BHA和β-ME对表观修饰后的NIH/3T3细胞向神经方向诱导的实验研究

目的通过联合应用表观修饰药物5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)和曲古抑菌素A(TrichstatinA,TSA)对NIH/3T3细胞进行重编程,应用β-羟基酸(betahydroxyacid,BHA)和β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)进一步诱导,以期表达与神经细胞密切相关的基因。方法应用流式细胞技术检测实验组(4.5μM5-aza-dC+0.35μMTSA+1mMβ-ME+200μMBHA作用后的NIH/3T3细胞)和对照组中NIH/3T3细胞的DNA甲基化水平。应用RT-PCR的方法检测Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4的表达,免疫细胞化学染色检测巢蛋白(nestin)和神经丝轻链(neurofilamentlightchain,NF-L)的表达情况。结果实验组NIH/3T3细胞DNA甲基化水平较对照组明显降低,细胞均呈现出Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4基因的阳性表达。经过BHA和β-ME诱导后,NIH/3T3细胞呈巢蛋白和神经丝轻链阳性。结论表观修饰后的细胞经诱导后可以呈现nestin和NF-L的阳性表达。     

表皮生长因子对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠卵母细胞体外成熟及受精的作用.方法 在体外成熟液中分别添加0、0.1、1、5、10ng/Mlegf,12h后检查成熟率,并观察EGF对体外受精的影响.结果 添加5ng/Ml和10ng/Mlegf组卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),并且5ng/Ml组的效果显著高于其他各组(P<0.05);比较培养液中添加以上浓度EGF对体外受精胚发育的影响,结果发现添加5ng/Ml EGF虽不能显著提高囊胚发育率(P>0.05),但可显著提高其通过二细胞阻滞率和囊胚孵化率(P<0.01).结论 EGF对小鼠卵母细胞体外成熟及受精有促进作用,可提高体外成熟率及囊胚孵化率,还可促进受精卵通过二细胞阻滞.     

临床外科医师腹腔镜培训模式的总结和讨论

随着科学技术的不断发展,腹腔镜技术现已成为现代医学十分重要的治疗手段,也是现代外科医生临床教学和培训非常关键的内容。国内的腹腔镜培训更多是采取“你教我学”这一传统外科开放手术的教学方式,但这种教学方式效果不佳,学员培养周期长。现如今很多教学医院已开始逐步摸索适用于初学者和住院医师的腹腔镜培训方案,如引用国外的教学培养体系,购买腹腔镜模拟练习器,教授学员腹腔镜理论和操作知识,组织学员于模拟箱中练习相关操作,组织考核并评估等。腹腔镜技术的培训绝非一朝一夕,不仅需要完善的、科学的教学体系,也需要师生之间良好的沟通,共同努力,共同进步,相互学习,同时对学员的心理建设也是培训的关键内容之一。学员在今后的临床实践中也不能停止学习,要不断吸纳最新的技术内容。文章将对临床外科医师的腹腔镜培训及相关模式的发展进行综述。     

基于临床路径管理培养研究生临床思维

实施临床路径管理可以促进研究生自主学习,培养其临床思维,为其早日适应临床工作奠定基础。     

曲古抑菌素A对核移植供体细胞组蛋白H3乙酰化水平的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对组蛋白H3乙酰化水平的影响,进而提高他们重编程的能力。方法用不同浓度的TSA处理胎儿成纤维细胞,应用免疫荧光和WesternBlot方法对细胞乙酰化水平进行量化分析。结果0.5nM,5nM,50nM和100nM浓度的TSA均引起供体成纤维细胞形态学的变化,对供体成纤维细胞组蛋白H3乙酰化有明显的剂量效应,随着TSA浓度增加,组蛋白H3乙酰化水平逐渐增加,在TSA浓度5nM时比0.5nM增加尤为明显。结论TSA能够提高胎儿成纤维细胞组蛋白H3乙酰化水平,提高核移植重编程的能力。     

5-aza-dC和TSA对NIH/3T3细胞多能性基因表达作用的实验研究

目的本实验通过联合应用甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)和去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichstatin A,TSA)对NIH/3T3胎鼠成纤维细胞进行DNA去甲基化重编程,以期使其表达与多向分化潜能性密切相关的基因。方法药物处理组与正常对照组NIH/3T3细胞的形态学观察。流式细胞技术检测药物处理前后NIH/3T3细胞的DNA甲基化水平。应用RT-PCR的方法检测多能性基因Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4的表达情况。结果经过药物处理后的NIH/3T3细胞与对照组的细胞比较,从细胞形态来观察,没有明显的区别,均呈现成纤维细胞的外观。药物处理组的DNA甲基化水平较对照组明显降低。药物处理后细胞均呈现出Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4基因的阳性表达。结论 5-aza-dC和TSA对NIH/3T3细胞进行表观重编程,可以使重编程后的体细胞中呈现与多向分化潜能基因的阳性表达。     

F9细胞的培养和全细胞抽提物获取方法的比较

目的对F9小鼠畸胎瘤细胞进行培养,探索理想的获取全细胞抽提物的方法。方法应用蛋白质抽提试剂盒、反复冻融循环和超声波裂解法进行F9全细胞抽提物的获取。结果通过蛋白质抽提试剂盒和反复细胞冻融循环的方法所获取的细胞抽提物渗透压和浓度偏低,而选用超声波裂解法所获取的细胞抽提物,无论从pH,渗透压,还是蛋白浓度方面分析均与理想值接近。结论选择超声波裂解法作为获取F9小鼠畸胎瘤全细胞抽提物的理想方法 。     

抗氧化剂对小鼠体外受精胚胎发育的影响

目的为了完善小鼠早期胚胎体外培养体系,探讨抗氧化剂维生素E、维生素C及槲皮素对体外授精胚胎发育的影响。方法以CZB为基础培养液,添加100μmol/L维生素E、200μmol/L维生素C和0.5μmol/L槲皮素作为实验组,对比各组胚胎发育到四细胞至囊胚各个不同阶段的发育率。结果实验组二细胞-四细胞发育率都高于对照组,其中以添加0.5μmol/L槲皮素组发育率为最高,然而维生素E、维生素C及槲皮素各组之间差异不显著。同样实验组二细胞-八细胞发育率也高于对照,以添加100μmol/L维生素E组发育率为最高,与其他各组相比,差异也无显著性。实验组二细胞-囊胚发育率高于对照,以添加200μmol/L维生素C组发育到囊胚率最高,维生素E、维生素C及槲皮素各组之间相比,差异极显著。故以添加200μmol/L维生素C对胚胎发育有明显的促进作用。结论3种抗氧化剂中,以200μmol/L维生素C对体外受精胚胎的促进作用最为明显,能得到较高的囊胚率。