CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞对肝星状细胞增殖及功能的影响

目的 了解CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞在体外对肝星状细胞(HSC)增殖以及功能的影响,初步探讨调节性T淋巴细胞促肝纤维化的机制。方法传代培养HSC LX-2,将免疫磁珠细胞分选(MASC)法分离所得慢性乙型肝炎患者调节性T淋巴细胞与HSC LX-2按不同方式共培养5d,以单独培养的HSC作为对照,细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测共培养HSC增殖情况,ELISA法检测上清液中转化生长因子(TGF)β1含量,放射免疫法检测HSC分泌HA、PCⅢ水平。统计学处理采用LSD-t检验。结果 5例调节性T淋巴细胞与HSC比例为1.5∶1时HSC增殖最为明显,10例直接接触共培养与使用Transwell系统共培养调节性T淋巴细胞与HSC吸光度值分别为(0.713±0.032)、(0.735±0.028) cpm,均较对照组的（0.677±0.029）cpm增殖明显(t=5.4003,8.7878;均P＜0.01)。10例直接接触共培养与Transwell组细胞上清液中TGFβ1浓度分别为(781.59±76.45)、（813.53±60.62）pg/mL,显著高于对照组的(722.51±59.66) pg/mL（t=4.0014,6.1653;均P＜0.01）;HA浓度分别为（433.57±27.90）、（445.40±23.73）ng/mL,显著高于对照组的（415.83±19.44）ng/mL（t=3.3124,5.5231;均P＜0.01）;PCⅢ浓度分别为(21.93±1.71)、(23.12±1.87) ng/mL,显著高于对照组的（20.10±1.49）ng/mL(f=4.8082,7.9436;均P＜0.01)。且Transwell组各项结果均显著高于直接接触组(t=3.3875,2.1639,2.2107,3.1354;均P＜0.05)。结论CD4+ CD25+ CD127dim调节性T淋巴细胞可促进共培养的HSC增殖及其HA、PCⅢ的分泌。体外实验证明,CD4+ CD25+ CD127dim/-调节性T淋巴细胞具有促进肝纤维化的重要作用。     

慢性乙型肝炎肝纤维化患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞与人肝星状细胞共培养的实验研究

目的探讨CD4+CD25+CD127low/-T细胞在慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化发病机制中的作用。方法按肝纤维化S分期将慢性乙型肝炎肝纤维化患者分为S1~S2期6例和S3~S4期7例;采用磁激活细胞分选法(MACS)提取13例患者和6例健康对照者外周血CD4+CD25+CD127low/-T细胞;分别将CD4+CD25+CD127low/-T细胞以不同比例与人肝星状细胞株(hepaticstellate cell,HSC)共培养5天,检测各组HSC的增殖及TGF-β1的分泌。结果 CD4+CD25+CD127low/-T细胞与HSC之比,当健康对照组和S1~S2期组为1.5∶1,S3~S4期组为2∶1时,HSC的增殖速度和TGF-β1分泌量均在同组不同比例中达最高值。各组同比例之间,当比例为1.5∶1时,健康对照组HSC的增殖速度显著高于S3~S4期组(P<0.05);在比例为1∶1~2∶1范围内,S1~S2期组和S3~S4期组HSC的TGF-β1分泌量远高于同比例健康对照组(P<0.05)。结论 CD4+CD25+CD127low/-T细胞可能通过自身细胞数量和功能的双重调节,影响肝星状细胞的增殖和分泌,参与了慢乙肝肝纤维化的进展。     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量与肝脏疾病慢性化进展关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者(chornic hepatitis B,CHB)外周血中CD4+CD 25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的数量与肝脏慢性疾病进展的关系。方法流式细胞术检测抗病毒治疗后45例CHB患者(根据B超将其分为3组,其中B超提示肝脏无异常改变的单纯CHB组15例,提示慢性肝病改变的CHB慢性肝病组15例,提示肝硬化改变的CHB肝硬化组15例)与B超均提示肝脏无异常改变的15例慢性乙型肝炎病毒携带者(asymptomic HBV carriers,ASCs)以及15例健康成年人(normal control,NC)对照外周血中CD4+CD25+Treg的变化,并分析Treg与患者年龄,HBeAg定量,ALT、AST、TGF-β1水平的相关性。结果外周血中CD4+CD25+Treg占CD4+淋巴细胞的比例在抗病毒治疗后单纯CHB组为(4.03±1.36)%,与NC组(4.02±1.14)%相比差异无显著性(t=0.0223,P>0.05),与ASCs组(5.26±1.25)%相比显著减少(t=-2.2872,P<0.05);CHB慢性肝病组为(5.65±2.01)%,CHB肝硬化组为(5.32±1.47)%,与NC组、单纯CHB组比显著增高(t值分别为3.0351、3.0129、2.4269、2.4046,均P<0.05)与ASCs组相比差异无显著性(t值分别为0.7257、0.1174,均P>0.05);CHB慢性肝病、肝硬化组间相比差异无显著性(t=0.6083,P>0.05)。Treg的数量与年龄、AST、TGF-β1水平呈正相关(r分别为0.327、0.324、0.306,P分别为0.004、0.005、0.008)。结论 Treg在低水平AST时CHB患者外周血中的数量的增高对抗病毒治疗后的CHB患者更能反映其肝脏慢性损伤程度,Treg可能参与了慢性HBV感染后肝脏疾病慢性化进展的过程。     

过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ和脂肪酸结合蛋白在大鼠肝纤维化模型中的表达

我国是慢性病毒性肝炎高发国家,肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展所共有的病理过程[1].脂质过氧化损伤是肝纤维化形成过程中的重要原因之一.过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ(PPAR-γ)属于核激素受体超家族的成员,在肝纤维化中参与脂质过氧化损伤过程,脂肪酸结合蛋白(L-FABP)作为PPAR-γ配体之一,参与脂肪酸氧化过程[2-3].本研究通过建立肝纤维化模型,检测PPAR-γ和L-FABP的变化水平,以进一步明确肝纤维化中,脂质过氧化损伤相关因子的作用.     

β连环蛋白在大鼠肝纤维化模型中的动态表达及意义

目的研究wnt信号通路的核心因子β连环蛋白（β-catenin）在肝纤维化大鼠模型中的动态表达及意义。方法腹腔注射二甲基亚硝胺（DMN）诱导大鼠肝纤维化模型。分别在造模后4 d、1、2、4、6、8周等不同时间点测血清ALT、AST、TBil、Alb的变化,采用HE及Masson染色观察肝组织学变化,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同时间点肝脏β-catenin mRNA的表达。结果正常肝组织中有少量β-catenin表达,随着肝纤维化的发展,β-catenin的表达量逐渐增加,至第4周达到高峰,第8周略有下降,但仍高于正常。β-catenin的表达量与肝脏纤维化分期（S0～S4）呈正相关（rs=0.926,P〈0.001）。结论β-catenin可能参与肝纤维化的发生,并与纤维化的发展过程密切相关。     

调节性T细胞对肝星状细胞增殖及透明质酸分泌的影响

目的研究CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)对肝星状细胞(HSC)增殖及透明质酸(HA)分泌的影响。方法 MASC法分离慢性乙型肝炎患者血中CD4+CD25+Treg细胞;传代培养人HSC LX-2(空白组),不同比例CD4+CD25+Treg细胞与HSC直接共培养(共培养组),不同剂量的重组人转化生长因子(TGF)β1和HSC共培养(对照组);使用CCK-8法检测HSC增殖、放射免疫法检测HA分泌情况。组间比较采用单因素方差分析。结果共培养组与空白对照组(0.6623±0.02702)相比,在比例为2.5∶1时HSC增殖最为明显(0.6836±0.00560),比例为1∶1、5∶1及7.5∶1时HSC增殖均明显减少,且随着比例升高其增殖水平逐渐降低,各组与空白对照组相比有统计学差异(F=11.421,5.272,84.514,490.639;均P<0.05)。不同浓度TGFβ1对照组的HSC均比空白对照组(0.3883±0.00189)细胞增殖明显(0.6720±0.00753,0.6773±0.00585,0.5373±0.00387),并于8 ng/μl时增殖达到高峰,各亚组与空白组相比有统计学差异(F=196.175,799.624,236.461;P<0.01)。共培养组与对照组中细胞上清液中HA浓度与HSC增殖呈正相关(r=0.661、0.871,均P<0.01)。结论 CD4+CD25+Treg细胞促HSC增殖并促进其分泌HA,并在体外证实CD4+CD25+Treg细胞在慢性乙型肝炎进展过程中发挥重要作用。     

五种评分系统对慢性重型肝炎预后的预测价值比较及其临床意义

目的 比较终末期肝病模型(MELD)评分、Child-Turcotte-Pugh(CTP)评分、Mayo评分、MESO指数和MELD-Na评分系统预测慢性重型肝炎患者预后的价值.方法 回顾性分析温州医学院附属第一医院213例慢性重型肝炎患者的临床资料,计算其MELD、CTP、Mayo、MESO和MELD-Na评分,比较各评分系统在死亡组和生存组中的差异,通过受试者工作特征(ROC)曲线,曲线下面积(AUC)及截断值进行比较分析.计量资料的比较使用成组t检验,各评分系统之间AUC的比较使用MEDCLAC软件.结果 死亡组的MELD、CTP、Mayo、MESO、MELD-Na评分分别是(30.6±9.5)、(11.3±1.5)、(10.4±1.3)、(2.3±0.8)和(39.0±11.8)分,均高于生存组的(21.1±6.8)、(10.6±1.6)、(9.0±1.5)、(1.6±0.5)和(22.6±8.2)分,差异有统计学意义(t=7.31,t=3.10,t=6.70,t=7.90,t=10.21,均P＜0.01);各评分系统的AUC分别为0.810、0.623、0.749、0.829和0.885;Youden指数分别为0.507、0.175、0.389、0.528和0.650.结论 CTP评分判断慢性重型肝炎的预后尚不理想;Mayo评分具有一定的预测能力;MELD、MESO、MELD-Na评分在预测慢性重型肝炎预后方面具有肯定的临床应用价值,且MELD-Na评分优于MESO指数和MELD评分.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞数量与肝脏疾病慢性化进展关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者（chornichepatitis B,CHB）外周血中CD4＋CD25＋调节性T细胞（regulatory Tcells,Treg）的数量与肝脏慢性疾病进展的关系。方法流式细胞术检测抗病毒治疗后45例CHB患者（根据B超将其分为3组,其中B超提示肝脏无异常改变的单纯CHB组15例,提示慢性肝病改变的CHB慢性肝病组15例,提示肝硬化改变的CHB肝硬化组15例）与B超均提示肝脏无异常改变的15例慢性乙型肝炎病毒携带者（asymptomic HBV carriers,ASCs）以及15例健康成年人（normal control,NC）对照外周血中CD4＋CD25＋ Treg的变化,并分析Treg与患者年龄,HBeAg定量,ALT、AST、TGF—β水平的相关性。结果外周血中CD4＋CD25＋Treg占CD4＋淋巴细胞的比例在抗病毒治疗后单纯CHB组为（4．03±1．36）％,与NC组（4．02±1．14）％相比差异尤显著性（t=0．0223,P〉0．05）,与ASCs组（5．26±1．25）％相比显著减少（t=-2．2872,P〈0．05）;CHB慢性肝病组为（5．65±2．01）％,CHB肝硬化组为（5．32±1．47）％,与NC组、单纯CHB组比显著增高（t值分别为3．0351、3．0129、2．4269、2．4046,均P〈0．05）与ASCs组相比差异无显著性（￡值分别为0．7257、0．1174,均P〉0．05）;CHB慢性肝病、肝硬化组间相比差异无显著性（t=0．6083,P〉0．05）。Treg的数量与年龄、AST、TGF—β1水平呈正相关（r分别为0．327、0．324、0．306,P分别为0．004、0．005、0．008）。结论Treg在低水平AST时CHB患者外周血中的数量的增高对抗病毒治疗后的CHB患者更能反映其肝脏慢性损伤程度,Treg可能参与了慢性HBV感染后肝脏疾病慢性化进展的过程。