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细胞色素P450 2D6(cytochrome P450 2D6,CYP2D6)是一种重要的氧化代谢酶,呈基因多态性,对药物的代谢呈现明显的个体差异和种族差异,CYP2D6*10在中国人群中的发生率高达51.3%。采用杆状病毒昆虫表达系统,采用与细胞色素氧化还原酶(cytochrome oxidoreductase,CYPOR)共表达的方式获得具有代谢活性的CYP2D6*1/CYP2D6*10,并初步研究其催化右美沙芬的代谢活性差异。构建重组质粒pFastBac-CYP2D6*1,pFastBac-CYP2D6*10和pFastBac-CYPOR,并分别转化DH10Bac菌株构建重组Bacmid-CYPOR,Bacmid-CYP2D6*1和Bacmid-CYP2D6*10,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒用于病毒扩增和感染Sf9昆虫细胞。通过测定混悬蛋白催化右美沙芬的速率来优化重组CYPOR和CYP2D6病毒感染Sf9昆虫细胞的感染复数(multiplicity of infection,MOI)值和其比例,获得活力较高的重组CYP2D6*1和CYP2D6*10。重组CYP2D6*1催化右美沙芬的Km为(... 相似文献
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泽兰化学成分的研究(Ⅰ) 总被引:11,自引:0,他引:11
目的:对泽兰(Lycopus lucidus Turcz.)地上部分化学成分进行研究、分离并鉴定.方法:采用现代层析分离技术进行化学成分的分离,运用光谱方法(1HNMR、13CNMR等)确定所分离化合物的结构.结果:从石油醚部位中分离得到7个化合物,分别为硬脂酸(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)、桦木酸(Ⅲ)、熊果酸(Ⅳ)、乙酰熊果酸(Ⅴ)、胆甾酸(Ⅵ)、齐墩果酸(Ⅶ).结论:除化合物Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ外,其余化合物均为首次从该植物中分得. 相似文献
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目的 获得单一有活性的人类UGT1A6重组酶 ,以进一步研究经该酶催化的底物谱及其在对底物作用的过程中与其他同工酶之间的相互作用。方法 利用细菌 /杆状病毒系统 ,将构建的pFsatBac UGT1A6重组质粒转化E .coliDH 10Bac大肠杆菌 ,通过转座作用获得重组粘粒Bacmid ,将其转染草地夜蛾细胞 (Sf9)后 ,产生重组杆状病毒。该病毒再感染Sf9细胞 ,即可获得人类UGT1A6重组酶。该酶的活性以 4 硝基酚为底物 ,用高效液相色谱法分析鉴定。结果 利用细菌 /杆状病毒系统 ,人类UGT1A6重组酶得到表达 ,且其对 4 硝基酚的Km 值为(0 .36± 0 .0 5 )mmol·L- 1,Vmax值为 (13.1± 1.0 )mmol·min- 1·g- 1蛋白。结论 利用细菌 /杆状病毒系统可获得对 4 硝基酚有代谢活性的人类UGT1A6重组酶 ,该酶可进一步用于其他底物的Ⅱ相代谢研究。 相似文献
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