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1.
2.
目的观察pcDNA3/mIL-18对pcDNA3/VP1DNA疫苗免疫效果的影响。方法从烫伤小鼠肺部组织细胞中提取总RNA进行RT-PCR扩增;将扩增产物与pGEM-T载体连接,构建mIL-18原核表达质粒pGEM-T/mIL-18,酶切纯化mIL-18片断,构建真核表达质粒pcDNA3/mIL-18,将其作为基因佐剂和pcDNA3/VP1共免疫BALB/c小鼠。结果3次免疫后,共免疫组中和抗体滴度高于pcDNA3/VP1组;而病毒滴度低于pcDNA3/VP1组。用10LD50CVB3攻击后,共免疫组小鼠生存率为35%,高于pcDNA3/VP1组。结论PcDNA3/mIL-18对pcDNA3/VP1DNA疫苗的免疫效果有一定的增强作用。 相似文献
3.
目的观察硫酸化八肽胆囊收缩素(sCCK-8)对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6基因表达的影响及核因子NF-κB活性,以探讨CCK-8对类风湿性关节炎(RA)的调控机制。方法大鼠滑膜细胞株RSC-364经TNF-α、sC-CK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育3 h,用RT-PCR检测细胞IL-6 mRNA的表达,孵育1 h,用电泳迁移率检测NF-κB活性,孵育30 min,用Western blot检测胞浆I-κB蛋白表达。结果sCCK-8(10-8~10-6mol/L)明显增加TNF-α诱导的IL-6 mRNA表达及NF-κB活性,呈剂量依赖性,降低胞浆中I-κB蛋白水平,并可被丙谷胺所拮抗。结论sCCK-8在类风湿性关节炎(RA)发病过程中可能具有调控作用。 相似文献
4.
目的 观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1、表达VP1蛋白的重组腺病毒rAd/VP1和重组质粒pcDNA3/VP1的免疫效果.方法 用原核细胞表达VP1蛋白并纯化、扩增重组腺病毒rAd/VP1,扩增并提取真核表达质粒pcDNA3/VP1.BALB/c小鼠随机分为4组,每组18只,分别在股四头肌注射VP1蛋白、rAd/VP1、pcDNA3/VP1和PBS.VP1蛋白组和pcDNA3/VP1组免疫3次,间隔3周;rAd/VP1组免疫2次,间隔2周.VP1蛋白、pcDNA3/VP1和rAd/VP1每次每只注射剂量分别为50μg、100μg和1.2×107PFU.用ELISA法和微量中和试验法检测各次免疫后血清CVB3特异性IgG抗体和中和抗体滴度;末次免疫后3周,CCK-8法检测脾脏淋巴细胞的CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察动物的存活情况.结果 VP1蛋白组血清特异性IgG抗体和中和抗体滴度明显高于其他实验组(P<0.05),而脾脏淋巴细胞CTL杀伤活性低于rAd/VP1组(P<0.05);致死量病毒攻击后,VP1蛋白组血中病毒滴度低于pcDNA3/VP1和rAd/VP1组(P<0.05),生存率明显高于这两组(P<0.05).结论 VP1蛋白疫苗能诱导较高水平的体液免疫应答,对动物有明显的免疫保护作用,免疫效果优于质粒pcDNA3/VP1和重组腺病毒rAd/VP1.Abstract: Objective To compare the immune effects of Coxsackievirus B3 (CVB3) capsid protein VP1 expressed bacterially, recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1which express VP1 protein in mice. Methods After expressed in prokaryotic cells, VP1 protein was purified. Recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1 were amplified and extracted. Six to 8-week-old, male BALB/c mice were divided into four groups randomly. Each group contained 18 mice. The mice of pcDNA3/VP1 group or VP1 protein group were immunized intramuscularly with three injections at three weeks apart, of recombinant plasmid pcDNA3/VP1 at a dose of 100 μg/mouse or recombinant protein VP1 at a dose of 50 μg/mouse. The mice of rAd/VP1 group were immunized intramuscularly twice at two weeks interval with rAd/VP1 at a dose of 1.2 × 107 PFU. The control group was mock-immunized with 100 μl of PBS intramuscularly. Mice were bled from the retroorbital sinus plexus every two weeks after each immunization. ELISA and micro-neutralization test were used to detect levels of CVB3-specific IgG antibody and neutralizing antibody titers in the sera of immunized mice. Three weeks after the last immunization, the cytotoxic T lymphocyte(CTL) killing activity of spleen lymphocytes was detected with CCK-8 assay. Subsequently, virus titers in the sera of immunized mice were determined by the 50% cell culture infective dose( CCID50 ) assay on HeLa cell monolayers and percentage of animals surviving were observed after lethal CVB3 attack over a period of 21 days. Results The titers of specific IgG antibody and neutralizing antibody in sera of VP1 protein immunized mice were higher than other groups( P <0.05 ). While CTL killing activity of spleen lymphocytes of VP1 protein immunized mice was lower than mice in rAd/VP1 group( P <0. 05). Virus titers in sera of VP1 protein immunized mice were lower than the mice in pcDNA3/VP1 or rAd/VP1 groups ( P < 0.05 ), while survival rate was significantly higher than these two groups ( P < 0.05 ).Conclusion VP1 protein induced higher level of humoral immune response and acquired obvious immune protection effects in mice. The immunizing potency of VP1 protein vaccine surpassed plasmid pcDNA3/VP1or recombinant adenovirus rAd/VP1. It appeared to be a promising candidate among the three different vaccines. 相似文献
5.
柯萨奇病毒B组3型VP1基因真核表达重组质粒的构建及免疫效果 总被引:4,自引:1,他引:4
目的构建柯萨奇病毒B组 3型 (CoxsackievirusesgroupB3,CVB3)VP1基因的真核表达重组质粒pcDNA3/VP1,并观察它对小鼠的免疫保护作用。方法从CVB3感染细胞中扩增出VP1片段 ,构建真核表达重组质粒 pcDNA3/VP1,经大量扩增纯化后 ,肌内注射免疫BALB/c小鼠 ,每次免疫后的第 6天 ,断尾取血检测CVB3中和抗体 ;3次免疫后用致死量 (10 0 0TCID50 )的CVB3感染小鼠 ,观察 pcDNA/VP1对小鼠的免疫保护作用。 结果pcDNA3/VP1重组质粒免疫小鼠后 ,能诱导机体产生中和抗体 ,各次免疫后抗体滴度分别为 <1∶5 ,1∶5 .7和1∶34.8;用致死量CVB3感染小鼠 ,pcDNA3/VP1重组质粒免疫组、pcDNA3质粒对照组及生理盐水对照组生存率分别为 30 %、2 0 %及 15 % ,3组小鼠生存率无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 pcDNA3/VP1重组质粒在小鼠体内能够表达并能诱导机体产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加 ,但免疫小鼠对致死量的CVB3感染无明显保护作用 相似文献
6.
医学微生物学实验教学对医学生创新能力培养的研究 总被引:2,自引:1,他引:1
创新教育是教学活动的核心,是高等医学院校实施素质教育的重点.实验教学在培养医学生创新意识方面有着得天独厚的优势.医学微生物学是与临床结合紧密,实践性很强的一门基础课.在医学微生物学实验教学中,我们采用了基础性验证性实验、综合性设计性实验、探索性创新性实验、开放性科研性实验四段式教学模式,探讨通过该实验教学方法培养医学生创新能力的效果.教学效果评价显示:四段式教学模式有效地激发了学生的学习兴趣、培养了学生独立思考的习惯、锻炼了学生的实践动手能力,其在培养学生创新思维、创新精神及创新能力方面亦起到了明显作用. 相似文献
7.
8.
抗氧化低密度脂蛋白抗体与冠心病的关系 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 :探讨氧化修饰低密度脂蛋白 (ox LDL)引发的免疫反应在动脉粥样硬化 (AS)发生发展中的作用 ,揭示ox LDL致AS的免疫学机制。方法 :90例冠心病 (CHD)患者 (分为 3组 :稳定型心绞痛组、不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组 ) ,采用ELISA法检测其血液中ox LDL、ox LDL Ab及ox LDL IC水平。并入选 4 0例健康人群作为对照组。结果 :CHD各组血液中ox LDL、ox LDL Ab及ox LDL IC水平明显高于对照组 ,以急性心肌梗死组为最高。 3项指标的阳性率以ox LDL IC为最高。ox LDL Ab与血清脂蛋白无关 ,与ox LDL呈负相关 ,与ox LDL IC正相关。结论 :ox LDL的免疫反应参与AS的发生发展 ,这是细胞和分子的一系列复杂的免疫炎症反应过程 相似文献
9.
10.
目的 构建重组腺病毒Ad/MDC-VP1,观察Ad/MDC-VP1与NA疫苗联合应用的免疫效果.方法 构建、包装重组腺病毒Ad/MDC-VP1并检测目的 蛋白的表达.BALB/c小鼠随机分为Ad/MDC-VP1、pcDNA3/MDC-VP1、pcDNA3/MDC-VPl+Ad/MDC-VP1和PBS 4组,肌肉注射免疫小鼠.用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1 IgG和中和抗体滴度;CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率.结果 成功构建并包装了重组腺病毒Ad/MDC-VP1,检测到目的 蛋白的表达.peDNA3/MDC-VP1+Ad/MDC-VP1组血清CVB3 VP1 IsG滴度、淋巴细胞增殖指数、CTL杀伤活性和对小鼠的保护率明显高于其他各组(P<0.05),血清病毒滴度低于其他各组(P<0.05).结论 Ad/MDC-VP1与DNA疫苗联合应用能显著提高小鼠细胞和体液免疫应答. 相似文献