HBV感染人胎盘滋养层细胞机制的初步探讨

目的 采用透射电镜观察HBV体外感染人胎盘滋养层细胞的超微结构变化.方法 HBV体外感染人胎盘滋养层细胞.ELISA检测培养上清中HBsAg,PCR检测细胞培养上清和滋养层细胞中的HBV DNA.HBV荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBV DNA量(拷贝/ml).透射电镜观察滋养层细胞的超微结构.结果 感染组滋养层细胞培养上清中HBsAg在PBS清洗后12 h时A值为0.942,96 h时上升为1.264.PCR检测感染组细胞培养上清和感染组细胞HBV DNA均为阳性.PBS彻底清洗后0、12、36、60、84 h感染组细胞培养上清的HBV DNA分别为:＜103,3×104,6×105,5×105,3×105拷贝/ml.透射电镜观察到感染组滋养层细胞膜附近存在包涵素(Clathrin)形式的内吞小体形成,并且发现内吞小体内存在病毒颗粒样结构.在感染组细胞粗面内质网内发现HBsAg特异性的纤维丝状结构.结论 HBV可能经包涵素依赖的细胞内吞形式进入滋养层细胞,进而实现感染细胞或通过胞释作用将病毒排至细胞的对侧而实现穿越滋养层细胞屏障.     

产科并发症与精神分裂症的病例对照研究

目的 探讨产科并发症与精神分裂症的关系。方法 病例对照研究,单因素、多因素分析。并计算相对危险度和95%的可信限。结果 单因素分析显示,孕期并发症（OR=4.63,95%CI=1.27-20.66）、生产并发症（OR=3.29,95%CI=1.06-11.29)达到统计学意义。特别分层分析,男性生产并发症发生率明显高于对照组。多因素分析,孕期营养差、孕期并发症与精神分裂症有密切的关系,OR（95%CI）分别为3.98(1.13-14.07),4.93(1.44-16.86)。结论 精神分裂症的发生与孕期、生产期环境因素密切相关,孕期、生产期损伤者为精神分裂症的高危人群。     

E 系统和 HBV 母婴传播相关关系的 Meta 分析

目的 探讨Ｅ系统在ＨＢＶ绩婴传播中的作用。方法 运用Ｍｅｔａ分析技术对１８个ＨＢＶ母婴研究进行定量综合。结果 母亲Ｅ抗原阳笥具有高度危险性（ＯＲ＝２４．６７,９５％Ｃ不３．１７～４６．０６）,Ｅ抗体阳性则相对不显（ＯＲ＝１．２０,９５％ＣＩ,０．５５～２．５８）,对各研究结果作齐性检验,无显差异（Ｐ〉０．０５）。结论 Ｅ抗原阳性是ＨＢＶ母婴传播的危险因素。     

人胎盘组织和滋养层细胞膜联素V的检测

目的检测膜联素V(AnnexinV)在人胎盘组织的表达及其分布,探讨乙肝病毒(HepatitisBVirus,HBV)感染胎盘细胞的可能方式.方法收集血清学HBsAg阳性孕妇足月胎盘组织39例、血清学HBsAg阴性孕妇足月胎盘组织4例,将培养的滋养层细胞制成细胞爬片,用免疫组化方法检测胎盘组织和滋养层细胞中的Annexin V.随机选取7例胎盘组织采用免疫荧光标记方法结合激光共聚焦技术对Annexin V进行重测.结果Annexin V存在于人类胎盘组织中,位于滋养层细胞、间质细胞及绒毛毛细血管内皮细胞的胞浆中.结论胎盘中含有丰富的AnnexinV,推测其可能是乙肝病毒进入滋养层细胞并感染胎儿的潜在受体.     

人早孕绒毛组织的体外原代培养和人滋养细胞株的建立

目的:建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外原代培养的方法以及建立人滋养细胞株和初步评价。方法:采用胰酶和胶原酶I混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜、透射电镜和免疫荧光激光共聚焦方法对培养出的细胞进行形态和骨架评价。结果:显微镜下可见细胞呈多边形,细胞平铺生长,有细胞融合后形成的合体滋养层细胞;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富;胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的脂滴,以及细胞间紧密的桥粒样结构连接;直接免疫荧光双标记染色检测到角蛋白18和波形蛋白均为阳性。结论:采用胰酶和胶原酶I混合消化法可获得较纯的滋养细胞,通过光镜、透射电镜和免疫荧光激光共聚焦检测细胞外形和骨架,确定该体外传至56代的细胞株为滋养细胞株。     

职业卫生与职业医学开放性实验教学效果评价研究

目的 在预防医学专业本科学生中开展开放性实验,探索实验教学改革方法,提升学生的专业素养和科研能力。方法 针对预防医学专业大四学生,以职业卫生与职业医学实验课程为抓手,进行开放实验教学,然后用问卷调查评估实验效果。2016级预防医学专业学生147人为对照组,开展常规验证性实验;2017级预防医学专业学生176人为试验组,开展开放性实验。从综合考评成绩、教师自评、学生满意度调查3个方面进行评价。采用SPSS 22.0软件进行独立样本t检验、卡方检验。结果 试验组和对照组学生的职业卫生与职业医学期末考试理论成绩是[（84.37±10.45）分 vs. （81.44±9.22）分]（t=2.68,P=0.008）,实验技能成绩是[（93.66±3.89）分 vs. （88.41±5.67）分]（t=9.51,P<0.001）,两组相比,试验组高于对照组,差异有统计学意义。问卷调查显示,试验组学生对于学时安排（χ²=8.31,P=0.004）、小组协作（χ²=21.10,P<0.001）、考核形式（χ²=7.92,P=0.005）、提升科研论文撰写能力（χ²=17.56,P<0.001）、提高实践技能（χ²=11.70,P=0.001）、逻辑思维和语言组织表达能力（χ²=10.33,P=0.001）的满意度更高。学生认为开放实验有助于培养学生创新思维和能力,但是对于就业优势的培养作用有限。学生认为开设专业课的开放性实验具有充分必要性。结论 在预防医学专业学生中开展开放性实验对于学生提升专业素养、增强实践和科研能力是有益的。     

HBV全基因组克隆转染细胞系的建立

目的:建立HBV体外细胞培养体系. 方法:构建HBV全基因克隆质粒pcDNA3-3HBV,稳定转染HepG2细胞,G418筛选. ELISA检测细胞上清液HBsAg,HBeAg的表达,免疫组化检测细胞内HBcAg的表达,RT-PCR检测细胞S基因mRNA的表达,PCR检测细胞上清液DNA. 结果:成功构建了HBV全基因克隆质粒pcDNA3-3HBV,稳定转染HepG2后,培养上清HBsAg,HBeAg阳性,细胞内HBcAg呈核浆型分布,且以浆型分布为主. RT-PCR证实有HBV S基因 mRNA 的表达,上清中HBV S及前S基因阳性,荧光定量PCR检测显示培养上清中HBV 滴度达1×108拷贝/L. 结论:重组质粒pcDNA3-3HBV能在HepG2细胞中表达、转录、复制,该细胞培养体系能产生较高水平的HBV.     

Adr亚型HBV转染人胎盘滋养层细胞株的体外研究

目的通过转染adr亚型HBV-DNA,建立可复制HBV的人胎盘滋养层细胞(HPT-8)。方法采用脂质体介导的方法将重组真核表达质粒pcDNA3-3HBV转染人胎盘滋养层细胞,经G418筛选,通过ELISA、免疫组化、PCR等方法对转染细胞和培养上清分别进行检测。结果HPT-8细胞稳定转染质粒pcDNA3-3HBV后,第1、2代转染细胞的培养上清ELISA检测显示HBsAg、HBeAg阳性,免疫组化检测显示转染细胞胞浆中HBsAg、HBcAg呈阳性信号,PCR检测培养上清中HBV-DNA呈阳性,荧光定量PCR检测其滴度达9×106拷贝/L,并且转染滋养细胞中有HBV-rcDNA和HBV-cccDNA存在。结论重组质粒pcDNA3-3HBV能在人滋养层细胞中表达、转录、复制。     

孕早期胎盘HBV感染的危险因素分析

目的:观察孕早期HBsAg阳性孕妇流产胎盘组织(乙型肝炎病毒)HBV感染情况,分析可能的危险因素,为进一步探讨HBV宫内感染机制提供线索,并为预防措施的制订提供初步的理论依据。方法:采用巢式病例对照研究,对355例自愿流产孕妇中外周血HBsAg阳性者按统一的调查表进行调查,并对其流产胎盘进行免疫组化和HBVDNA原位杂交检测,运用SPSS10.0统计软件对资料和结果进行统计处理和分析。结果:孕妇HBsAg携带率为7%;早期发育的胎盘HBV感染率为32%;孕妇外周血HBVDNA的高浓度(OR=22.5,P=0.004)和HBeAg阳性(OR=12.5,P=0.008),是孕早期胎盘感染的主要危险因素。结论:HBV可感染早期发育的胎盘,感染率为32%;血HBVDNA的高浓度和HBeAg阳性的孕妇,其孕早期胎盘感染HBV的可能性较大。