染色体盒蛋白同源物3和p53在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

目的 研究染色体盒蛋白同源物3(CBX3)和p53在甲状腺乳头状癌(PTC)和癌旁组织中的表达及其临床意义.方法 选取手术切除PTC标本60例,同时选取同期距离肿瘤至少2 cm的相应癌旁组织作为对照,采用免疫组化En vision法检测PTC和相应癌旁组织中CBX3和p53的表达情况.结果 CBX3在PTC和癌旁组织中...     

天花粉多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其Caspase-3和Caspase-8活化对凋亡的影响

目的:研究天花粉多糖(polysaccharide of snakegourd root)对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用、诱导凋亡的作用以及Caspase-3、Caspase-8活化对凋亡的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用;DAPI染色后荧光显微镜进行细胞凋亡核形态学观察;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡率,分光光度比色法测定天花粉多糖诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡过程中Caspase-3、Caspase-8活性变化。结果:MTT结果显示,天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制作用。10.0μmol/L以上浓度的天花粉多糖作用2 d,DAPI染色可见核浓缩及边缘现象,DNA电泳出现特征性的凋亡条带。1.0、5.0、10.0和20.0μmol/L天花粉多糖处理的MCF-7细胞2 d,细胞凋亡率分别为(5.2±1.3)%、(13.1±4.7)%、(27.6±6.8)%和(43.8±9.8)%;10.0μmol/L天花粉多糖处理MCF-7细胞1、2、3 d,Caspase-3活性在2 d达最高(2.32±0.12)U/μg,而Caspase-8活性则在1d达最高(1.92±0.11)U/μg,两者与对照组相比均有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:天花粉多糖对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其诱导凋亡的机制可能与Caspase-3、Caspase-8活化有关。     

Toll样受体2/4-核因子κB信号通路在人结核分枝杆菌侵入小鼠树突细胞2.4中的作用

目的：研究人结核分枝杆菌侵入抗原提呈细胞后诱导树突细胞（DC）成熟的机制。方法：选择小鼠DC2.4细胞株为抗原提呈细胞的效应细胞,建立人结核分枝杆菌H37Rv株的细胞混合培养模型。在不同混合培养时段,采用实时荧光定量PCR检测DC2.4细胞Toll样受体2（TLR2）、TLR4 mRNA的表达量;蛋白质印迹法检测DC的核因子κB(NF-κB)p65蛋白的表达;免疫酶联吸附试验定量检测DC产生α肿瘤坏死因子（TNF-α）的水平;采用间接免疫荧光法和流式细胞术检测DC2.4表面CD80和CD86的表达情况。结果：H37Rv与DC2.4共培养2 h后开始有细菌侵入;共培养 6、8、10、12 h后,细菌侵入率分别为(37.9±5.6)%、(512±7.6)%、(57.2±8.9)%、(639±12.4)%;TLR2、TLR4 mRNA也开始增量,共培养10 h时达高峰,之后开始下降;共培养6 h时,NF-κB p65的表达量明显增高;TNF-α的表达量在共培养6 h开始上调,8 h时达高峰,随后逐渐下降;共培养6 h时,DC2.4表面CD80、CD86表达量明显增高。结论：人结核分枝杆菌侵入DC2.4时,通过激活TLR2/4-NF-κB信号通路,诱导DC成熟,提高其抗原提呈能力。     

磷脂酶C分子在结核分枝杆菌触发树突状细胞细胞骨架重排中的作用

目的：研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）侵入小鼠树突状细胞株（DC2.4）时细胞骨架微丝、微管变化及其与磷脂酶C（PLC）分子的关系。 方法：建立人结核分枝杆菌H37Rv株DC2.4细胞混合培养模型。采用罗丹明标记的鬼笔环肽（Palloidin-TRITC）染细胞F-actin,用抗微管蛋白β亚单位的小鼠一抗和荧光素标记的兔抗小鼠二抗染细胞微管,检测H37Rv株侵入DC2.4细胞时细胞骨架的变化情况,并计算F-actin重排率。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测DC2.4细胞浆和细胞膜中PLC分子的表达。采用PLC分子抑制剂U73122预处理DC2.4细胞,观察H37Rv株侵入率变化以及对细胞骨架变化的影响。 结果：结核分枝杆菌H37Rv株与DC2.4细胞共育2 h,即见有细菌侵入,共育4、6、8、10、12 h后,H37Rv侵入率分别为（26.1±4.5）%、（39.9±5.6）%、（51.2±5.9）%、（57.9±6.1）%和（63.9±6.8）%;H37Rv侵入2、4、6、8、10、12 h时,F-actin重排百分率分别为（26.9±1.5）%、（59.3±2.8）%、（72.7±4.8）%、（78.2±5.9）%、（63.3±2.9）%和（43.2±2.6）%,而PLC信号分子阻断后,DC2.4细胞的侵入率则分别为（13.6±3.1）%、（14.2±3.9）%、（15.1±4.3）%、（16.8±4.0）%和（18.3±5.2）%,F-actin重排率也分别为（18.5±1.2）%、（22.3±1.7）%、（23.6±2.5）%、（24.8±2.3）%、（22.3±1.3）%和（23.8±1.8）%,而微管变化不大;混合培养4、6、8、10 h,PLC信号通路阻断前的侵入率和F-actin重排率明显高于PLC分子阻断后（P＜0.05）。侵入2 h后,DC2.4细胞膜中的PLC分子表达即开始升高,至8 h时达最高;U73122可抑制DC2.4细胞膜中PLC分子的表达,而对细胞浆中的PLC分子影响不大。 结论：结核分枝杆菌可通过激活DC2.4细胞PLC分子触发F-actin细胞骨架重排,从而侵入DC2.4细胞,且PLC分子的表达主要存在于DC2.4细胞膜上。