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1.
2.
目的 探讨含DEAD框解旋酶41 (DDX41)基因对乙型肝炎病毒(HBV)复制能力的影响及其作用机制.方法 通过慢病毒包装将稳定过表达DDX41或特异敲低DDX41的短发卡RNA (shRNA)重组质粒转染至HepG2.2.15细胞系,筛选和建立稳定过表达或敲低DDX41的细胞株;通过CRISPR-Cas9技术构建敲除DDX41的HepG2.2.15细胞株;蛋白免疫印迹法检测DDX41蛋白表达水平以及通路验证;酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)表达水平;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测HBV复制相关DNA、RNA以及干扰素mRNA表达水平;Noahern印迹法检测HBV总RNA.结果 过表达DDX41可显著抑制HepG2.2.15细胞系中HBV的复制;而敲低或敲除DDX41可显著促进HepG2.2.15细胞系中HBV的复制.过表达DDX41可显著促进干扰素调节因子3(IRF3)的磷酸化和干扰素β(IFN-β)的表达;而敲低或敲除DDX41可显著抑制IRF3的磷酸化和IFN-β的表达.结论 在肝癌细胞系HepG2.2.15中,DDX41蛋白通过促进IRF3的磷酸化并诱导干扰素β的表达,进而发挥抑制HBV复制的功能. 相似文献
3.
目的 探讨消皮素E(GSDME)介导的细胞焦亡参与辐射诱导的肠损伤分子机制及消皮素(GSDM)蛋白家族是否通过通用的信号通路调控细胞焦亡。方法 利用人正常结肠上皮NCM460细胞和人结肠癌HT-29细胞辐射不同剂量及辐射后不同时间,通过观察焦亡小泡、细胞存活、焦亡执行蛋白的切割进行焦亡指标的检测,对HT-29细胞过表达GSDME并辐射后通过RNA测序技术,对焦亡相关差异基因进行富集分析,筛选相关通路差异基因进行验证。结果 辐射诱导NCM460细胞发生显著的细胞焦亡,HT-29细胞过表达GSDME后辐射诱导GSDME激活发生显著的细胞焦亡。成功模拟人肠细胞焦亡状态,过表达GSDME-N和GSDMD-N具有超过50%的焦亡状态下的差异基因;测序分析显示,焦亡状态下的基因主要富集在免疫反应、炎症反应和Rap1信号通路等。结论 GSDME激活介导了辐射诱导肠细胞焦亡的发生,GSDM蛋白家族通过通用的调控模式参与细胞焦亡,辐射通过免疫反应、炎症反应和Rap1信号通路诱导GSDME/D激活调控细胞焦亡。 相似文献
4.
目的 研究对髋臼骨折后继发创伤性髋关节炎患者进行全髋关节置换术治疗的中远期效果。方法 选择2020年2月至2022年3月东部战区总医院秦淮医疗区收治的150例髋臼骨折内固定术后继发创伤性髋关节炎患者的临床资料,根据治疗方式不同分为对照组65例(采用保守治疗)和观察组85例(采用全髋关节置换术治疗)。随访1年,评估治疗前、术后3个月、术后1年的Harris髋关节功能评分,比较两组并发症发生率。结果 治疗前,两组患者Harris评分差异无显著性(P>0.05);治疗3个月及1年后,观察组Harris评分均高于对照组,差异有显著性(P<0.05);随访1年后,观察组优良率高于对照组,并发症发生率低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论 对髋臼骨折后继发创伤性髋关节炎患者进行全髋关节置换术治疗,可显著提高髋关节功能评分,改善髋关节功能,降低并发症发生率。 相似文献
5.
为了探讨端粒酶催化亚基(hTERT)启动子调控抑瘤素(oncostatin M,osm)基因在端粒酶表达阳性的瘤细胞中的特异性及对瘤细胞和正常细胞增殖的影响,构建了phTERTosm表达载体,分别转染瘤细胞和正常细胞,用MTT法检测osm基因表达对瘤细胞和正常细胞增殖的影响。结果表明,hTERT启动子调控osm基因对端粒酶表达阳性瘤细胞HepG2、HeLa、Glc和A549的增殖有明显的抑制作用,抑制率为12.4%~46%;而对端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞没有明显的影响,提示hTERT启动子能明显限制osm的毒性作用仅在端粒酶阳性表达的瘤细胞中,而对端粒酶表达阴性细胞则无抑制作用。 相似文献
6.
端粒酶催化亚基脱氧核酶抑制A549/DDP耐药细胞生长的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
背景与目的 端粒酶在多种肿瘤中均有表达,并且可能参与肿瘤耐药。本研究的目的是观察端粒酶催化亚基脱氧核酶对A549/DDP耐药细胞生长的抑制作用,探讨端粒酶作为耐药肿瘤细胞治疗新靶标的可能性。方法 合成针对端粒酶催化亚基mRNA的脱氧核酶,脱氧核酶体外切割端粒酶催化亚基mRNA片段。采用TRAP法检测转染脱氧核酶的A549/DDP细胞端粒酶活性,采用MTT法分别检测脂质体转染脱氧核酶、顺铂及其混合物对A549/DDP细胞生长的作用。结果 端粒酶脱氧核酶在体外可以切割端粒酶催化亚基RNA,并具有剂量依赖关系;转染脱氧核酶可抑制A549/DDP细胞端粒酶活性;端粒酶脱氧核酶0.25umol/L作用72h,A549/DDP耐药细胞生长抑制率可达32.9%,同3mg/L顺铂联合使用时抑制率可达60.5%,两者相互作用指数CDI=0、9。结论 端粒酶催化亚基脱氧核酶可明显降低端粒酶活性,显著抑制人肺腺癌A549/DDP耐药细胞的生长,并且与化疗药物顺铂有协同作用,提示端粒酶有可能成为耐药肿瘤细胞新的治疗靶标。 相似文献
7.
8.
9.
通过构建端粒酶催化亚基(hTERT)启动子调控caspase3基因的真核表达载体,采用RT-PCR、短时转染、MTT、流式细胞和动物实验等研究方法,探讨hTERT启动子调控caspase3基因在端粒酶阳性的瘤细胞中表达的特异性及在体内外的抑瘤作用。结果表明,hTERT启动子调控caspase3基因在端粒酶阳性的瘤细胞HepG2中明显表达,而在正常人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HEL)中未见表达;caspase3的表达能明显对端粒酶阳性的瘤细胞HepG2、HeLa、Glc和A549的增殖产生明显的抑制作用,抑制率为10.5%~37.9%;同时也明显诱导HepG2、HeLa、Glc和A549细胞发生凋亡,凋亡率为15.39%~35.19%;而对端粒酶阴性的正常细胞HEL没有明显的影响。动物实验结果显示,caspase3基因转染对HepG2细胞的体内生长产生了明显的抑制作用。 相似文献
10.
寡核苷酸亲和纯化人端粒酶的研究*郑晓飞王升启邢瑞云朱宝珍孙志贤军事医学科学院放射医学研究所北京100850端粒(telomere)是真核细胞染色体末端的DNA序列,其功能是保持染色体的稳定。端粒DNA的稳定性与细胞的癌变和衰老密切相关。端粒是由RNA... 相似文献