骨髓间充质干细胞移植后在mdx鼠体内的分布研究

目的： 研究骨髓间质干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)后体内各主要器官的分布状况。方法: 取第5代SD大鼠骨髓间质干细胞，应用［3H］－TdR标记后以2×107cells／只细胞尾静脉移植到经7Gy γ射线预处理后的7-9周龄mdx鼠体内，分别于移植后24 h、48 h、4周、8周和16周测定血液、肺、肝、骨髓、骨骼肌及心肌的放射性分布计数。结果: 经7Gy γ射线放疗预处理的mdx鼠，在尾静脉移植骨髓干细胞后，24 h肺的放射性分布计数最高，为36.70±3.04；48 h肝的放射性分布计数最高，为36.74±3.28；骨髓分布计数随移植时间延长增多，2周时达到高峰，计数为38.43±4.99，以后逐渐下降，但4月时仍明显高于其它组织器官，计数为13.45±1.37；骨骼肌、心肌的放射性分布计数随移植时间延长明显增高，16周时分别达到4.79±0.94和9.55±1.53。结论: 在MSCs移植后早期，MSCs主要分布于肺、肝等血流丰富的器官，随移植时间延长逐渐归巢到骨髓定居，2周时达到高峰，此后逐渐向损伤器官如骨骼肌、心肌等定向迁移，并且随时间延长分布增加，从而为MSCs定居于肌组织并且分化为肌细胞提供了证据。     

建立Duchenne型肌营养不良鼠的骨髓移植模型

【目的】建立Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)的骨髓移植模型,摸索有效的放疗剂量。【方法】用体外培养的不同数量的C57BL/6雄鼠的骨髓细胞、骨髓基质细胞、骨髓悬浮细胞,用不同方法移植给不同剂量放疗后的mdx鼠,观察受体鼠的存活率及存活时间,并对死亡鼠作GVHD(移植物抗宿主病)的病理学检测。【结果】16只mdx鼠移植前3d12Gyγ射线照射,在移植后7d内全部死亡,且注射细胞数较多者,存活时间相对较长;8只经6Gyγ射线照射的mdx鼠,移植后60d,存活4只,其中1例经腹腔注射骨髓细胞、1例肌肉局部注射骨髓细胞,移植后7d内死亡;而8Gyγ射线照射的14只mdx鼠,移植后60d10例存活,4例死亡。【结论】本实验条件下,移植前8Gyγ射线放疗较合理,在有效剂量放疗破坏受体骨髓造血系统后,静脉注射移植同种鼠的骨髓细胞、基质细胞、悬浮细胞,mdx鼠存活率较高,且移植细胞数量以1×10     

经颅磁刺激运动诱发电位在肌萎缩侧索硬化中的应用

目的：探讨经颅磁刺激运动诱发电位（TMS—MEP）在肌萎缩侧索硬化（ALS）患者上运动神经元损害评价中的作用。方法：对符合E1 Escorial诊断标准的20例ALS患者（ALS组）和15名健康对照者（健康对照组）进行双小指展肌、胫前肌TMS-MEP测定。运动诱发电位（MEP）中枢性损害的判断标准为中枢运动传导时间（CMCT）延长、安静状态双侧皮层刺激MEP未引出或易化状态至少一侧皮层刺激MEP未引出;CMCT侧间差增大为可疑异常。对两组患者的MEP中枢异常进行比较。结果：ALS患者小指展肌易化状态、安静状态CMCT、胫前肌易化状态CMCT与对照组比较显著延长。ALS患者TMS—MEP中枢性损害的出现率为60％,主要表现为CMCT延长和MEP引不出,分别占50％（10／20）和50％（10／20）,如将CMCT侧间差增大者计入,则总异常率提高到75％。按诊断级别分组后,临床确诊、拟诊和可能的ALS患者的MEP中枢性损害出现率分别为87．5％、71．4％和60．0％,单纯CMCT侧间差增大而无其他异常,仅见于拟诊或可能的ALS患者。结论：对于拟诊或可能的ALS,MEP中枢性异常可以帮助确立上运动神经元受累。单纯CMCT侧间差增大可能发生于早期患者,有助于发现轻度或亚临床上运动神经元病损。     

骨髓间质干细胞体外增殖及诱导分化成肌样细胞实验研究

目的比较SD大鼠、Wistar大鼠和C57BL/6J小鼠骨髓间质干细胞在体外的增殖及在体外将骨髓间质干细胞诱导分化成肌样细胞的情况。方法体外分离成年SD大鼠、Wistar大鼠和C57BL/6J小鼠的骨髓干细胞,培养增殖,用5-氮杂胞苷诱导分化,使其向肌细胞定向分化。结果SD大鼠和Wistar大鼠的原代骨髓间质干细胞约10 d可达90%以上融合,平均3 d左右传代,C57BL/6J小鼠的骨髓间质干细胞在1周内可迅速增殖,1周后基本处于停滞状态,且细胞集落很少,难传代。SD大鼠的骨髓间质干细胞在含5-氮杂胞苷、两性霉素B和5%马血清的分化培养基作用下,可以分化为肌肉特异性抗原desmin和-αsarcomeric actin染色阳性反应的肌样细胞。结论不同种系的骨髓干细胞在体外用相同的培养基培养,可以具有截然不同的增殖能力;5-氮杂胞苷可以促使骨髓干细胞定向分化为肌样细胞。     

原发性低颅压的诊治和护理

目的探讨原发性低颅压的诊治和护理策略。方法应用同位素脑池造影和脊髓造影后CT薄层扫描确定脑脊液漏口的位置,然后在相应阶段进行硬膜外血液修补治疗,并进行随诊观察。结果同位素脑池造影没有发现脑脊液漏的直接征象,但放射性核素过早在膀胱内出现,并难以升达枕大孔和基底池到达脑部,显示有脑脊液漏的间接征象;脊髓造影后进行CT薄层扫描显示脑脊液漏发生在T4阶段,17ml自体血注人病人的硬膜外腔,3d后病人症状缓解,临床治愈。结论同位素脑池造影能够提供脊髓脑脊液漏的间接证据,脊髓造影后CT薄层扫描能够准确的确定脑脊液的漏口位置,硬膜外血液修补是治疗该病最为有效的方法。     

DMD患者脐带血干细胞移植中的HLA配型

[目的]了解假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)患者接受脐血干细胞移植中HLA-A B DR不相合几率.[方法]用PCR反向序列特异性寡核苷酸(polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术,在对30例DMD患者进行HLA-A B OR基因分开的基础上,将其与广东脐血库中的668份脐血干细胞HLA配型分析比较.[结果]13%(4/30)例患者找到HLA抗原全相合并满足移植细胞数要求的脐血干细胞;50%(15/30)例患者找到HLA抗原1个不相合并满足细胞数要求的剂血干细胞;20%(6/30)例患者找到HLA抗原0～1个不相合且细胞数达要求的2倍以上脐血干细胞.[结论]DMD患者寻找到合适的脐带血干细胞的几率较高,有利于对此病进行临床脐血干细胞移植.     

肌萎缩侧索硬化症的诊断及病因分析(附238例病例报告)

目的探讨肌萎缩侧索硬化症(ALS)的诊断和发病机制.方法回顾性分析238例肌萎缩侧索硬化症的一般状况、临床表现、既往史、家族史以及实验室检查.结果本组患者均出现上下运动神经元损害的表现,肯定ALS为143例,拟诊ALS81例,可能ALS为14例.结论ALS的病因尚未明确.临床症状、体征以及肌电图是诊断的依据.     

MTHFR基因多态性和酗酒与缺血性脑卒中的相关性

目的探讨N^5,N^10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因多态性和酗酒与缺血性脑卒中（IS）发病风险的关系。方法应用聚合酶链反应（PCR）和变性高效液相色谱（DHPLC）技术筛查454例IS患者（病例组）和334例非IS患者（对照组）的MTHFR基因的多态分布，采用非条件Logistic回归模型分析基因型、酗酒情况与缺血性脑卒中发病风险的关系。结果酗酒群体的T等位基因的频率显著性升高（P〈0．05），患缺血性脑卒中的相对危险度为2．633；而携带有CC基因型则为0．360。相反，非酗酒群体的MTHFR基因的各基因型和等位基因频率的分布与对照组相比，均无显著性差异（P〉0．10）。结论携带T等位基因的酗酒群体容易患缺血性脑卒中，但携带C等位基因的酗酒群体不容易患缺血性脑卒中，MTHFR基因与酗酒在缺血性脑卒中的发病过程中存在协同作用。