甲型H1N1流感病毒基因组序列分析及其特性研究

Objective To analyse the genome of influenza A (H1N1) vires so as to elucidate its molecular characteristics and evolution status. Methods DNA sequences of the influenza viruses were collected from NCBI, and compared with the genomes of referenced intluenza viruses. The phylogenetic trees were constructed by the neighbor-joining method, and the pathogenicity, drug susceptibility and vaccine protection were analyzed. Results Phyiogenetic analysis showed that the genes encoding HA, PB2, PBI, PA, NP, and NS protein were most closely related to those influenza A viruses circulating in swine populations in North America. NA and M gene belonged to Eurasia lineages swine influenza vires. The amino acid sequence of the cleavage site between HA1 and HA2 was PARSSR ↓ GLFGAI with the typical characteristics of the low pathogenic influenza virus. Influenza A(H1N1) virus can spread from person-to-person. It is sensitive to oseltamivir and zanamivir but resistant to amantadine and remantadine. The current human seasonal influenzavaccines confered little protection against influenza A/H1N1 because of the great diversity on antigenic domains between A/H1N1 virus and vaccine virus. Conclusions Influenza A(H1N1) virus is a reassortant virus of North America and Eurasia hneages swine influenza virus. It is important to develop a vaccine against the currently circulating virus strain to control the disease spread.     

改进型反向基因操作系统的构建和流感病毒变异株的选育

目的构建一个新型的反向基因操作系统,并利用该技术获得流感病毒变异株。方法用分子生物学方法把表达蛋白载体(pQBI50_BFP_fA1)和转录基因载体(pHH21)两个载体有机地整合,构建出既能表达病毒蛋白又能转录基因的单一载体(pPol_Ⅱ/Ⅰ);同时通过RT_PCR提取A/Ann Arbor/6/60病毒的cDNA,然后把8个病毒基因分别克隆到pPol_Ⅱ/Ⅰ载体;通过点变异和基因删除方法对M和NS基因进行改进;用细胞培养和细胞免疫染色法测定重组病毒的生物特征。结果成功构建了由8个小质粒组成的转染细胞能力较强的一个新型反向基因操作系统。同时在M和NS基因上加以分子生物学的改进,并获得2个对温度敏感和增殖力低的新毒株。结论一个改进型反向基因操作系统被成功建立,且利用这个系统拯救出2个流感变异株。这个系统不仅在流感病毒的分子基础研究而且将在减毒性活疫苗的研发上发挥重要作用。这2个流感变异株作为减毒性活疫苗的候选株具有较好的开发前景。     

流感病毒血凝素茎部螺旋区和串联重复M2蛋白胞外区域融合蛋白的免疫效果研究

目的探索含有流感病毒血凝素茎部α螺旋区(HAα)和6个串联重复M2蛋白胞外区域(6M2e)的融合蛋白的表达和制备方法, 并对其在小鼠体内的免疫效果进行评价。方法采用去除高变区的鞭毛蛋白序列, 将HAα和6M2e插入到原高变区位点, 构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e。在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化和鉴定, 并评估其细胞毒性。最后将制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体效价, 实时荧光PCR法检测小鼠IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-ɑ的mRNA水平, CCK-8法检测脾细胞的增殖。结果成功构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e, 蛋白表达最适条件为1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)37 ℃诱导10 h, 通过镍柱纯化获得高纯度的无毒融合蛋白。免疫小鼠后抗M2e-IgG和抗HAα-IgG的抗体ELISA效价均达到1∶102 400, 且与对照组相比差异有统计学意义(t=0.33, P=0.774;t=7.60, P=0.001)。各类细胞因子的mRNA水平升...     

肠道病毒71型检测方法研究概况

肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病(HFMD)的重要病原,已在世界范围内引起了多次大流行,并导致了严重的并发症和后遗症,甚至死亡,引起了人们越来越多的关注.此文就EV71的基本特征和检测方法研究概况作了介绍.     

鸽子对流感病毒的易感性和传播性研究

目的 探讨鸽子对流感病毒的易感性和传播性.方法 通过数据统计、动物感染实验、血液凝集试验、原位组织植物凝集素结合试验、原位组织病毒结合实验、组织细胞糖链受体提取及其病毒结合试验等,从多方面开展鸽子对流感病毒的易感性和传播性的研究.结果 流行病学调查和动物感染实验证实鸽子传播流感病毒可能性极少,原位组织植物凝集素结合试验和原位组织病毒结合实验确定了病毒感染部位是鸽子的肠道上皮黏膜细胞,植物凝集素结合试验的结果提示鸽子组织细胞带有不适合流感病毒唾液酸酶作用的糖链,组织细胞糖链受体提取物的病毒结合试验已发现有病毒结合带,根据病毒结合实验也发现鸽子仅对禽类流感病毒敏感.结论 鸽子能被禽流感病毒感染,但不会被人流感病毒感染,鸽子不会传播流感病毒.     

甲型H1N1流感病毒基因组序列分析及其特性研究

目的 分析甲型H1N1流感病毒的基因组序列特征,阐明该毒株的遗传变异及分子特性.方法 GenBank中获取流感病毒全序列,对各段基因与已知序列进行分析比较,绘制进化树,并分析和预测甲型毒株的致病性、药物敏感性和现有疫苗的预防保护作用.结果 甲型H1N1病毒的HA、PB2、PB1、PA、NP、NS基因与美国本土的猪流感病毒序列具有高度同源性,NA和M基因具有典型的欧亚株系猪流感病毒特征.该病毒具有人传人的分子基础,HA上HA1和HA2裂解位点序列为PSIQSR↓+GLFGAI,尚不具备高致病性流感病毒的特征.病毒对金刚烷胺类药物耐药,而对达菲和扎那米韦敏感.HA片段5个抗原决定区氨基酸序列与人用流感疫苗具有较大差异,推测现有疫苗对预防本次疫情基本无效.结论 甲型H1N1是一种北美和欧亚两种猪流感病毒的混合体,开发针对本病毒的流感疫苗有助于进一步控制疫情蔓延.     

携带肠道病毒71型中和线性表位重组流感病毒的构建

目的 获得能够携带肠道病毒71型(EV71)中和线性表位的重组流感病毒.方法 通过PCR方法,在流感病毒HA基因中插入EV71中和线性表位序列,获得重组质粒;进行反向遗传学操作,构建重组流感病毒.结果 获得了2个重组质粒pPolⅠ/Ⅱ/WSN-HA-SP55和pPolⅠ/Ⅱ/WSN- HA-SP70,并构建了能够分别携带EV71中和线性表位SP55和SP70的2株重组流感病毒,重组病毒3次传代血凝效价都保持在27和25HAU,具有较好的稳定性.结论 通过反向遗传学操作,构建出携带EV71中和线性表位的重组流感病毒,为研制预防手足口病重组流感病毒载体疫苗奠定基础.     

转感性流感病毒载体的研究现状和应用前景

所有人几乎在一生中要受到数次甚至数百次流感病毒的袭击,因此流感病毒常常使人恐慌。然而,人们通过逆遗传技术可以改变它的性质,制造出有利于人类的特殊的流感病毒,即转感性流感病毒。本文综述了转感性流感病毒载体的研究现状和应用前景。     

流感病毒介导的抗肿瘤研究进展

随着反向遗传技术的不断完善,流感病毒的改造和利用成为可能.流感病毒具有强传染性,将其改造成携带外源基因的流感病毒载体,有利于转染到目的细胞,特别是肿瘤细胞,为肿瘤基因治疗提供新的手段.同时,由于流感病毒对肿瘤细胞具有凋亡作用,有望将其开发成为肿瘤疫苗及具有基因递送作用的病毒载体用于肿瘤基因治疗.本文就流感病毒的溶瘤作用,流感病毒载体的抗肿瘤及其肿瘤靶向性这几方面的研究做一综述.     

鸡贫血病毒vp3基因的克隆和分子特征

目的 获得来源于浙江地区鸡组织中的鸡贫血病毒(CA)vp3基因并分析其变异情况.方法 根据GenBank登录的vp3序列设计特异引物,利用PCR方法从鸡组织中获得7个CAV的vp3基因克隆,将其克隆到载体进行测序.结果 40份鸡血清中共检出CAV阳性16份,阳性率40.0％.序列测定结果表明,vp3基因长366 bp,...