乌骨藤C21甾体苷对唾液腺腺样囊性癌荷瘤小鼠的抑制作用及机制研究

目的探讨乌骨藤C_(21)甾体苷对唾液腺腺样囊性癌荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及机制。方法建立SACC-83细胞和SACC-LM细胞荷瘤模型鼠,给药组C_(21)甾体苷(10mg·kg-1·d-1)连续注射4周,模型组注射等量生理盐水,30天后取材。称瘤重,计算抑瘤率,各组裸鼠肿瘤、癌旁组织和肺组织HE染色观察病理改变,Western blot和qPCR分别检测C_(21)甾体苷对各组瘤体组织caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白和mRNA表达影响。结果 C_(21)甾体苷给药4周后,SACC-83 C_(21)甾体苷组的肿瘤体积与SACC-83模型组相比明显减小[(232.6±32.8)mm~3比(317.7±58.6)mm~3,P0.05],抑瘤率为26.8%;SACC-LM C_(21)甾体苷组的肿瘤体积与SACC-LM模型组相比明显减小[(296.5±38.8)mm~3比(394.1±28.9)mm~3,P0.05],抑瘤率为24.8%。病理学结果显示,C_(21)甾体苷药物治疗后能抑制肿瘤的增殖和转移。Western blot结果显示,对于Bcl-2的蛋白水平,SACC-83 C_(21)甾体苷组和SACC-LM C_(21)甾体苷组相较于各自的模型组均显著下调且差异显著[(0.563±0.072)比(1.000±0.069),P0.01;(0.664±0.061)比(1.155±0.071),P0.01];对于Bax和caspases-3的蛋白水平,SACC-83 C_(21)甾体苷组和SACC-LM C_(21)甾体苷组相较于各自的模型组均显著上调且差异显著[Bax:(1.969±0.181)比(1.000±0.072),P0.01;(1.521±0.120)比(0.844±0.062),P 0.01;caspases-3:(3.028±0.256)比(1.000±0.093),P0.01;(1.934±0.188)比(0.890±0.036),P0.01]。qPCR结果同样表明C_(21)甾体苷治疗后能显著抑制Bcl-2 mRNA表达水平[(0.563±0.014)比(1.002±0.072),P0.01;(0.649±0.065)比(1.172±0.133),P0.01],上调Bax和caspases-3的mRNA表达水平[Bax:(1.660±0.227)比(1.005±0.122),P 0.01;(1.313±0.115)比(0.817±0.071),P 0.01;caspases-3:(2.604±0.174)比(1.001±0.0403),P0.01;(1.746±0.080)比(0.886±0.087),P0.01]。结论乌骨藤C_(21)甾体苷可抑制唾液腺腺样囊性癌在裸鼠体内的增殖,其机制可能是通过促进细胞凋亡而发挥对肿瘤的抑制作用。     

乌骨藤中C21甾体苷诱导SACC-83和SACC-LM细胞凋亡的作用及其机制研究

目的 研究乌骨藤提取物C₂₁甾体苷对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinomacv,SACC）低侵袭细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma-83,SACC-83）和肺高转移细胞株（SACC-LM）增殖抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法 用不同浓度（5,10,20,40,60,80,100 μmol·L^-1） C₂₁甾体苷处理SACC-83和SACC-LM细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,并计算药物的IC₂₀和IC₅₀;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测SACC-83及SACC-LM细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测SACC-83和SACC-LM细胞Bcl-2、Bax、caspase 3的mRNA和蛋白的表达。结果 不同浓度的C₂₁甾体苷降低SACC-83和SACC-LM细胞活力,抑制细胞增殖,并且作用于SACC-83细胞C₂₁甾体苷的IC₂₀浓度为7.49 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为38.34 μmol·L^-1;作用于SACC-LM细胞的C₂₁甾体苷IC₂₀浓度为9.30 μmol·L^-1,IC₅₀浓度为46.04 μmol·L^-1;细胞克隆集落形成明显减少。C₂₁甾体苷IC₂₀浓度分别促进SACC-83及SACC-LM细胞凋亡,且随着给药时间延长,凋亡率增加,具有显著性差异（P<0.05,P<0.01）。经7.49,9.30 μmol·L^-1 C₂₁甾体苷分别处理SACC-83及SACC-LM细胞后,Bcl-2的mRNA及蛋白水平显著降低（P<0.01）,而Bax、Caspase 3的mRNA和蛋白水平显著升高（P<0.05）。结论 乌骨藤C₂₁甾体苷抑制SACC-83及SACC-LM细胞增殖、促进凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2、Bax和Caspase 3表达有关。