,诱导细胞凋亡;千金藤素升高细胞中let-7c、miR-34a和miR-34b表达,提示这些miRNA在LTEP-a-2细胞具有抑癌基因的功能。     

胃癌鸟氨酸脱羧酶基因表达及临床意义

目的从mRNA和蛋白质水平研究鸟氨酸脱羧酶在胃癌中的表达，探讨其在胃癌形成中的作用。方法采用半定量RT PCR技术检测胃癌及相应癌旁组织中ODC mRNA的表达量，采用Western blot在蛋白质水平检测胃癌及相应癌旁组织中ODC的表达量，并做统计学分析。结果21例胃癌组织中ODC在mRNA和蛋白质水平的表达量均高于癌旁组织（P<0.01）。ODC的表达量低分化胃癌组织显著高于高中分化（P<0.01）。结论ODC表达增强在胃癌发生发展中起重要作用，提示ODC可作为胃癌的基因诊断与治疗的靶点。     

顺铂对LTEP-a-2细胞中miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响

目的 探讨顺铂对LTEP-a-2细胞内miR-34b、Bcl-2、Smad3表达的影响,明确顺铂的抗癌机制.方法 体外培养LTEP-a-2细胞,实验组加入不同浓度顺铂,阴性对照组为不加顺铂的细胞;倒置显微镜观察各组细胞形态,台盼蓝染色法计算细胞存活率,MTT法测定顺铂对LTEP-a-2细胞的抑制率;实时定量PCR检测miR-34b;western blot方法分析细胞中Bcl-2及Smad3蛋白的表达变化.结果 随着顺铂作用剂量的增加,LTEP-a-2细胞凋亡增加,miR-34b在顺铂作用后的细胞中的表达呈上升趋势,Bcl-2及Smad3的表达显著下降.结论 顺铂可能通过上调miR-34b的表达,进一步抑制Bcl-2及Smad3的表达,导致LTEP-a-2细胞的凋亡.     

千金藤素通过调节miR-150和miR-182促进A549细胞凋亡

目的:探讨千金藤素对人肺癌A549细胞生长的影响及可能机制。方法:千金藤素处理A549细胞后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;real-time PCR检测微小RNA(miR)-150、miR-182、p53 mRNA和FOXO1 mRNA的表达变化;通过软件预测miR-150和miR-182的下游靶基因;采用Western blot法分析细胞中p53和FOXO1蛋白表达的变化。结果:在千金藤素作用下,A549细胞生长受到抑制,凋亡率明显增加;千金藤素作用后,细胞内miR-150和miR-182的表达水平显著下降;在10μmol/L的千金藤素作用后,细胞内p53和FOXO1的表达水平升高,而在30μmol/L时,细胞内p53和FOXO1的表达水平降低;在细胞内转染miR-150后,p53表达明显减少,而转染miR-182后,FOXO1表达显著降低。结论:千金藤素能够抑制A549细胞生长,促进A549细胞凋亡,可能是通过抑制miR-150和miR-182表达发挥作用;而miR-150和miR-182可能分别通过下调p53和FOXO1的表达发挥作用。