EBV引起人类相关疾病及其影响因素分析

EB病毒（EBV）属疱疹病毒科γ亚科,DNA病毒,是1964年Epstein和Barr在研究非洲儿童恶性淋巴瘤时发现的一种亲人类B细胞[1]。我国人群的感染率较高,人群总感染率近90%,病毒感染后相当部分人可在体内形成潜伏性感染,最终形成慢性感染。EBV所致疾病非常广泛,     

NLRP3、AIM2和CASP1基因在慢性阻塞性肺疾病急性加重发病中的作用

目的: 探讨固有免疫中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、黑素瘤缺乏因子2(AIM2)、半胱天冬酶1(CASP1)基因和白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)炎症因子在慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性发作期(AECOPD)患者体内的表达情况,阐明其作用机制。 方法: 收集健康对照组(12例)和AECOPD患者(20例)的痰液,分别进行痰处理,采用实时荧光定量PCR法检测NLRP3、AIM2和CASP1基因表达水平,通过ELISA法检测痰上清中的IL-1β和IL-18蛋白表达水平。 结果: 与健康对照组比较,AECOPD组患者NLRP3、AIM2和CASP1基因表达分别上调3.83、1.70和2.42 倍,NLRP3、AIM2和CASP1基因表达水平明显增高(P<0.01),AECOPD组患者痰上清中IL-1β和IL-18蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。 结论: NLRP3及AIM2炎性体参与AECOPD的病理过程,其作用机制可能与固有免疫活化有关。     

Th17转录因子RORγt和BATF及Th17相关细胞因子在中性粒细胞亚型哮喘发病中的作用

目的：检测中性粒细胞亚型哮喘（NA）患者痰上清中辅助性T细胞17（Th17）特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）、B细胞转录激活因子（BATF）及外周血中Th17细胞相关细胞因子白细胞介素8（IL-8）、白细胞介素17（IL-17）和白细胞介素22（IL-22）表达水平,探讨其在NA发病中的作用。方法：以56例支气管哮喘患者为研究对象,4.5%生理盐水雾化诱导痰,经细胞MGG染色进行哮喘的炎症亚型分型,分为嗜酸性粒细胞亚型哮喘（EA）组（26例）和NA组（30例）,以常规体检者为健康对照组（NC组,28人）。实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平。空腹抽取各组研究对象肘静脉血10 mL,Ficoll密度梯度离心后分离外周血单个核细胞（PBMC）,ELISA法测定血清中IL-8、IL-17和IL-22蛋白表达水平,流式细胞术检测PBMC中Th17细胞（CD4⁺IL-17⁺细胞）的百分率。结果：与NC组和EA组比较,NA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平均明显升高（P<0.05）;与NC组比较,EA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。与NC组和EA组比较,NA组患者痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与NC组和EA组比较,NA组患者PBMC中Th17细胞百分率均明显升高（P<0.01）;与NC组比较,EA组患者PBMC中Th17细胞百分率差异无统计学意义（P>0.05）。结论：IL-17转录因子RORγt和BATF参与了NA患者气道炎症发生过程,且Th17细胞及其相关细胞因子IL-17和IL-22的异常表达与NA的全身反应有关联。     

大鼠脂肪干细胞与细菌纤维素膜的复合培养

背景:国外一些研究表明细菌纤维素作为组织工程支架材料在组织工程方面有很大的应用潜力,但国内在这方面的报道非常少.目的:以大鼠脂肪干细胞作为组织工程种子细胞,考察其与细菌纤维素复合培养的效果.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-0912008-08在吉林大学约学院生物工程实验中心和吉林大学第一医院耳鼻咽喉-头颈外科研究所完成.材料:细菌纤维素膜由天津科技大学天津市工业微生物重点实验室制备,材料的平均孔径为0.6-2.8μm,孔隙率为90%.方法:取3周龄Wistar大鼠腹股沟部脂肪垫,以Ⅱ型胶原酶消化获得大鼠脂肪干细胞,采用含有体积分数为0.1新生牛血清的DMEM培养液进行培养.将处十对数生长期的细胞,以3.0×108L-1的密度种植于细菌纤维素膜上,采用含有体积分数为0.1新生牛血清的DMEM培养液继续培养,分别于培养的不同时间取细胞-材料复合物,冰冻切片.采用免疫荧光染色方法对生长于细菌纤维素膜上脂肪干细胞的生物学特征进行测定.主要观察指标:①体外培养大鼠脂肪干细胞形态.②苏木精-伊红染色观察脂肪干细胞在细菌纤维素膜上的生长情况.③免疫荧光染色标记蛋白-CD29在复合物上脂肪干细胞中的表达.结果:体外原代培养72 h的脂肪干细胞以长梭形为主,7 d后梭形细胞逐渐增多融合,细胞对数生长期为第3～9天.细胞-支架复合物在培养第10天经苏木精-伊红染色后可见细胞呈单层生长于细菌纤维素膜表面,细胞与细菌纤维素膜接触紧密,未见深入细菌纤维素膜内部生长的细胞.免疫荧光技术分析结果表明,标记蛋白-CD29在细菌纤维素膜上的脂肪干细胞有特异性表达.结论:生长于细菌纤维素膜上的脂肪干细胞不仅能够增殖,而且仍然保持着干细胞的生物学活性.     

毛酸浆果乙醇提取物抗炎作用及其机制研究

目的 观察毛酸浆果乙醇提取物（AEFPP）的抗炎作用,并探索其作用机制。方法 取二甲苯涂于小鼠耳廓制备耳廓肿胀急性炎症模型,将棉花植入大鼠皮下构建棉球肉芽肿慢性炎症模型,观察AEFPP的在体抗炎作用;采用MTT法检测质量浓度为0.25~20.00 mg/mL的AEFPP对RAW 264.7细胞的细胞毒性;质量浓度为0.625、1.250、2.500 mg/mL的AEFPP预处理3 h后,脂多糖（LPS）作用于RAW 264.7细胞制备炎症模型,ELISA法检测上清中肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平;实时定量PCR（qRT-PCR）法检测NF-κB p65 mRNA表达;western blotting法测定NF-κB p65蛋白表达。结果 0.8 g/kg AEFPP可显著抑制小鼠耳廓肿胀率;0.1、0.2、0.4 g/kg剂量组对大鼠棉球肉芽肿具显著的抑制作用,且表现出剂量依赖性;AEFPP在0~3 mg/mL范围内对细胞无明显毒性;另外,0.625、1.250、2.500 mg/mL AEFPP均可显著抑制RAW 264.7细胞上清液中的TNF-α和IL-6的水平;0.625、1.250 mg/mL AEFPP显著抑制NF-κB p65 mRNA及其蛋白的表达。结论 AEFPP具良好的抗炎活性,其作用机制可能与下调p65蛋白的表达和抑制炎症因子TNF-α和IL-6的释放有关。     

芪蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用及其机制

目的：探讨芪蛭降糖胶囊(QJ)对糖尿病大鼠胰岛素抵抗(IR)的作用,阐明其药物作用的分子药理机制。方法：100只Wistar大鼠采用高脂饮食联合注射链脲佐菌素（STZ）的方法复制2型糖尿病大鼠模型。将建模成功大鼠随机分为模型组（DM）,参芪降糖颗粒阳性对照组（SQ）,芪蛭降糖胶囊低（QJL）、中 (QJM)和高剂量组(QJH),同时设立正常对照组（NC）。芪蛭降糖胶囊低、中和高剂量组药物浓度分别为0.34、0.68和1.35 g?kg-1;参芪降糖颗粒药物浓度为0.27 g?kg-1。大鼠建模成功后,给予相应浓度药物干预治疗8周。经药物干预后,应用血糖检测仪及全自动生化分析仪测定大鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（IRI）和脂质代谢相关生化指标,Real Time PCR法测定肝脏组织中胰岛素受体底物1（IRS-1）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）和葡萄糖转运体4（GLUT4）基因的mRNA表达水平,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）和脂联素（ADPN）水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠FBG、FINS和IRI显著升高（P<0.05或P<0.01）;血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白（LDL）水平显著升高（P<0.05）,血清高密度脂蛋白（HDL）水平显著降低（P<0.05）;肝脏组织中IRS-1、PI3K和GLUT4基因的mRNA表达水平显著下降（P<0.05）,血清TNF-α水平显著升高（P<0.05）,血清ADPN水平显著降低（P<0.05）。与模型组比较,芪蛭降糖胶囊低、中、高剂量组及参芪降糖颗粒阳性对照组大鼠FBG和IRI显著降低（P<0.01）;芪蛭降糖胶囊中、高剂量组及参芪降糖颗粒阳性对照组FINS显著降低（P<0.05）;芪蛭降糖胶囊中剂量组及参芪降糖颗粒阳性对照组血清TC、TG和LDL水平显著降低（P<0.05或P<0.01）,HDL水平显著升高（P< 0.05）;肝脏组织中IRS-1、PI3K和GLUT4基因的mRNA表达水平显著上调（P<0.05）;芪蛭降糖胶囊中、高剂量组及参芪降糖颗粒阳性对照组血清TNF-α水平显著降低（P<0.05）,血清ADPN水平显著升高（P<0.05）。结论：芪蛭降糖胶囊具有改善糖尿病大鼠IR的作用,其作用机制与改善糖脂代谢、影响胰岛素信号传导通路有关。     

血栓性疾病个体化用药指导基因芯片试剂盒的制备和效果评价

目的：探讨血栓性疾病（TD）个体化用药指导基因芯片的制备过程,阐明一种快速、高通量检测氯吡格雷和华法林药物代谢基因的方法。方法：根据氯吡格雷药物代谢基因位点（CYP3A4、CYP2C19*17、CYP2C19*2和CYP2C19*3）和华法林药物代谢基因位点（CYP4F2*3、GGCX、VKORC1-2、VKORC1-1、CYP2C9*2和CYP2C9*3）设计相应的探针和引物,制备TD个体化用药指导的基因芯片检测试剂盒。经过DNA提取、PCR扩增、杂交、洗脱和扫描等步骤对基因芯片的灵敏性、重复性和稳定性进行评价。收集3个地区的150例TD受试者样本并进行药物代谢基因检测,以受试者在临床中接受的用药指导及6个月后患者的疾病恢复情况为依据,评价基因芯片试剂盒的有效率。结果：基因芯片检测2种药物的代谢基因均出现良好的杂交信号;芯片检测PCR扩增产物的最低检测浓度为10³ copies·mL^-1;对不同批次的3张芯片及同一批次的10张芯片进行平行测定,符合率为100%;芯片具有稳定性,有效期长达6个月;来源于3个地区的150例TD样本验证基因芯片检测试剂盒的有效率在90%以上。结论：成功制备了高通量检测氯吡格雷和华法林药物代谢基因的TD个体化用药指导基因芯片试剂盒,该方法灵敏度高,重复性好,稳定性强,制备效果优良。     

传统中药联合标准三联疗法治疗幽门螺杆菌诱发的慢性非萎缩性胃炎及其作用机制

目的：以传统中药清胃止痛微丸联合标准三联疗法治疗幽门螺杆菌诱发的慢性非萎缩性胃炎,采用高通量PCR芯片技术检测炎症相关基因的差异表达情况,阐明其作用机制。方法：选取10例慢性非萎缩性胃炎并发幽门螺杆菌感染患者为治疗组,以清胃止痛微丸联合三联疗法对患者进行治疗14d;随机选取健康者10人作为健康对照组。分别于治疗前后采集研究对象的外周血,应用QIAGEN人类抗菌应答PCR芯片进行外周血总RNA检测,分析治疗前后84个炎症相关基因的差异表达情况。结果：筛选出20个炎症相关基因差异表达。与健康对照组比较,治疗组患者治疗前差异表达的20个基因表达水平明显上调（Fold-change > 2）;与治疗前比较,治疗后该20个基因表达水平下调,且11个基因接近健康对照组水平（Fold-change < 2）。差异表达基因中包括NLRP3炎性复合体相关基因,其中治疗组患者治疗前CASP1、IL1B、NLRP3和PYCARD基因表达水平与健康对照组比较明显上调（P < 0.05）,治疗组患者治疗后CASP1、IL1B、NLRP3和PYCARD基因的表达水平与治疗前比较明显下调（P < 0.05）。结论：清胃止痛微丸联合三联疗法治疗幽门螺旋杆菌诱发的慢性非萎缩性胃炎的机制可能是通过抑制慢性非萎缩性胃炎患者NLRP3炎性复合体相关基因的表达,干扰机体与抗菌应答相关的先天性免疫应答,从而起到治疗作用。     

DNA测序技术在不同药物压力下大肠埃希菌耐药性产生机理研究中的应用

目的：对比长时间传代前后细菌对抗生素和抑菌中药敏感性的改变情况,检测某些耐药基因是否发生基因突变。 方法：分别在含有左氧氟沙星和银花泌炎灵片的M-H肉汤培养基中对大肠埃希菌ATCC25922进行200代传代培养,测定最小抑菌浓度（MIC）并与给药前MIC进行对比,以PCR法扩增细菌解旋酶基因（gyrA）和拓扑异构酶Ⅳ基因（parC）,进行测序。结果：与给药前比较,经含左氧氟沙星的培养基中连续传代的大肠埃希菌对左氧氟沙星的MIC明显上升(P<0.01),而经含银花泌炎灵片培养基连续传代的大肠埃希菌对银花泌炎灵片的MIC未出现明显差异(P>0.05)。基因测序结果,只有经左氧氟沙星培养基中连续传代的大肠埃希菌ATCC25922编码parC基因第381位发生突变〖JP2〗,腺嘌呤（A）→胸腺嘧啶（T）,其编码的赖氨酸（127）→天冬酰胺,并在第386位碱基插入胸腺嘧啶（T）;而gyrA基因未见有碱基突变或插入。结论：在特定的环境压力下左氧氟沙星比银花泌炎灵片更容易诱导大肠埃希菌耐药性的产生,而parC基因突变可能是细菌耐药性产生的原因之一。     

大鼠脂肪干细胞与细菌纤维素膜的复合培养**◆

背景：国外一些研究表明细菌纤维素作为组织工程支架材料在组织工程方面有很大的应用潜力,但国内在这方面的报道非常少。 目的：以大鼠脂肪干细胞作为组织工程种子细胞,考察其与细菌纤维素复合培养的效果。 设计、时间及地点：观察性实验,于2007-09/2008-08在吉林大学药学院生物工程实验中心和吉林大学第一医院耳鼻咽喉-头颈外科研究所完成。 材料：细菌纤维素膜由天津科技大学天津市工业微生物重点实验室制备,材料的平均孔径为0.6~2.8 μm,孔隙率为90％。 方法：取3周龄Wistar大鼠腹股沟部脂肪垫,以Ⅱ型胶原酶消化获得大鼠脂肪干细胞,采用含有体积分数为0.1新生牛血清的DMEM培养液进行培养。将处于对数生长期的细胞,以3.0×108 L-1的密度种植于细菌纤维素膜上,采用含有体积分数为0.1新生牛血清的DMEM培养液继续培养,分别于培养的不同时间取细胞-材料复合物,冰冻切片。采用免疫荧光染色方法对生长于细菌纤维素膜上脂肪干细胞的生物学特征进行测定。 主要观察指标：①体外培养大鼠脂肪干细胞形态。②苏木精-伊红染色观察脂肪干细胞在细菌纤维素膜上的生长情况。③免疫荧光染色标记蛋白-CD29在复合物上脂肪干细胞中的表达。 结果：体外原代培养72 h的脂肪干细胞以长梭形为主,7 d后梭形细胞逐渐增多融合,细胞对数生长期为第3~9天。细胞-支架复合物在培养第10天经苏木精-伊红染色后可见细胞呈单层生长于细菌纤维素膜表面,细胞与细菌纤维素膜接触紧密,未见深入细菌纤维素膜内部生长的细胞。免疫荧光技术分析结果表明,标记蛋白-CD29在细菌纤维素膜上的脂肪干细胞有特异性表达。 结论：生长于细菌纤维素膜上的脂肪干细胞不仅能够增殖,而且仍然保持着干细胞的生物学活性。