牵张力作用下甲状旁腺激素相关蛋白对人成骨样细胞增殖的影响

目的研究牵张力作用下甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）对人成骨样细胞增殖的影响。方法建立体外培养细胞牵张力施力模型。利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测PTHrP mRNA的表达及12%牵张应变作用下PTHrP（1 nmol/L）对MG-63细胞c-fos mRNA表达的影响。检测不同浓度PTHrP（0、0.01、0.1、1 nmol/L）及12%牵张应变联合作用12 h后对细胞增殖活性的影响。结果不同牵张力对PTHrP mRNA表达影响的差异具有统计学意义,12%牵张应变组作用的影响最为显著。牵张力联合PTHrP刺激下培养较PTHrP或牵张力的单独效应具有更强的促MG-63增殖作用。牵张力联合PTHrP作用较牵张力的单独效应具有更强的增加MG-63细胞c-fos mRNA表达的作用。结论牵张力可显著影响人成骨样细胞PTHrP mRNA的表达水平。PTHrP在牵张力环境下较牵张力的单独效应具有更强的促MG-63增殖作用。在牵张力环境下PTHrP可能通过c-fos信号传导途径影响成骨细胞增殖。     

大鼠髁状突软骨细胞体外分离培养和压力模型的构建

目的培养大鼠髁状突软骨细胞(Mandibular Condylar Chondrocytes,MCCs),建立简便易行的髁状突软骨细胞持续静压力模型。方法SD大鼠处死后无菌条件下分离髁状突软骨,利用机械—酶二次消化法分离细胞并培养传代,鉴定细胞来源,观察细胞生长情况,绘制生长曲线;在压力模型给细胞加压后,检测培养细胞的形态、增殖等。结果成功获得MCC有限细胞系,给细胞加压48h有促进细胞增殖的作用,90kpa压力抑制细胞增殖。结论利用机械—酶二次消化法,可成功培养出原代SD大鼠MCCs,自制压力模型可作为加压装置对细胞实施加压干预。     

兔正畸牙移动过程中牙周组织血小板衍生生长因子-AA的表达

目的观察兔正畸牙移动过程中牙周组织血小板衍生生长因子AA（platelet—derived growth factorAA，PDGF—AA）的表达与分布，探讨血小板衍生生长因子-AA在正畸牙移动过程中的作用机制。方法选择35只体重为2．0-2．5kg的健康新西兰大耳白兔，随机分成7组，每组5只，分别为1、3、5、7、14和21d正畸加力组和正常对照组。2％戊巴比妥钠麻醉，兔下切牙常规粘网底颊面管，以镍钛推簧施力40g。采用免疫组织化学染色进行血小板衍生生长因子-AA半定量分析。结果血小板衍生生长因子-AA在正畸加力组牙周组织的表达明显强于正常对照组（P〈0．01），7d组为表达高峰期，14、21d组表达减弱。并且同一实验组，血小板衍生生长因子-AA在张力侧表达均高于压力侧（P〈0．01）。结论血小板衍生生长因子-AA在兔正畸牙移动过程中的表达明显口强，从而推测血小板衍生生长因子-AA可能参与了正畸骨改建过程的骨形成调节，并发挥着重要作用。     

人牙周膜细胞体外培养和机械压力模型构建

目的:培养人牙周膜细胞(hum an periodontal ligam ent cells,HPDLCs)获得HPDLCs有限细胞系,建立简单易行的HPDLCs持续静压力(continuously compressive pressure,CCP)模型。方法:组织块酶消化湿性贴壁法原代培养HPDLCs,传代并鉴定细胞来源、观察细胞生长情况,绘制4代细胞生长曲线。用圆形玻璃片给单层细胞接触加压,对细胞施加1 g/cm2、2 g/cm2、3 g/cm2、4 g/cm248 h,用MTT法检测加压对细胞的影响。结果:成功获得HP-DLCs有限细胞系,加压后当力值小于4 g/cm2时细胞无明显受损,力值增大到4 g/cm2时,细胞出现损伤。结论:组织块酶消化湿性贴壁法可以提高HPDLCs原代培养成功率,适宜力值的玻片直接接触加压模型可初步模拟压力对牙周膜细胞的生物学作用。     

甲状旁腺激素相关蛋白和机械力对成骨细胞增殖分化的影响

甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)调节着骨骼代谢.PTHrP通过对成骨细胞功能调节来影响骨骼代谢,这种作用主要由环腺苷酸(cAMP)依赖性的蛋白激酶A(PKA)和钙离子/蛋白激酶C(Ca2 /PKC)信号传导通路介导机械力来诱导成骨细胞增殖和分化.了解PTHrP和机械力对成骨细胞增殖和分化的影响,有助于指导正畸临床或基础研究.     

压应力对小鼠单核细胞RAW264.7 DNAX活化蛋白12、抗酒石酸酸性磷酸酶表达的影响

目的 探讨压应力对小鼠单核细胞RAW264.7 DNAX活化蛋白12（DAP12）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）表达的影响。方法 以小鼠单核细胞RAW264.7为研究对象,采用四点弯曲体外细胞加载装置加载压应力0、3、6、12 h,分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹法检测DAP12、TRAP mRNA和DAP12蛋白的表达情况。结果 小鼠单核细胞RAW264.7经破骨细胞培养液培养后,体积变大,核数目增多,TRAP染色阳性。受压应力刺激后,DAP12、TRAP mRNA及DAP12蛋白表达随加力时间延长而增加（P<0.05）。结论 小鼠单核细胞RAW264.7经破骨细胞培养液培养后成功向破骨细胞转化,转化细胞受压应力刺激活化过程中存在DAP12高表达。