抗B7-H4-scFv / PE38KDEL 重组免疫毒素的表达和功能性检测

目的:构建基于抗B7-H4 单链抗体(scFv)的重组毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,检测毒素蛋白的抗肿瘤作用。方法:通过重叠延伸PCR(SOE-PCR )技术将anti-B7-H4-scFv 基因和毒素PE38KDEL 基因进行连接,重组基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达,蛋白经变复性和镍柱亲和层析(Ni-NTA)纯化后进行Western blot 鉴定;间接ELISA 和流式分析技术进行特异性鉴定。利用MTT 法和皮下移植瘤模型实验,检测毒素对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,并对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。结果:酶联后得到重组表达载体pET28a-anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,纯化后的毒素蛋白对肿瘤细胞具有一定杀伤力,并且在肿瘤模型实验中能抑制体内肿瘤的生长。结论:成功构建了基于抗B7-H4 单链抗体的重组毒素表达体系,经鉴定重组毒素蛋白有良好的生物学功能活性和抗肿瘤活性。     

HPLC法同时测定半枝莲中黄酮和生物碱类成分

目的 建立同时测定半枝莲饮片中木犀草素、芹菜素、汉黄芩素、半枝莲生物碱A和半枝莲生物碱B的HPLC法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Phenomenon C₁₈柱(250 mm×4.60 mm,5 μm),以乙腈-水溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃;木犀草素、芹菜素检测波长为355 nm,汉黄芩素、半枝莲生物碱A和生物碱B检测波长为264 nm。结果 木犀草素、芹菜素、汉黄芩素、半枝莲生物碱A和生物碱B分别在0.0374~2.40 μg、0.0312~2.00 μg、0.0312~2.00 μg、0.0062~0.40 μg和0.0062~0.40 μg内线性关系良好。精密度,重复性及加样回收均符合要求。结论 此方法快速简便,重现性好,可用于半枝莲饮片的质量控制。     

温运合剂对脾虚泄泻小鼠的肠道功能及肠道菌群的保护作用研究

目的探讨温运合剂对脾虚泄泻小鼠肠黏膜屏障的保护作用及对肠道菌群的调节作用。方法采用大黄水煎液制作小鼠脾虚泄泻模型,给予温运合剂进行治疗,观察小鼠的体质量、腹泻指数、肠道病理学检查变化情况,并测定肠内容物中短链脂肪酸的含量。结果温运合剂有明显止泻作用,可显著改善脾虚泄泻所致的体质量减少,减轻肠黏膜损伤,还可以显著提高脾虚泄泻小鼠的肠道短链脂肪酸含量。结论温运合剂可修复肠道黏膜,调节肠道微生态平衡,进而发挥其止泻作用。     

肠道菌群对中药糖苷类成分脱糖基代谢的研究进展

中药糖苷类成分是中药中一类重要的活性物质,其药理活性、药代动力学特征及体内存在是目前研究的热点.糖苷类成分在生物体内代谢转化途径主要是由肠道菌群介导的脱糖基代谢,生成苷元后更易吸收入血并发挥药效.该文基于肠道菌群在中药糖苷类成分体内代谢及药效发挥中的重要作用,综述了肠道菌群中代谢中药糖苷类成分的主要糖苷酶,产生糖苷酶的主要菌属,以及代表性糖苷类成分的脱糖基代谢途径.并针对肠道菌群对中药糖苷类成分代谢研究过程中存在的问题进行了初步探讨.     

UPLC-LTQ-Orbitrap质谱联用技术分析茯苓中的化学成分

目的采用快速液相色谱LTQ-Orbitrap质谱联用技术对茯苓95%乙醇提取物中的化学成分进行分析。方法色谱分离采用Thermo Hypersil Gold C18(3μm,150mm×2.1mm)色谱柱,以0.1%甲酸(A)-乙腈(B)梯度洗脱,质谱使用ESI离子源,负离子模式下采集数据。结果通过一级和二级质谱分析并结合质谱碎裂规律及特征碎片信息,并通过比对对照品数据及相关文献,从茯苓95%乙醇提取物中初步分析了42个化学成分。结论本方法分离度良好、灵敏度高,可用于茯苓中化学成分的定性分析,并有助于对茯苓进行进一步的活性成分研究和质量控制。     

5-氟尿嘧啶对正常小鼠脾虚证候的影响研究

目的研究化疗药物5-Fu对小鼠脾虚证候及肠内容物中短链脂肪酸含量的影响。方法正常小鼠腹腔注射5-Fu后统计小鼠摄食量、体质量、腹泻等数据,观察其脾虚证候表现,同时通过做HE染色,肠黏膜β-D-半乳糖苷酶活性等评价其胃肠道毒性,并检测肠内容物中短链脂肪酸的含量,探讨5-Fu对肠道菌群的影响。结果与正常组相比5-Fu引起小鼠摄食减少、体质量下降、腹泻指数增加,病理切片结果表明小肠绒毛变短,病变程度增加,血浆中TNF-α和IL-6含量增加,肠黏膜β-D-半乳糖苷酶活性降低,肠内容物中乙酸、丁酸、戊酸浓度显著降低。结论 5-Fu可致小鼠脾虚证候,对肠黏膜及肠道菌群损伤明显,提示在应用化疗药物5-Fu时,可联合应用健脾中药,减低其胃肠道毒副作用。     

半枝莲提取物中半枝莲碱A和半枝莲碱B大鼠体内药代动力学研究

目的?建立同时测定生物样品中半枝莲碱A和半枝莲碱B的LC-MS/MS分析方法,并对其药代动力学进行研究。方法?血浆样品采用乙酸乙酯萃取,BDS Hypersil C₁₈(50mm×2.1mm, 2.4μm)色谱柱进行梯度洗脱,柱温40℃,流动相为乙腈:0.05％甲酸水溶液,流速为0.25mL/min。电喷雾离子源,MRM模式。大鼠单剂量灌胃500mg/kg半枝莲提取物后,检测半枝莲碱A和半枝莲碱B的血药浓度,DAS软件对其血药浓度-时间曲线进行拟合,统计矩模型计算药动学参数。结果?半枝莲碱A和半枝莲碱B在0.512~258.0ng/mL和0.482~241.0ng/mL间线性关系良好（r2>0.994）;精密度、准确度、提取回收率和基质效应、稳定性均符合生物样品分析要求。半枝莲碱A和半枝莲碱B的AUC_(0-t)分别为(88.69±12.4)μg/L·h和(57.09±9.84)μg/L·h,达峰浓度分别为(10.22±1.31)ng/mL和(6.27±0.80)ng/mL。结论?该方法简便、准确、灵敏,可用于半枝莲提取物中半枝莲碱A和半枝莲碱B体内药代动力学研究。      

化疗致肠黏膜炎的病理机制及药物干预策略研究进展

肠黏膜炎是化疗过程中的一种常见不良反应,具有发生率高、危害大的特点,严重影响肿瘤患者的治疗及生活质量。研究表明化疗致肠黏膜炎的病理生理学机制复杂,目前药物可干预的环节较多,但疗效尚不确切。本文综述了化疗致肠黏膜炎的病因及可能机制,并对缓减化疗毒副作用的药物及其干预环节进行了总结概况。以期为该疾病的合理治疗及相关药物的开发提供参考。