胃癌组织中血管内皮抑素及微血管密度测定

中图分类号R735.2摘要目的:探讨胃癌组织中血管内皮抑素(Endostatin)的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法:采用免疫组化法检测65例胃癌、20例癌旁正常组织Endostatin蛋白的表达,应用抗CD34单抗标记血管内皮细胞,测定肿瘤间质微血管密度(MVD)。结果:胃癌组织Endostatin阳性表达率(61.54%,40/65)高于癌旁正常组织的20.00%(4/20)(P<0.01);Endostatin阳性表达组的MVD值(22.80±10.82)低于Endostatin阴性表达组(29.84±9.28,P<0.01);随着Endostatin表达程度加强,MVD值减少。Endostatin表达与胃癌浸润深度、TNM分期及淋巴结有无转移有关。结论:Endostatin在抑制胃癌血管生成中可能起一定作用。     

C肽对2型糖尿病视网膜病变的保护作用及机制

目的探讨C肽对2型糖尿病视网膜病变的保护作用及其机制。方法 66例2型糖尿病患者分为单纯胰岛素组和磺脲类降糖药组,记录年龄、性别、BMI、病程等一般项目并测定空腹血糖、血浆C肽浓度、糖化血红蛋白。用酶比色法测定红细胞膜ATP酶及血浆一氧化氮水平并进行比较,分析其与C肽等指标的相关性;分析C肽水平与2型糖尿病视网膜病变分期的关系。结果 (1)2型糖尿病单纯胰岛素组红细胞膜ATP酶活性和血浆一氧化氮水平较磺脲类降糖药组为低(P<0.05);(2)2型糖尿病患者红细胞膜ATP酶活性与血浆C肽水平和胰岛素水平呈正相关,红细胞膜ATP酶活性与病程和年龄呈负相关;(3)2型糖尿病视网膜病变的分期随血浆C肽浓度降低而逐渐升高。结论 C肽通过改善2型糖尿病患者红细胞膜ATP酶活性减轻2型糖尿病视网膜病变。     

C肽对2型糖尿病肾病的保护作用及其机制的研究

目的探讨c肽对2型糖尿病肾病的保护作用及其机制。方法将66例2型糖尿病患者分为单纯胰岛素组和磺脲类降糖药组,记录年龄、性别、体质量指数（BMI）、病程等一般项目并测定空腹血糖、血浆c肽浓度、糖化血红蛋白。用酶比色法测定红细胞膜ATP酶及血浆一氧化氮水平并进行比较,分析其与c肽等指标的相关性;分析c肽水平与2型糖尿病肾病分期的关系。结果①2型糖尿病单纯胰岛素组红细胞膜ATP酶活性和血浆一氧化氮水平较磺脲类降糖药组为低（P〈0．05）;②2型糖尿病患者红细胞膜ATP酶活性与血浆C肽水平和胰岛素水平呈正相关,红细胞膜ATP酶活性与病程和年龄呈负相关;⑧2型糖尿病肾病的分期随血浆c肽浓度降低而逐渐升高。结论c肽通过改善2型糖尿病肾病患者红细胞膜ATP酶活性减轻肾脏损害。     

谷氨酰胺抑制MIN6细胞AMPK活性并促进其胰岛素分泌

目的:观察谷氨酰胺对MIN6细胞胰岛素分泌和AMPK磷酸化水平的影响,以探讨谷氨酰胺影响胰岛素分泌的可能机理.方法:将MIN6细胞接种于24孔或6孔细胞培养板,实验前用含0.2%BSA和2.8mmol/L葡萄糖KRB预培养30min,分别换入含不同浓度葡萄糖和谷氨酰胺的KRB缓冲液,培养1h,收集上清,待测胰岛素;抽提蛋白,检测蛋白磷酸化水平.结果:葡萄糖在(2.8～22.5)mmol/L浓度下能剂量依赖性地降低AMPK蛋白磷酸化,抑制其活性,胰岛素分泌和AMPK活性呈负相关.10mmol/L谷氨酰胺孵育MIN6细胞1h可降低AMPK蛋白磷酸化,胰岛素分泌增加35%.结论:抑制AMPK活性可以促进胰岛素分泌,谷氨酰胺可能通过抑制AMPK活性促进胰岛素分泌.     

PKBα/Akt1基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的 研究蛋白激酶B α亚型(PKBα,也称Akt1)基因单核苷酸多态性(SNP)与上海地区汉族人群2型糖尿病易感性的关系.方法 利用等位基因特异PCR技术对460例2型糖尿病患者及444名正常对照者(NC组)Akt1基因3个标签SNP位点rs2494743、rs2494738和rs3001371进行基因分型.结果 位点rs2494738和rs3001371的基因型分布在糖尿病组和NC组之间呈现显著性差异(均P＜0.01);rs2494738和rs3001371等位基因频率在2型糖尿病组和NC组的分布也呈现显著性差异(均P＜0.01);rs2494738的多态性与2型糖尿病发生风险呈等位基因计量效应关系.但rs2494743基因型和等位基因分布在NC组与2型糖尿病组中差异无统计学意义.单倍型分析结果显示3个单倍型频率在2型糖尿病组和NC组之间也存在显著差异(均P＜0.01).结论 在上海地区的汉族人群中,Akt1基因可能是2型糖尿病的易感基因之一;其SNP位点rs2494738和rs3001371变异可能与2型糖尿病发病相关.     

高脂饮食诱导肥胖大鼠模型的实验研究

目的 建立营养性肥胖大鼠动物模型.方法 雄性SD大鼠50只随机分成高脂饮食组和普通饮食组,于喂养第12周时测大鼠体重、血脂、空腹胰岛素、葡萄糖耐量、胰岛素耐量,于第16周留尿测定微量白蛋白和肌酐,留取肾周和附睾脂肪称重,分离大鼠胰岛进行体外培养,测定胰岛及单个细胞直径.结果 与对照组相比,高脂组大鼠体重、肾周及附睾脂肪含量、血脂、空腹胰岛素水平以及尿白蛋白的排出均明显升高,存在糖耐量减低、胰岛素抵抗.高脂组大鼠中直径大于200μm的大胰岛比例增多,胰岛细胞数目增多.结论 建立的肥胖大鼠模型较接近成年人肥胖症的病理生理改变,可作为肥胖及相关疾病的研究平台.     

高糖对胰岛β细胞增殖活力、分泌功能及内质网应激相关分子表达的影响

目的 研究持续高糖刺激对胰岛β细胞株MIN6增殖活力、分泌功能及内质网应激相关分子表达的影响.方法 将不同浓度葡萄糖(5.6、25和33.3mmol/L组)分别加入胰岛β细胞株MIN6培养液中,于不同时间点(24h和96h)收集细胞进行相关检测.CCK-8法检测细胞增殖活力;ELISA法检测胰岛素和胰岛素原分泌能力;Real-time PCR和Western blotting分别检测内质网应激相关分子Total XBP-1、Spliced XBP-1 mRNA及磷酸化IRE1α蛋白的表达.结果 加入葡萄糖后96h,各组细胞增殖活力均显著低于孵育后24h;在同一时间点,33.3mmol/L组和25mmol/L组显著低于5.6 mmol/L组(均P<0.05).加入葡萄糖后96h,33.3mmol/L组胰岛素分泌较干预后24h明显减少,而胰岛素原分泌显著增加(均P<0.05).加入葡萄糖后24h和96 h的各组Spliced XBP-1 mRNA表达,以及加入葡萄糖后96h的各组Total XBP-1 mRNA和磷酸化 IRE1α蛋白表达,均随葡萄糖浓度的增加而上调(P<0.05),呈现浓度依赖性.结论 持续性高糖可使胰岛β细胞的增殖活力下降、分泌功能受损及内质网应激相关分子表达增加,而后者可能是导致葡萄糖毒性的原因之一.     

高糖对胰岛β细胞增殖活力、分泌功能及内质网应激相关分子表达的影响

目的 研究持续高糖刺激对胰岛β细胞株MIN6增殖活力、分泌功能及内质网应激相关分子表达的影响.方法 将不同浓度葡萄糖(5.6、25和33.3mmol/L组)分别加入胰岛β细胞株MIN6培养液中,于不同时间点(24h和96h)收集细胞进行相关检测.CCK-8法检测细胞增殖活力;ELISA法检测胰岛素和胰岛素原分泌能力;Real-time PCR和Western blotting分别检测内质网应激相关分子Total XBP-1、Spliced XBP-1 mRNA及磷酸化IRE1α蛋白的表达.结果 加入葡萄糖后96h,各组细胞增殖活力均显著低于孵育后24h;在同一时间点,33.3mmol/L组和25mmol/L组显著低于5.6 mmol/L组(均P<0.05).加入葡萄糖后96h,33.3mmol/L组胰岛素分泌较干预后24h明显减少,而胰岛素原分泌显著增加(均P<0.05).加入葡萄糖后24h和96 h的各组Spliced XBP-1 mRNA表达,以及加入葡萄糖后96h的各组Total XBP-1 mRNA和磷酸化 IRE1α蛋白表达,均随葡萄糖浓度的增加而上调(P<0.05),呈现浓度依赖性.结论 持续性高糖可使胰岛β细胞的增殖活力下降、分泌功能受损及内质网应激相关分子表达增加,而后者可能是导致葡萄糖毒性的原因之一.     

急性动脉粥样硬化性脑梗死患者血清中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白水平及临床意义的研究

目的探讨急性动脉粥样硬化性脑梗死（ACI）患者血清中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白（NGAL）水平及临床意义。方法收集56例临床诊断为ACI患者作为实验组（ACI组）,44例年龄、性别相匹配的健康体检者作为对照组,检测并比较其血清NGAL浓度及其他脑血管病危险因素。结果ACI组血清NGAL水平明显高于对照组（P〈0.001）,血清NGAL水平与体质量（r=0.25,P〈0.05）、空腹胰岛素（r=0.39,P〈0.05）以及胰岛素抵抗指数（IR）（r=0.36,P〈0.05）正相关,而与高密度脂蛋白胆固醇（r=-0.32,P=0.023）负相关（校正性别及体质量指数后）。多元回归分析提示,NGAL水平与高密度脂蛋白胆固醇和IR独立相关（R2=0.193）;Logistic回归分析提示,收缩压、IR和NGAL是ACI的独立影响因子。结论ACI患者血清NGAL水平显著升高,并且NGAL水平与ACI独立相关,检测血清NGAL水平有助于评估ACI风险。     

C肽及其类似物对1型糖尿病患者红细胞膜ATP酶的影响

目的：观察C肽及其类似物C肽K对1型与2型糖尿病患者红细胞膜ATP酶活性的影响.方法：酶比色法分别测定1型及2型糖尿病患者红细胞膜ATP酶水平,并分析与C肽等指标的相关性;体外环境下将胰岛素、C肽及C肽K与1型糖尿病患者红细胞孵育,观察红细胞膜ATP酶活性变化.结果：①1型糖尿病患者红细胞膜ATP酶水平较2型糖尿病低（P＜0.05）;②糖尿病患者红细胞酶活性与血浆C肽水平和胰岛素水平呈正相关,2型糖尿病患者红细胞酶活性还与病程和年龄呈负相关;③体外环境下生理浓度C肽可显著提高1型糖尿病患者红细胞活性,与胰岛素的联合使用较两者单独使用作用更显著;C肽K具有类似C肽的生物活性.结论：C肽可显著改善1型糖尿病患者红细胞膜ATP酶活性,与胰岛素的联合使用可使此作用显著增强;C肽K具有C肽类似活性.