表达重组人红细胞生成素细胞株的高密度、高表达培养

用生物反应器培养能表达重组人红细胞生成素的工程细胞,使其达到高密度高表达。方法：先将工程细胞在含有５％胎牛血清的 ＤＭＥＭ－Ｆ１２培养基中培养,待细胞总数达到 ２×１０~８个以上时,接种到５ Ｌ生物反应器中。用含有血清的培养基培养 ７ｄ后转为无血清ＣＨＯ专用培养基,继续培养 ３０ ｄ。在整个培养过程中,采用流加的方式连续培养,根据情况随时测定培养基中葡萄糖浓度,使其保持高于０．５ｇ／Ｌ,同时监测氨及乳酸盐浓度,避免浓度过高。每日采样测定收获液中红细胞生成素含量与活性,培养结束后,以０．２５％胰酶消化载体,待细胞全部脱落后计数细胞总量。 结果：细胞密度达 ６×１０~６个／ｍｌ培养液,表达量约 ３０ ０００ ＩＵ／ｍｌ左右,且表达的红细胞生成素具有较高的生物比活性。结论：在较为适当的培养条件下,利用生物反应器可使工程细胞的培养达到高密度、高表达。     

几种丝裂原对白细胞介素-2、γ-干扰素和肿瘤坏死因子的诱生作用

以葡萄球菌肠毒素A（SEA）、B（SEB）中国商陆皂甙（PES）、刀豆蛋白A（ConA）、植物血凝素（PHA）和法波脂（TPA）等六种丝裂原诱导扁桃腺淋巴细胞产生白细胞介素2（IL－2），γ干扰素（IFN－γ）和肿瘤坏死因子β（TNF－β），结果表明PHA（100μg／ml）的诱生作用广，效价高，在同一份淋巴细胞中，三者效价均）10μg／ml，与白细胞干扰素（Le－IFN）并用诱生效果更佳；诱生IFN－γ以SEA（0．1μg／ml）最适；诱生TNF－γ以SEB（1μg／ml）为宜。动力学研究表明，以PHA／Le－IFN诱生IL－2与IFN－γ在24小时达高峰，而TNF则于72小时始现高峰。实验表明天然淋巴因子制品，实为多种淋巴因子的混合物，在实用上尚需深入研究。     

应用BA—ELISA法定量测定IL—2

在 ELISA 基础上结合生物素—亲和素系统建立的 BA-ELISA 法用于定量测定 IL-2。该法以 McAb 作捕捉抗体,生物素化多抗为第2抗体,亲和素化酶起放大与呈色作用。其最小检测浓度2ng/ml,可检测线性范围256～2ng/ml。对其它小分子肽及蛋白制剂等无交叉反应,证明具有较强的特异性。同时对4种组合形式的 ELISA 法进行了 IL-2定量测定的比较,并简要探讨了此方法的影响因素。结果表明 BA-ELISA 法特异、快速,不需特殊条件与设备,适用于 IL-2的检测。