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用生物反应器培养能表达重组人红细胞生成素的工程细胞,使其达到高密度高表达。方法:先将工程细胞在含有5%胎牛血清的 DMEM-F12培养基中培养,待细胞总数达到 2×10~8个以上时,接种到5 L生物反应器中。用含有血清的培养基培养 7d后转为无血清CHO专用培养基,继续培养 30 d。在整个培养过程中,采用流加的方式连续培养,根据情况随时测定培养基中葡萄糖浓度,使其保持高于0.5g/L,同时监测氨及乳酸盐浓度,避免浓度过高。每日采样测定收获液中红细胞生成素含量与活性,培养结束后,以0.25%胰酶消化载体,待细胞全部脱落后计数细胞总量。 结果:细胞密度达 6×10~6个/ml培养液,表达量约 30 000 IU/ml左右,且表达的红细胞生成素具有较高的生物比活性。结论:在较为适当的培养条件下,利用生物反应器可使工程细胞的培养达到高密度、高表达。 相似文献
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以葡萄球菌肠毒素A(SEA)、B(SEB)中国商陆皂甙(PES)、刀豆蛋白A(ConA)、植物血凝素(PHA)和法波脂(TPA)等六种丝裂原诱导扁桃腺淋巴细胞产生白细胞介素2(IL-2),γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子β(TNF-β),结果表明PHA(100μg/ml)的诱生作用广,效价高,在同一份淋巴细胞中,三者效价均)10μg/ml,与白细胞干扰素(Le-IFN)并用诱生效果更佳;诱生IFN-γ以SEA(0.1μg/ml)最适;诱生TNF-γ以SEB(1μg/ml)为宜。动力学研究表明,以PHA/Le-IFN诱生IL-2与IFN-γ在24小时达高峰,而TNF则于72小时始现高峰。实验表明天然淋巴因子制品,实为多种淋巴因子的混合物,在实用上尚需深入研究。 相似文献
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在 ELISA 基础上结合生物素—亲和素系统建立的 BA-ELISA 法用于定量测定 IL-2。该法以 McAb 作捕捉抗体,生物素化多抗为第2抗体,亲和素化酶起放大与呈色作用。其最小检测浓度2ng/ml,可检测线性范围256~2ng/ml。对其它小分子肽及蛋白制剂等无交叉反应,证明具有较强的特异性。同时对4种组合形式的 ELISA 法进行了 IL-2定量测定的比较,并简要探讨了此方法的影响因素。结果表明 BA-ELISA 法特异、快速,不需特殊条件与设备,适用于 IL-2的检测。 相似文献
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