5-杂氮-2′-脱氧胞苷抑制人鼻咽癌CNE细胞生长的机制

目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)抑制人鼻咽癌CNE细胞系生长增殖的机制,寻找鼻咽癌治疗的新靶点。方法用5-Aza-CdR处理人鼻咽癌CNE细胞,应用MTT试验观察不同浓度的5-Aza-CdR对癌细胞生长增殖的影响。用甲基化特异性PCR(MSP)分析死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因甲基化状态;逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学、流式细胞仪检测用药前后DAPK mRNA、蛋白的表达情况及细胞凋亡和细胞周期的变化。结果从CNE细胞生长曲线知各浓度的5-Aza-CdR对细胞生长均有抑制作用。未经5-Aza-CdR处理的CNE细胞中DAPK基因CpG岛过甲基化,且DAPK mRNA不表达。经5-Aza-CdR处理后,甲基化的DAPK基因部分去甲基化,用药组的细胞中均有DAPK mRNA表达,且表达随药物浓度增高而增强。免疫细胞化学结果显示,经药物处理后的CNE细胞中DAPK蛋白表达呈阳性,而对照组不表达。流式细胞分析结果显示,药物处理后细胞凋亡率明显增加,且G0/G1期细胞增加,G2/M期减少。结论5-Aza-CdR对体外培养的鼻咽癌细胞生长增殖的抑制作用,可能是由于其能使因甲基化而失活的DAPK基因再转录,诱导该基因重新表达的结果。     

可视法脑片膜片钳技术观察大鼠前庭内侧核神经元毒蕈碱样胆碱能受体的电生理特性

目的 建立大鼠前庭内侧核脑片可视法膜片钳实验技术,探讨前庭内侧核神经元毒蕈碱样胆碱能受体(muscarinic cholinergic receptor,M受体)介导电流的生物学特性.方法 选用15只Wistar大鼠用于制备前庭内侧核脑片,应用红外微分干涉相差(infrared differential interference contrast,IR-DIC)技术结合电荷耦合式感光成像(charge coupled device-camera,CCD-camera)系统,在可视法膜片钳全细胞记录模式下对20个正常功能状态的前庭内侧核神经元M受体的通道电流性质进行观察和分析.结果 可视法脑片膜片钳技术可对神经元直接进行准确定位和功能状态的筛选.前庭内侧核神经元给予毒蕈碱后电流-电压(I-V)曲线斜率增加,毒蕈碱引发效应电流的反转电位为(-88.4±4.9)mV((-x)±s,下同),表明M受体去极化效应是由钾电导的减少所介导;M受体介导电流的电压敏感性测试显示:毒蕈碱引发的效应曲线呈线性关系,反转电位为(-86.7±3.5)mV,提示毒蕈碱所阻断的钾电流为非电压敏感性的漏钾电流.结论 可视法脑片膜片钳实验技术克服了盲法脑片膜片钳技术的缺陷,提高了神经元封接的成功率.通过对前庭内侧核神经元M受体通道电流性质的分析,进一步揭示毒蕈碱样胆碱能机制的兴奋性调节作用,为临床抗胆碱药物的应用提供新思路.     

鼠尾胶原在毛细胞膜片钳实验中的应用

目的 探讨应用鼠尾胶原在豚鼠前庭毛细胞膜片钳实验中的促进毛细胞贴壁效果。方法 制作鼠尾胶原，观察全细胞膜片钳实验中，自制的鼠尾胶原对前庭毛细胞的贴壁黏附作用。结果 无鼠尾胶原时，前庭毛细胞悬浮于外液，不宜封接；有鼠尾胶原时，前庭毛细胞贴附于培养皿底壁，易于封接和长时间（约8h)的观察和记录。鼠尾胶原对前庭毛细胞具有良好的贴壁黏附促进作用。结论 鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录；并且制作简便，成本低廉。     

豚鼠耳蜗外毛细胞乙酰胆碱敏感性钾电流特性

目的 研究豚鼠耳蜗外毛细胞乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)敏感性钾电流离子特性及其受体的药理学特性.方法 健康豚鼠38只,断头后取出基底膜,经胶原酶Ⅳ消化后获取外毛细胞.采用全细胞记录膜片钳技术检测新鲜单离外毛细胞ACh-敏感性钾电流对细胞外钙依赖性钾电流阻断剂和N型胆碱能受体抑制剂的敏感性.结果 ①细胞外ACh激活一快速去敏感化的外向性钾电流,其平均(-x±s,以下同)反转电位为(-67.3±8.2)mV(n=10);-50 mV钳制电压下,100 μmol/LACh激活电流的幅值为(506.6±186.3)pA(n=9).②ACh-敏感性钾电流对细胞外四乙铵(tetraethylammonium,TEA,10 mmol/L)、蜂毒明肽(apamin,1 μmol/L)敏感,而细胞外的IBTX(iberiotoxin,200 nmol/L)对ACh-敏感性钾电流幅值无抑制作用.③ACh-敏感性钾电流的半数激活浓度(EC50)为(33.5±5.7)μmol/L(n=7).④ACh-敏感性钾电流对细胞外γ-氨基丁酸(gammaaminobutyric acid,GABA)-A受体阻断剂荷包牡丹碱(bicuculline)和α9-N型胆碱能受体(α9受体)特异性抑制剂士的宁(strychnine)敏感.士的宁和荷包牡丹碱对ACh-敏感性钾电流的抑制作用具有浓度依赖性,其半数抑制浓度(IC50)分别为(22.3±2.6)nmol/L(n=7)和(1.2±0.4)μmol/L(n=6).结论 细胞外ACh激活豚鼠耳蜗外毛细胞产生小电导钙依赖性钾电流(SK),此电流可能由α9受体介导.     

豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞胆碱能受体通道特性

目的 研究豚鼠前庭Ⅱ型前庭毛细胞胆碱能受体介导的离子通道的特性。方法 应用全细胞膜片钳技术研究豚鼠新鲜单离的Ⅱ型前庭毛细胞对细胞外乙酰胆碱(ACh)的反应。结果 Ⅱ型毛细胞对ACh敏感,10~(-6)～10~(-3)MACh可引起一浓度依赖性电流(EC50=54.5μM)。-50mV钳制电压下,标准盐溶液中,10μM ACh激活一缓慢持久的外向电流,电流幅值177±40pA。绝大多数检测的毛细胞再次完全激活时间约为60S。细胞膜电位对此电流的通道电导无影响,1mM ACh增大细胞静息电导0.5～1.0倍。细胞外钠离子不参与此电流的激活。此电流的反转电位依赖于细胞外钾浓度,提示乙酰胆碱激活一钾电流。结论 细胞外ACh激活一缓慢持久的电流,此电流的激活依赖于细胞外钾离子浓度,可能激活一钾电流。     

颞骨骨化纤维瘤

目的：探讨颞骨骨化纤维瘤的诊断和治疗，提高对该病的认识。方法：报道1例颞骨骨化纤维瘤男性患儿，取耳后沟外切口，暴露瘤体，彻底切除肿瘤组织，封闭外耳道残端，取自体腹壁脂肪填塞术腔；术后定期随诊。结果：术后病理证实为颞骨骨化纤维瘤，术后随访1年无复发，外耳道内端封闭完好。结论：颞骨骨化纤维瘤临床罕见，虽为良性肿瘤，但可压迫和侵袭邻近重要组织和器官，引起功能障碍和颅内感染,一旦确诊，应尽早完整切除。     

光学相差显微镜下前庭囊斑两型毛细胞的形态学鉴别

目的:探讨电生理实验中,光学相差显微镜下较为可靠的前庭两型毛细胞辨别标准.方法:对于豚鼠椭圆囊和球囊分离所得的前庭毛细胞,分别对细胞胞体的长、宽以及表皮板纤毛的长度进行测量,并对长宽比和纤毛胞长比进行分析.结果:豚鼠椭圆囊和球囊的两型前庭毛细胞相比,细胞的宽度和纤毛的长度比较差异无统计学意义,Ⅰ型毛细胞的长度明显较长,长宽比较大,纤毛胞长比较小.结论:在既往以是否有明显的颈部来区分两型前庭毛细胞的基础上,结合细胞的长宽比和纤毛胞长比进一步进行辨别,有助于更准确地区分两型毛细胞.     

Muscarinic acetylcholine receptor subtype expression in type vestibular hair cells of guinea pigs

Recent studies have demonstrated that five subtypes (M1-M5) of muscarinic acetylcholine receptor (mAChR) are expressed in the vestibular periphery.However,the exact cellular location of the mAChRs is n...     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷抑制人喉癌裸鼠移植瘤的机制探讨

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷对Hep-2人喉癌裸鼠移植瘤生长的影响,寻找喉癌治疗的新靶点.方法:建立喉癌裸鼠移植瘤模型,用5-杂氮-2'-脱氧胞苷处理裸鼠,观察移植瘤的生长情况并绘制其生长曲线.用RT-PCR和免疫组织化学技术检测死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase DAPK)基因mRNA及蛋白表达的变化.结果:5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人喉癌裸鼠移植瘤处理后用药组和对照组之间裸鼠的体重无明显差异(t=0.011,P＞0.05),而移植瘤的体积用药组较对照组明显减小,统计学差异有显著性(t=10.11,P＞0.01).在喉癌移植瘤组织中,对照组DAPK均不表达,而用药组出现表达.结论:5-杂氮-2'-脱氧胞苷在体内能使因甲基化而失活的抑癌基因再转录,诱导其表达,进而抑制喉癌移植瘤的生长.     

耳鼻咽喉科学技能培训基地与医学生临床实习方案

目的 探讨耳鼻咽喉科学临床实习教学改革在培养高素质、有实践能力的临床医学专业医学生中的作用与意义。方法 建立了耳鼻咽喉科学临床技能培训基地,制定了临床医学专业耳鼻咽喉科学临床实习方案及临床医学专业耳鼻咽喉科学临床技能考核方案。结果在四届五年制及二届七年制临床医学专业医学生耳鼻咽喉科学临床教学中实施。医学生临床实践能力及本专业知识的理解和掌握明显提高。结论 建立系统的临床技能培训基地并实施科学合理的临床实践技能培养方案及临床技能考核方案,不仅是提高临床实践教学质量的关键,亦是解决当前临床实践教学矛盾的有效方法。