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1.
目的:探讨一氧化氮(NO)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:S-亚硝基化生物素转化法、一氧化氮合酶(NOS)活性及NO产物测定法检测各组细胞3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)S-亚硝基化与NO产物关系;蛋白质印迹法检测各组细胞及细胞核中GAPDH蛋白表达;台盼蓝染色、DNA裂解分析、Caspase-3活性测定法检测各组FRO细胞凋亡。结果:20ng/mLTRAIL处理FRO细胞0~24h,可见NOS活性及作为NO氧化产物的硝酸盐和亚硝酸盐水平呈时间依赖性增加,于4h开始显著增高,P=0.008;12h达高峰。iNOS抑制剂L-NAME抑制TRAIL诱导的GAPDHS-亚硝基化及其随后的细胞核转位,但不影响TRAIL诱导的GAPDH表达。L-NAME显著抑制TRAIL诱导的人甲状腺癌细胞凋亡和Caspase-3活性,P值均<0.001。结论:NO介导的GAPDHS-亚硝基化修饰和随后的细胞核转位可能参与了TRAIL诱导的人甲状腺癌细胞凋亡。 相似文献
2.
目的:探讨2型糖尿病患者运动神经传导速度(motornerveconductionvelocity,MNCV)和感觉神经传导速度(sensorynerveconductionvelocity,SNCV)的变化与C肽水平的关系,为防治糖尿病周围神经病变提供理论依据。方法:回顾性分析73例2型糖尿病患者的MNCV和SNCV与C肽释放试验中糖负荷前及糖负荷120minC肽水平的关联性。结果:2型糖尿病患者的MNCV及SNCV正常者和异常者的下降与糖负荷120minC肽水平下降有关(t=23.15~35.46,P<0.01),与糖负荷前C肽水平下降无关(t=0.47~1.63,P>0.05)。结论:C肽水平下降可能会加速神经传导速度的下降,提示保持血中C肽水平,有可能延缓周围神经病变的进展。 相似文献
3.
目的 解析胱天蛋白酶(caspase)3介导BCL2结合抗凋亡基因3(BAG3)酶切的具体作用靶点,明确caspase 3裂解对BAG3抗凋亡作用的影响。方法 采用生物信息学方法筛选BAG3蛋白序列中潜在胱天蛋白酶caspase酶切位点;采用定点突变法构建潜在胱天蛋白酶caspase酶切位点突变体;体外翻译野生型和突变体BAG3蛋白;利用重组胱天蛋白酶caspase对野生型或突变型重组BAG3蛋白进行体外剪切实验;构建BAG3裂解片段的真核表达载体,突变型或片段BAG3表达载体转染SW1990细胞;利用Western blot检测各组细胞中BAG3蛋白的裂解情况;利用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果 在BAG3蛋白序列中存在K344EVD347和L515EAD518 2个潜在胱天蛋白酶caspase酶切位点;胱天蛋白酶caspase3可有效剪切D518A突变型BAG3,而不能剪切D347A突变型BAG3;D518A突变型和野生型BAG3同等程度抑制MG132诱导的细胞凋亡,D347A突变型BAG3对细胞凋亡的保护作用高于D518A突变型或野生型BAG3,而N末端和C末端剪切片段BAG3对MG132诱导的细胞凋亡无作用。结论 胱天蛋白酶caspase3主要在D347位点裂解BAG3蛋白;BAG3在D347位点的剪切使其丧失了原有的抗凋亡作用。 相似文献
4.
.TRAIL与衣霉素单用对甲状腺癌细胞均无明显杀伤作用,最高凋亡细胞比率分别为10.68%和10.14%;衣霉素与TRAIL联合组凋亡细胞比率最大达60.5%;但在存活素过表达甲状腺未分化癌ARO细胞中,凋亡细胞比率降低50%左右.结论:在体外单用TRAIL对甲状腺癌细胞增殖无明显抑制作用,衣霉素明显增加肿瘤细胞对TRAIL敏感性,其增敏机制至少部分与下调存活素水平有关. 相似文献
5.
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肿瘤细胞中过氧化氧化还原蛋白(PRDXs)表达的影响及其机制。方法:选取肿瘤细胞,设立对照组和TRAIL处理组;用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测PRDXs在各种肿瘤细胞中的表达;用PCR法克隆PRDX4启动子,用萤光素酶含量测定其含量。结果:与对照组相比,TRAIL处理组中PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5和PRDX6mRNA及蛋白表达差异无统计学意义,P>0.05;PRDX4mRNA和蛋白的表达显著降低,P<0.01;放线菌素D处理8h时,TRAIL处理组与对照组中PRDX4mRNA降解近50%,差异无统计学意义,P>0.05;TRAIL显著降低pPRDX4/-979的活性呈剂量依赖方式。结论:TRAIL在转录水平上下调肿瘤细胞中PRDX4基因的表达,对PRDX4mRNA的稳定性没有影响。 相似文献
6.
目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用.方法:对2种人甲状腺未分化癌细胞系FRO、AR0分别设空白对照组和蛋白酶体抑制荆处理组;及siGRP78、随机序列核酸siRNA和错位型siGRP78组.利用蛋白酶体抑制荆MG132(1μtmol/L)、PSI(10 nmol/L)和EPOX(5 nmol/L)作用2种细胞系,实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞GRP78 mRNA、蛋白表达.流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:蛋白酶体抑制剂处理24 h后,2种细胞系中GRP78mRNA及蛋白水平保持相似增长高峰,为空白对照组2~3倍(P<0.01);siGRP78转染24 h,细胞总GRP78 mRNA丢失>80%,转染48 h,GRP78蛋白总量丢失>75%.蛋白酶体抑制剂MG132作用后,ARO、FRO细胞凋亡率分别为8.3%和78.3%;当siGRP78靶向沉默GRP78后,蛋白酶体抑制剂诱导2种细胞凋亡率显著增加,AR0细胞凋亡率提高5倍左右(P<0.01).结论:2种甲状腺癌细胞系存在GRP78基因表达,不同程度干扰蛋白酶体抑制荆凋亡诱导作用;沉默GRP78基因表达可提高蛋白酶体抑制荆对肿瘤细胞杀伤率. 相似文献
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目的:探讨蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌FRO细胞中活化转录因子4(ATF-4)表达的影响,以及ATF-4在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设空白对照纽和蛋白酶体抑制剂MG132处理组;利用微小RNA干扰技术,减少ATF-4的表达,实时定量PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞中ATF-4、氧调节蛋白150(ORP150)mRNA和蛋白表达;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂MG132显著增加FRO细胞系中ATF-4基因表达水平,P〈0.01;与空白对照组和随机序列核酸siRNA组相比,siATF-4处理组中ATF-4、ORP150mRNA及蛋白表达水平显著降低(P〈0.01),其凋亡率显著增加,P〈0.01。结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌FRO细胞系中ATF4基因的表达水平,siATF-4具有降低ATF-4及OPR150基因表达的作用,同时增加蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺未分化癌FRO细胞的凋亡作用。 相似文献
8.
目的探讨白藜芦醇增加3T3-L1脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制。方法设立空白对照组、白藜芦醇组、肿瘤坏死因子(TNF-α)组及白藜芦醇+TNF-α组。用空白对照、白藜芦醇、肿瘤坏死因子(TNF-α)、或者二者联合处理3T3-L1脂肪细胞。用酶联免疫吸附法测定脂联素水平;实时定量PCR测定脂联素和过氧化物酶体增生物激活受体(PPARPPAR-γ-γ)mRNA水平;免疫蛋白电泳测定脂联素蛋白水平;用PPARPPAR-γ转录因子测定试剂盒测定PPARPPAR-γ活性。结果?与空白对照组相比较,白藜芦醇组中增加PPARPPAR-γ及脂联素mRNA在3T3-L1脂肪细胞中的表达增加(P<0.05);TNF-α抑制组中脂联素mRNA在分化的3T3-L1脂肪细胞中的表达及释放减少(P<0.05);。与TNF-α组相比较,白藜芦醇+修复TNF-α组抑制的分化3T3-L1脂肪细胞中脂联素mRNA的表达及分泌有所增加(P<0.05);白藜芦醇拮抗阻止TNF-α对分化3T3-L1脂肪细胞中PPARPPAR-γmRNA表达及活性的抑制(P<0.05)。结论?白藜芦醇能够通过调节PPARPPAR-γ的转录活性继而拮抗修复TNF-α诱导下调3T3-L1脂肪细胞中脂联素的表达及分泌。 相似文献
9.
目的:探讨Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)在蛋白酶体抑制剂MG132诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:根据对蛋白酶体抑制剂敏感程度高低,选取2种人甲状腺未分化癌细胞系FRO和ARO,分别设培养液处理空白对照组、蛋白酶体抑制剂MG132处理组、Pancaspase抑制剂Z-VAD-FMK处理组及MG132+Z-VAD-FMK联合组,按不同时段处理细胞;利用实时定量RT-PCR法检测各组细胞BAG3 mRNA表达及MG132诱导其表达时效性,蛋白质印迹法检测各组细胞BAG3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,在MG132诱导作用下,2种细胞中BAG3 mRNA表达呈相似程度的增加,具有浓度依赖效应(ARO:F=278.93,P=0.000;FRO:F=410.56,P=0.000),并随作用时间呈现时效性(ARO:F=198.67,P=0.000;FRO:F=174.43,P=0.000);在ARO细胞中,BAG3蛋白表达也呈剂量依赖诱导效应,但各浓度组间细胞凋亡率差异无统计学意义,P>0.05;而在FRO细胞中,随MG132浓度增加,发现大量40×103BAG3剪切片断,其细胞凋亡... 相似文献
10.
目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)对TRAIL诱导人甲状腺癌细胞凋亡作用的影响.方法:流式细胞术、蛋白质印迹法、蛋白质羰基测定法和共聚焦显微镜分别用于检测细胞凋亡、GAPDH蛋白表达、氧化损伤程度和细胞核内GAPDH免疫染色表达.运用微小RNA干扰技术下调GAPDH表达.结果:与耐药细胞系相比,TRAIL敏感的FRO和KTC2细胞核提取液中可见不同程度的GAPDH蛋白表达、细胞内羰基蛋白显著集聚.IFN-γ可增加耐药ARO细胞核中GAPDH水平.IFN-γ或TRAIL单药组细胞凋亡率均<5%,而IFN-γ/TRAIL联合组细胞凋亡率达28.5%.siGAPDH组与siRNA对照组间细胞凋亡率差异有统计学意义(t=4.909,P=0.08),使对照组细胞凋亡率下降11%.结论:IFN-γ加强TRAIL诱导人甲状腺癌细胞凋亡可能是通过上调细胞核内GAPDH表达实现的. 相似文献