γδ T细胞对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞杀伤作用的实验研究

摘要: 目的探讨体外诱导培养的γδ T细胞对多发性骨髓瘤(MM)细胞的杀伤作用。 方法 采用健康志愿者外周血分离获得外周血单个核细胞(PBMNC),并在1 μmol/L唑来膦酸(Zol)和200 IU/mL重组人白细胞介素-2(IL-2)条件下扩增获得γδ T细胞。采用流式细胞术检测γδ T细胞表型,然后与RPMI 8226细胞共培养。采用CCK-8检测γδ T细胞对RPMI 8226细胞增殖的抑制作用,乳酸脱氢酶(LDH)法检测γδ T细胞对RPMI 8226细胞的杀伤作用,流式细胞术检测RPMI 8226细胞的凋亡率改变,并分别用抗人γδ TCR mAb、抗人NKG2D mAb、抗人CD3 mAb和同型对照IgG mAb封闭γδ T细胞后,作用于RPMI 8226细胞,LDH法检测不同抗体封闭后对RPMI 8226细胞杀伤作用的影响。 结果 体外条件下可成功高效扩增获得γδ T细胞,可抑制RPMI 8226细胞株的增殖并呈一定的量效关系; 不同效靶比(1:1,5:1和10:1)的γδ T细胞作用于RPMI 8226细胞的杀伤率分别为(12.23±1.75)%,(31.11±6.12)%和(43.56±3.29)%; 效靶比为1:1和10:1时,γδ T细胞诱导RPMI 8226细胞凋亡率分别为(38.21±1.98)%和(68.18±2.16)%,明显高于RPMI 8226单独培养组(13.32±1.55)%,差别有统计学意义(P<0.05); 抗人γδ TCR mAb、抗人NKG2D mAb、抗人CD3 mAb和同型对照IgG mAb封闭γδ T细胞后按10:1的效靶比与RPMI 8226混合培养,各组杀伤率分别为(21.54±1.52)%,(29.25±1.51)%,(32.68±0.78)%和(43.0±2.91)%。 结论 体外利用Zol+IL-2刺激培养可高效扩增γδ T细胞,并具有杀伤RPMI 8226细胞的作用,为MM的细胞免疫治疗提供实验依据。