联合免疫抑制和放疗治疗甲状腺眼病的临床效果观察

目的:探讨联合免疫抑制和放疗治疗甲状腺眼病(TAO)的临床效果。方法:选择2015年1月～2018年3月于我院就诊的94例中重度TAO患者作为研究对象,采用随机数字表法结合患者意愿将患者分为免疫组(n=47例)和联合组(n=47例)。免疫组给予甲泼尼龙联合环磷酰胺冲击疗法,联合组在免疫组的基础上给予放射治疗。观察2组入组时、第4周及第24周时突眼度、眼睑裂宽度和甲状腺体积,比较两组患者治疗前、治疗24周免疫功能,评价临床治疗效果、相关不良反应发生率。结果:第24周2组时突眼度、睑裂高度、甲状腺体积、CAS评分、视力与治疗前相比较均显著降低(P0.05)。2组第4周时突眼度、睑裂高度、甲状腺体积、CAS评分、视力相比较差异均无统计学意义(P0.05);联合组第24周时突眼度、睑裂高度、CAS评分低于免疫组,视力水平高于免疫组,差异有统计学意义(P0.05),2组第24周时甲状腺体积相比较差异无统计学意义(P0.05)。联合组临床有效率高于免疫组,差异有统计学意义(P0.05)。两组治疗前CD3~+、CD4~+、CD8~+及CD4~+/CD8~+水平比较差异均无统计学意义(P0.05);治疗24周,免疫组CD3~+、CD4~+、CD8~+及CD4~+/CD8~+显著低于治疗前,且低于联合组治疗24周,差异有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗24周期间恶心呕吐、皮疹、头晕、肝功损伤、肾功损伤发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:免疫抑制联合放疗可增加TAO的临床疗效,值得进一步研究探讨。     

人脂肪间充质干细胞体外高效扩增新方法

目的 运用低强度脉冲场超声(LIPUS)刺激促进人脂肪间充质干细胞(hASCs)增殖,为临床干细胞体外高效增殖提供新方法.方法 通过LIPUS体外刺激hASCs细胞生长,采用Scepter 2.0手持细胞计数器进行细胞计数,运用荧光倒置显微镜观察细胞形态,运用流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行干细胞临床前质量检测.结果 刺激组50 mW/cm2和60 mW/cm2的LIPUS刺激强度均能促进细胞增殖,60 mW/cm2强度更显著,与对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞倍增时间比对照组缩短,差异具有统计学意义(P<0.05),刺激后刺激组细胞表面标志物无变化,增殖后干细胞质量检测符合标准要求.结论 LIPUS刺激可促进hASCs有效增殖,低强度脉冲场超声可作为干细胞体外扩增的新方法.     

近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性

目的：建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ASCs)体外分离培养和鉴定方法。方法：选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g,采用0.1% I型胶原酶消化组织,获得ILMW-ASCs,并进行体外培养和增殖;取第3,5,8,13代细胞进行如下实验：测量细胞大小,观察细胞形态,检测细胞表型、细胞周期、细胞凋亡,并进行细胞诱导分化和绘制细胞增殖曲线。结果：体外分离培养的ILMW-ASCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞培养 36 h出现贴壁,第5天进入对数增殖期,约7 d后80%的细胞汇合。 ILMW-ASCs细胞直径及体积分别为(17.00±0.54) μm和(2.58±0.24)×10–9 L。细胞表面抗原CD29,CD44和CD90呈高表达,不同代数之间的差异不明显(均P>0.05);CD45,CD8a和HLA-DR呈低表达,与第3代相比,随着代数的增加细胞表面抗原的阳性率逐渐增高(均P<0.05)。ILMW-ASCs成脂诱导结果为油红O染色呈阳性;ILMW-ASCs成骨诱导结果为茜素红染色呈阳性。ILMW-ASCs的第13代细胞出现凋亡和衰老,与较低培养代数相比细胞周期S期的比例下降(均P<0.05)。结论：ILMW-ASCs取材方便,贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后能保持稳定的生物学特性,是猪来源ASCs的最佳选择之一,可为大动物疾病模型和组织器官修复的细胞治疗提供候选干细胞来源。     

低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞增殖及抗癌活性的实验研究

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL)增殖和抗肿瘤效应的影响。方法采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;将LIUPS强度0设为对照组,10 mW/cm^2组、20 mW/cm^2组、30 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组为刺激组刺激HPBL增殖,每天一次,每次刺激10 min,连续刺激2 d。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测抗肿瘤因子[γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]表达情况;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌95D细胞检测其抗肿瘤活性。结果 LIPUS刺激HPBL2 d共2次后,30 mW/cm^2组的细胞增殖能力增强,与对照组和其他强度刺激组比较,细胞数量和细胞团块数量均增多。CCK-8检测结果显示,30 mW/cm^2组光密度值与对照组、20 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组比较差异均有统计学意义(P=0.032、0.027、0.027、0.001)。抗肿瘤因子检测显示,30 mW/cm^2组INF-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF分别为(39.66±8.30)ng/L、(619.84±125.94)ρg/ml、(461.29±14.08)ng/L、(108.11±2.07)ng/L,均高于对照组[(24.40±6.84)ng/L、(279.56±128.18)ρg/ml、(417.17±21.44)ng/L和(96.53±1.56)ng/L]和50 mW/cm^2组[(16.52±0.87)ng/L、(141.00±93.71)ρg/ml、(171.96±9.46)ng/L、(72.56±8.95)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01)。共培养实验显示,30 mW/cm^2组人肺巨细胞癌95D细胞杀伤率为51.11%±5.21%,显著高于对照组(42.86%±0.55%)和50 mW/cm^2组(42.00%±3.67%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LIPUS刺激可提高HPBL的增殖活性和杀伤率。     

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶在系统性红斑狼疮患者肾组织中的表达及临床意义

目的 探讨活化诱导的胞嘧啶核苷脱氨酶（AICDA）在系统性红斑狼疮（SLE）患者肾组织中的表达及临床意义。方法 收集2013年3月至2017年6月于中南大学湘雅医学院附属海口医院就诊的73例SLE患者和36例原发性膜性肾病（Ⅱ期）患者（对照组）肾穿刺活组织检查的肾组织,利用免疫组织化学染色方法检测肾组织中AICDA的表达水平。分析AICDA的表达与SLE患者临床病理参数（病理分型、系统受累情况、疾病活动度评分、治疗转归）的关系。结果 SLE患者肾组织中AICDA的表达水平高于原发性膜性肾病患者,差异有统计学意义（6.12±2.47 vs 3.33±1.91,P<0.05）。Ⅲ型（5.25±4.06）、Ⅳ型（6.88±2.20）、Ⅴ型（6.10±1.66）、Ⅲ+Ⅴ型（5.75±2.34）、Ⅳ+Ⅴ型（5.72±2.37）狼疮性肾炎患者间AICDA的表达水平差异无统计学意义（P均>0.05）。有口腔溃疡、间质性肺炎、神经系统损害、关节炎、血液系统损害和浆膜炎SLE患者肾组织中AICDA的表达水平分别高于无上述系统损害者（7.02±2.14 vs 4.17±1.97,7.86±2.39 vs 4.98±1.76,9.83±1.34 vs 5.39±1.92,6.88±2.04 vs 2.93±1.21,7.51±1.81 vs 3.70±1.23,7.29±2.33 vs 5.34±2.29;P均<0.01）。SLE疾病活动度评分越高,AICDA的表达越强,组间差异有统计学意义（P<0.01）。SLE完全缓解患者肾组织中AICDA表达低于未完全缓解患者,但差异无统计学意义（5.84±2.39 vs 6.80±2.56,P>0.05）。结论 AICDA与SLE的发生和发展有关,有望为SLE的治疗带来新的靶点。     

低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞的增殖及抗癌活性

目的：本研究我们为了探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL) 增殖和抗肿瘤效应的影响。方法：采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;采用强度为0-80 mW/cm_²的LIUPS刺激HPBL增殖;CCK-8法检测细胞增殖活性;ELISA法检测抗肿瘤因子(γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))在培养基上清中的表达;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌细胞(95D)检测其抗肿瘤活性。结果：与对照组(0 mW/cm_²)相比,LIPUS刺激组(30 mW/cm_²)每天刺激10 min,刺激2d后HPBL细胞增殖增强(P<0.01)。抗肿瘤因子刺激组INF-γ(39.66ng/L±8.30)、IL-2(619.84 pg/mL ± 125.94)、TNF-α(461.29 ng/L ± 14.08)和GM-CSF (108.11 ng/L ± 2.07),分别大于对照组(24.40ng/L±6.84)、(279.56 pg/mL ± 128.18)、(417.17 ng/ ± 21.44)和(96.53 ng/L ± 1.56);共培养实验显示,30 mW/cm_²组肺癌杀伤率为51.11%±5.21,对照组为42.86%±0.55。结论：LIPUS刺激后可提高HPBLs的增殖活性和杀伤率。本研究结果可能对LIPUS联合淋巴细胞治疗肿瘤具有较大的治疗潜力和依据。